前列腺癌组织中 TGF-β1、Ki-67的表达变化及意义

李丹丹，王迎宾，李 骥，康绍叁，刘 岩，吴 蒙

(1唐山市协和医院，河北唐山063000;2唐山市人民医院;3河北联合大学附属医院;4河北联合大学病理教研室;5唐山市职业技术学院)

前列腺癌是男性常见的泌尿生殖系统恶性肿瘤，其发病率在欧美国家最高，在我国也呈逐年上升的趋势。转化生长因子(TGF)-β是一种多肽类细胞因子，是目前已知与肿瘤关系极为密切的代表性细胞因子之一，主要存在形式为TGF-β1，后者对不同细胞产生不同的生物学效应，即促进或抑制细胞生长［1］。在正常上皮组织中，TGF-β1具有抑制细胞增殖作用［2］，但在恶性肿瘤中却可通过促进肿瘤血管生成调节细胞外基质状态、诱导肿瘤细胞上皮—间质转化、抑制免疫功能，进而促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移［3～5］。Ki-67 是增殖细胞核抗原，可以反映肿瘤细胞的增殖活性。2013年5月，我们采用免疫组化法检测了前列腺癌组织内TGF-β1及Ki-67的表达变化，旨在进一步探讨前列腺癌的发生、发展及侵袭转移机制。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2005～2010年于我院手术治疗的前列腺患者50例，年龄59～85岁(平均72.6岁)，术前均未行内分泌治疗、放疗和化疗。均经病理检查确诊为前列腺癌(均为腺癌)，其中病理分级按Gleason评分标准为高分化12例、中分化17例、低分化21例;临床分期按Whitmore-Jewett标准A+B期19例、C期13例、D期18例;有骨转移18例。选择同期行手术治疗的25例前列腺增生(BPH)患者为对照，年龄56～87岁，平均69.8岁。两组均留取手术时切除标本，经10%甲醛溶液固定、常规石蜡包埋。

1.2 主要试剂 即用型兔抗人TGF-β1、Ki-67单克隆抗体、免疫组化染色SP试剂盒购自武汉博士德生物工程公司;即用型DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 TGF-β1及Ki-67检测方法 采用免疫组化SP法。取上述标本4 μm厚连续切片，经二甲苯脱蜡、梯度乙醇脱水后行免疫组化染色。抗原修复采用高温高压修复法，蒸气冒出持续3 min后自然冷却，其后按试剂盒说明书进行DAB显色、苏木素复染、中性树脂封片、显微镜下观察。用PBS取代一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。TGF-β1阳性表达主要位于细胞质、少量位于细胞核，阳性细胞判定标准为胞质呈淡黄色至棕褐色，其中染色强度以无色计0分、淡黄色计1分、棕黄色计2分、棕褐色计3分，阳性细胞数 ＜5%计0分、5%～25%计1分、26%～50%计2分、﹥50%计3分，上述两项得分之和≥3分判为阳性染色、＜3分者判为阴性染色。Ki-67阳性表达位于细胞核，呈棕色颗粒状，任选5个高倍视野、计数100个肿瘤细胞中阳性细胞所占百分比，即为Ki-67标记指数。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理。计量资料以±s表示，比较用成组t检验;计数资料的比较采用χ2检验或Fisher确切概率法;TGF-β1与Ki-67的相关性分析采用Mann-Whitney U检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TGF-β1、Ki-67在前列腺癌组织及 BPH 组织中的表达 前列腺癌组织及BPH组织中TGF-β1阳性表达者分别为35 例(70.00%)、6 例 (24.00%)，两者阳性率比较，P ＜0.01(χ2=14.231);两组织中Ki-67 标记指数分别为 20.26 ±9.15、3.80 ±2.18，两者比较，P ＜0.01(t=-8.843)。

2.2 TGF-β1、Ki-67 表达与前列腺癌临床病理参数的关系 TGF-β1表达与前列腺癌分化程度、临床分期及骨转移均有关，P 均 ＜0.05(χ2值分别为7.059、4.402、4.778);Fisher确切概率法显示，高、低分化者比较P＜0.05。Ki-67标记指数与前列腺癌分化程度(t值在高、低分化者13.828，高、中分化者为-7.227 ，中、低分化者为 -9.005)、临床分期(t值为-9.553)及骨转移(t值为6.310)均有关，P均＜0.01。详见表1。

表1 TGF-β1、Ki67表达与前列腺癌临床病理参数的关系

2.3 前列腺癌组织中TGF-β1与Ki-67表达的相关性 前列腺癌组织中TGF-β1阳性和阴性表达者的Ki-67标记指数分别为 24.57 ±7.05、10.2 ±4.18，Mann-Whit-ney U 检验显示，Z=-5.141(P＜0.01)。

3 讨论

TGF-β是一种由112个氨基酸组成的同源二聚体蛋白，为调节细胞生长和分化的细胞因子超家族成员。几乎所有的正常细胞和肿瘤细胞均能分泌TGF-β，后者在体内通过自分泌和旁分泌作用广泛参与机体的各种生理病理过程。目前，在哺乳动物中仅监测到 TGF-β 的三种不同亚型，即 TGF-β1、TGF-β2和 TGF-β3，其中 TGF-β1是主要存在形式，其相关研究也最多。研究［6］发现，TGF-β1可对肿瘤表现出相反作用，其在肿瘤发生早期可通过阻断细胞自G1期进入S期抑制肿瘤细胞生长，在肿瘤晚期则可通过刺激血管生成、促进细胞扩散、抑制免疫及合成细胞外基质等促进肿瘤的生长、浸润及转移而表现出恶性特征。Hsing等［7］将 TGF-β1作用于体外培养的前列腺细胞，结果发现TGF-β1具有直接诱导前列腺上皮细胞调亡的作用。另有研究［8］发现，TGF-β在前列腺癌的发生、发展中具有双重作用，其可抑制正常前列腺上皮和早期前列腺癌细胞的增殖，而在前列腺癌进展期则可促进肿瘤的侵袭、转移。Ki-67是一种与细胞周期相关的蛋白质，其在正常组织中不表达、在多种肿瘤细胞中高表达，其功能与有丝分裂密切相关(但确切机制尚不清楚)，目前已经被广泛用作肿瘤细胞增殖情况的判断指标。本研究显示，前列腺癌组织中TGF-β1阳性表达率及Ki-67标记指数均显著高于BPH组织。提示前列腺癌的发生可能与TGF-β1过表达引起细胞增殖与凋亡失衡、细胞生长失去控制后癌变密切相关。

研究［9］发现，半数以上前列腺癌患者的血浆TGF-β1浓度升高与前列腺癌浸润、精囊腺累及、淋巴转移相关;TGF-β1可促进前列腺癌细胞的生长、增加前列腺癌的侵袭能力［10，11］。此外，TGF-β1与信号调节蛋白可促进癌细胞的骨转移［12］，而当骨组织被吸收溶解时从骨基质中释放出来，进一步为肿瘤细胞的生长和定植提供营养［13］。Ki-67标记指数与肿瘤细胞的增殖及肿瘤的临床分期、转移、预后密切相关［14］。本研究结果显示，TGF-β1表达和Ki-67标记指数均随前列腺癌分化程度降低、临床分期进展及骨转移的出现而增高，且二者在前列腺癌组织中的表达具有相关性。提示TGF-β1表达越高，前列腺癌细胞的增殖能力越强;在进展期的前列腺癌组织中，TGF-β1可促进癌细胞增殖及肿瘤的临床进展。

综上所述，前列腺癌组织中TGF-β1和Ki-67表达上调，此在前列腺癌的发生、发展、侵袭转移中具有重要作用。

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