胰腺癌患者血清Dickkopf-1水平检测及其临床意义

周 颖，许琦华，康艺苹，杨振熙

(上海市第七人民医院，上海200137)

胰腺癌临床表现隐匿，缺乏特异表现，多数病例 发现时已属晚期，仅10%～15%的患者确诊时尚有手术机会，但手术难度大、根治性切除率低、复发率高，5年生存率＜5%［1］。近年来，寻找与胰腺癌相关的新的血清肿瘤标志物成为研究热点。Dickkopf-1(DKK-1)是一种分泌型糖蛋白，是Wnt/β-catenin信号通路的拮抗剂，在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用［2，3］;为探讨其诊断胰腺癌的价值，我们于2010年5月～2013年6月进行了如下研究。

1 资料和方法

1.1 临床资料 我院同期收治的50例胰腺癌患者(胰腺癌组)，其中男31例，女19例，年龄34～93(65.04±13.55)岁。23例经细胞学和(或)组织学检查确诊，27例经影像学检查和随访确诊。临床分期(UICC分期)Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ～Ⅳ期34例;均无其他脏器严重疾患及其它恶性肿瘤史，采血前均未接受放化疗及手术治疗。另取同期50例健康体检者作为对照组，其中男27例，女23例，年龄21～69(53.42±10.66)岁。本研究方案通过上海市第七人民医院伦理委员会审批，所有患者受检前签署知情同意书。

1.2 血清DKK-1及 CA19-9表达检测 采集两组清晨空腹外周静脉血10 mL，不加抗凝剂，待血液凝固后以2 000 r/min离心20 min，取上清液，置于-80℃低温冰箱待检，以ELISA法行血清DKK-1检测(＞22.5 μg/L 判为阳性，≤22.5μg/L 为阴性);以电化学发光法行CA19-9检测(＞39 U/mL判为阳性，≤39 U/L为阴性)，计算DKK-1、CA19-9阳性率及DKK-1+CA19-9阳性率。

1.3 DKK-1及CA19-9诊断胰腺癌的价值 计算DKK-1、CA19-9及DKK-1联合CA19-9诊断胰腺癌的敏感度、特异度和准确性。敏感度=真阳性例数/(真阳性例数+假阴性例数);特异度=真阴性例数/(真阴性例数+假阳性例数);准确性=(真阳性例数+真阴性例数)/(真阳性例数+假阴性例数+真阴性例数+假阳性例数)。

1.4 统计学方法 应用SPSS15.0统计软件，计量数据以±s表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清DKK-1、CA 19-9表达 胰腺癌组及对照组血清 DKK-1 水平分别为(31.24 ±18.18)、(14.86±4.71)μg/L，P ＜ 0.05;DKK-1 阳性率分别为52%、8%、P＜0.01。胰腺癌组及对照组血清 CA 19-9水平分别为(375.28 ± 363.17)、(13.97 ±13.21)U/mL，P ＜ 0.05;CA 19-9 阳性率分别为78%、16%;P ＜0.01。DKK-1+CA 19-9阳性率分别为90%、22%。

2.2 血清DKK-1、CA 19-9对胰腺癌的诊断价值DKK-1、CA19-9、DKK-1+CA19-9诊断胰腺癌的敏感度、特异度和准确性见表1。

表1 DKK-1、CA 19-9及二者联合诊断胰腺癌的敏感度、特异度及准确性

3 讨论

提高早期诊断及监测术后复发和转移，是提高胰腺癌综合疗效的关键。近年来，各种血清肿瘤标志物的临床应用价值受到临床关注。目前临床上常用于胰腺癌的血清标志物有CA19-9、CEA、CA125等，其中CA19-9是胰腺癌最为常用的标志物，主要用于疗效观察、病情进展判断和复发的监测，但早期诊断的敏感性和特异性不高［4～6］;同时，CA19-9 的表达依靠Lewis抗原，而人群中5%～10%的个体该抗原为阴性，即使进展期胰腺癌亦无法合成CA19-9［6］。因此寻找与胰腺癌相关的新的血清肿瘤标志物成为目前的研究热点。

DKK-1是一种分泌性蛋白，由 Glinka等［7］于1998年首次在两栖动物非洲蟾蜍胚胎细胞中发现。人类DKK-1基因位于染色体10q11，其编码蛋白是一种Wnt信号通路拮抗剂。除在胚胎发育中起关键调控作用外，DKK-1对维持成体组织细胞增殖、分化、凋亡的动态平衡亦至关重要，并能在一定条件下诱导肿瘤细胞增殖、分化失控，在肿瘤的发生、发展过程中起重要作用。既往研究表明DKK-1在胰腺癌细胞株及组织中高表达，参与了胰腺癌的发生、发展并促进其浸润性生长，可作为一种新的胰腺癌生物学标记物［8，9］。文献报道血清DKK-1水平在部分些恶性肿瘤患者血清中升高，并与不良预后相关［10～15］。

近年研究发现，Wnt/β-catenin信号通路和DKK-1异常参与了胰腺癌的发生和发展。Pasca等［16］应用基因芯片技术分析了胰腺导管腺癌中Wnt信号通路相关基因的活化情况，发现DKK-1表达显著高于正常胰腺组织。Takahashi等［8］检测了43株人恶性肿瘤细胞株，发现所有胰腺癌细胞株中DKK-1表达均持续显著上调;手术切除的胰腺癌组织中DKK-1亦呈过表达，23例胰腺导管腺癌组织中的DKK-1 mRNA水平显著高于相应非癌组织;敲除DKK-1基因可减低胰腺癌细胞株SUIT-2的迁移活性及其转移性亚株S2-CP8的生长和侵袭能力。DKK-1在胰腺癌内镜超声引导下细针抽吸(EUSFNA)标本中的阳性表达率为70.8%，细胞学、组织学联合DKK-1检测可提高胰腺癌诊断的敏感性和特异性［9］。由此推测DKK-1可能参与了胰腺癌的发生、发展并可促进其浸润性生长，可作为一种新的胰腺癌生物学标记物。

本研究结果显示，胰腺癌组血清DKK-1水平及阳性率均明显高于对照组，提示血清DKK-1水平有助于胰腺癌的诊断，可作为胰腺癌诊断的肿瘤标志物。诊断胰腺癌时，CA19-9敏感度高于 DKK-1，DKK-1特异度和准确性与CA19-9相比无明显差异;若两者联合检测，则敏感度和准确性均明显提高。

综上所述，血清DKK-1水平可作为临床胰腺癌的辅助诊断指标;血清DKK-1与CA 19-9联合检测有助于提高胰腺癌的诊断水平。但其在胰腺癌早期诊断、疗效预后判断等方面的价值还需要进一步大样本研究证实。

［1］Philip PA，Mooney M，Jaffe D，et al.Consensus report of the national cancer institute clinical trials planning meeting on pancreas cancer treatment［J］ .J Clin Oncol，2009，27(33):5660-5669.

［2］Niehrs C.Function and biological roles of the Dickkopf family of Wnt modulators［J］.Oncogene，2006，25(57):7469-7481.

［3］周颖，李兆申，王东.Wnt信号通路和Dickkopf-1在胰腺癌中的研究进展［J］.胃肠病学，2010，15(12):752-754.

［4］ Locker GY，Hamilton S，Harris J，et al.ASCO 2006 Update of ASCO recommendations for the use of tumor markers in gastrointestinal cancer［J］.J Oncol Pract，2006，24(33):5313-5327.

［5］Boeck S，Stieber P，Holdenrieder S，et al.Prognostic and therapeutic significance of carbohydrate antigen 19-9 as tumor marker in patients with pancreatic cancer［J］.Oncology，2006，70(4):255-264.

［6］楼文晖.胰腺癌的诊断和临床分期［J］.中国癌症杂志，2009，19(8):565-569.

［7］Glinka A，Wu W，Delius H，et al.Dickkopf-1 is a member of a new family of secreted proteins and functions in head induction［J］.Nature，1998，391(6665):357-362.

［8］Takahashi N，Fukushima T，Yorita K，et al.Dickkopf-1 is overexpressed in human pancreatic ductal adenocarcinoma cells and is involed in invasive growth［J］.Int J Cancer，2010，126(7):1611-1620.

［9］周颖，王东，李兆申.内镜超声引导下细针抽吸标本Dickkopf-1检测对胰腺癌的诊断价值［J］.胃肠病学，2011，16(1):7-10.

［10］Yamabuki T，Takano A，Hayama S，et a1.Dickkopf-1 as a novel serologic and prognostic biomarker for lung and esophageal carcinomas［J］.Cancer Res，2007，67(6):2517-2525.

［11］Jiang T，Wang S，Huang L，et al.Clinical significance of serum DKK-1 in patients with gynecological cancer［J］.Int J Gynecol Cancer，2009，19(7):1177-1181.

［12］Sheng SL，Huang G，Yu B，et al.Clinical significance and prognostic value of serum Dickkopf-1 concentrations in patients with lung cancer［J］.Clinical Chemistry，2009，55(9):1656-1664.

［13］Shen Q，Fan J，Yang XR，et al.Serum DKK1 as a protein biomarker for the diagnosis of hepatocellular carcinoma:a large-scale multicentre study［J］.Lancet Oncol，2012，13(8):817-826.

［14］Jiang T，Huang L，Zhang S，et al.DKK-1 in serum as a clinical and prognostic factor in patients with cervical cancer［J］.Int J Biol Markers，2013，28(2):221-225.

［15］Lee HS，Lee HE，Park do J，et al.Clinical significance of serum and tissue Dickkopf-1 levels in patients with gastric cancer［J］.Clin Chim Acta，2012，413(21):1753-1760.

［16］Pasca di Magliano M，Biankin AV，Heiser PW，et al.Common activation of canonical Wnt signaling in pancreatic adenocarcinoma［J］.PLoS One，2007，2(11):1155.