原发免疫性血小板减少症患者血小板表面CD41、CD62P及T淋巴细胞亚群水平变化

张 恒，潘 歆，陈志刚，吴广胜

(石河子大学医学院第一附属医院，新疆石河子832000)

原发免疫性血小板减少症(ITP)是临床上常见的出血性疾病，发病机制尚未完全明确，目前认为，ITP是体液免疫和细胞免疫异常，导致血小板破坏增多、生成减少而最终以外周血血小板减少、皮肤黏膜出血为特征的疾病。血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(CD41/CD61)复合物是血小板主要的膜糖蛋白，ITP患者体内特异性的自身抗体主要针对该复合物［1，2］。CD62P是血小板 α 颗粒膜糖蛋白，又称 P-选择素，它在血小板活化时从α颗粒转到细胞膜上，是血小板活化的灵敏标记物［3］。有文献报道，ITP患者CD62P表达不同程度升高［4］。2012年1月～2013年8月，我们应用流式细胞术(FCM)对ITP患者血小板表面CD41、CD62P的表达情况及T淋巴细胞亚群水平进行检测，并探讨其意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 石河子大学医学院第一附属医院收治的血小板减少患者91例。其中，ITP患者54例(ITP组)，男19例，女35例;年龄15～84岁，中位年龄50岁;诊断均符合文献标准［5］。非免疫性血小板减少患者37例(非免疫血小板减少组)，男18例，女19例;年龄39～101岁，中位年龄62岁;其中急性白血病5例、巨幼细胞性贫血6例、再生障碍性贫血11例、骨髓增生异常综合征13例、骨髓纤维化2例，均经骨髓穿刺或病理明确诊断。正常对照26例(健康对照组)，男9例，女17例;年龄21～75岁，中位年龄53岁，均为体检中心健康体检者，均无特殊疾病史。

1.2 方法

1.2.1 外周血血小板CD41、CD62P检测 采用FCM检测。研究对象均清晨空腹，不扎止血带，大号针管抽取静脉血2 mL，EDTA抗凝，2 h内进行检测。取混匀的全血5 μL加入FCM专用管中，实验管中分别加入5 μL的CD41-FITC和CD62P-PE单克隆抗体，对照管中加入5 μL同型对照荧光抗体。混匀后室温(20～25℃)避光放置20～30 min，加入2 mL PBS混匀后上机检测。通过Partec Flomax软件处理分析，结果以CD41、CD62P阳性表达率表示。

1.2.2 外周血T淋巴细胞亚群检测 采用FCM检测。取100 μL受试者新鲜抗凝全血于FCM专用管中，加10 μL抗人 CD-4FITC/CD-8PE/CD-3PE-CY5单克隆抗体，混匀后室温避光放置20～30 min，固定、溶血后，FCM检测。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计量资料用±s表示，组间比较采用多个样本比较的秩和检验(Kruskal-Walis法)和多个样本两两比较的秩和检验(Nemenyi法)。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血小板表面CD41、CD62P阳性表达率比较见表1。

表1 各组血小板表面CD41、CD62P阳性表达率比较(%，±s)

表1 各组血小板表面CD41、CD62P阳性表达率比较(%，±s)

注:与健康对照组比较，*P ＜0.05;与 ITP组比较，△P ＜0.05

组别 n CD+41 CD+62P ITP 组 54 45.60 ±19.99* 29.16 ±18.81*非免疫血小板减少组 37 65.93±21.89＊△ 26.62±14.97*健康对照组26 92.04 ± 4.35 4.02 ± 2.13

2.2 各组T淋巴细胞亚群检测结果 见表2。

3 讨论

ITP是一种获得性自身免疫性出血性疾病，约占出血性疾病总数的1/3，国外流行病学统计，欧美国家成人ITP年发病率为5～10/10万［1］，儿童ITP年发病率为 1.9～6.4/10 万［6］。目前，ITP 的病因仍不清楚，认为抗体介导的血小板清除、细胞免疫紊乱、T淋巴细胞及细胞因子平衡改变等多种因素参与ITP的发病［7］。临床上 ITP的诊断缺乏“金标准”，需要排除自身免疫性疾病和其他原因所致继发性血小板减少之后才能诊断ITP［8］，故有效的辅助检查成为必要。本研究中，FCM检测结果表明，ITP组血小板表面CD41阳性表达率明显低于非免疫血小板减少组和健康对照组，与常丽贤等［9］结果一致。分析ITP患者血小板表面CD41阳性表达率减低的原因，主要有以下几方面:①ITP患者体内存在抗CD41的自身抗体，自身抗体与CD41的表位结合后，阻止CD41单抗与之结合。②ITP患者血小板活化后，CD41构象发生改变，从而隐藏与CD41单抗结合的抗原表位。③ITP患者巨核细胞功能受抑、发育异常，导致其产生的血小板表达CD41减少。

表2 各组T淋巴细胞亚群检测结果(±s)

表2 各组T淋巴细胞亚群检测结果(±s)

注:与健康对照组比较，*P＜0.05

组别 n CD+3(%) CD+4(%) CD+8(%) CD+4/CD+8 ITP 组 54 63.32 ± 7.30* 32.73 ± 6.41* 26.71 ±5.61* 1.29 ±0.42*非免疫血小板减少组 37 64.02 ±14.90 33.57 ±11.65* 23.60 ±6.85 1.51 ±0.43*健康对照组 26 71.75 ± 9.42 41.68 ± 6.25 22.06 ±4.38 1.95 ±0.37

CD62P作为血小板活化的分子标志物，在静息血小板上表达很少。本研究结果显示，ITP患者血小板表面CD62P阳性表达率比健康对照组高，提示在ITP患者血小板存在一定程度的活化。但本研究ITP组与非免疫血小板减少组CD62P阳性表达率无统计学差异，提示CD62P表达受多种因素影响。高血压、糖尿病、多发性硬化等及危重患者［10～12］都可以出现CD62P的高表达，另外，标本采集、处理等对血小板活化有一定的影响［13］，也会影响CD62P的表达，故不建议将CD62P作为诊断ITP的辅助检测指标。

T淋巴细胞亚群检测结果显示，与健康对照组比较，ITP组CD+3、CD+4T淋巴细胞百分比及CD+4/CD+8均降低，CD+8T淋巴细胞百分比增高，提示细胞免疫参与ITP发病，T淋巴细胞比例失调、免疫耐受丢失，导致B淋巴细胞增殖并激活，产生抗血小板抗体，而破坏血小板可能是其发病机制之一［14］。因而，检测外周血T淋巴细胞亚群水平有助于ITP的诊断及鉴别［15］。

总之，ITP的发病机制复杂，临床诊断缺乏既敏感又特异的方法，仍为排除性诊断。应用FCM检测外周血血小板CD41及T淋巴细胞亚群水平对ITP诊断具有一定的临床价值，而更为有效的实验室诊断方法有待建立。

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