范玲玲,侯明星,都义日,丁翠霞,钟海燕
(内蒙古医科大学第一附属医院,呼和浩特010050)
小肠是目前已知对缺血再灌注(I/R)最为敏感的组织之一[1];I/R损伤引起的大量氧自由基释放是肠黏膜屏障损伤的重要原因。乌司他丁是一种新型酶抑制剂,可抑制多种蛋白酶活性、稳定溶酶体膜、清除氧自由基、抑制炎性介质释放[2~4]。2013年1~6月,我们观察了乌司他丁对肠I/R损伤大鼠血清超氧化物歧化酶 (SOD)活性和脂质过氧化作用产物—丙二醛(MDA)水平的影响,现分析结果,探讨乌司他丁对肠I/R的保护作用及其机制。
1.1 肠I/R模型制作 将84只健康雄性Wistar大鼠(内蒙古大学动物实验中心提供,体质量200~250 g,于室温21~27℃,湿度50% ±5%条件下饲养)随机分为对照组12只,模型组36只,治疗组36只。模型组及治疗组制作小肠I/R损伤模型:腹腔注射氯胺酮(100 mg/kg)麻醉,常规碘伏消毒后取腹正中切口3~4 cm,钝性分离SMA根部;以血管夹夹闭SMA根部,完全阻断血流60 min,之后放松血管夹,使肠道血流恢复形成再灌注。对照组仅暴露SMA根部,但不夹闭。模型组、治疗组分别于缺血前(夹闭SMA前)30 min尾静脉注射生理盐水2 mL、乌司他丁5.0×104U/kg(广东天普生化医药股份有限公司)。对照组不干预。
1.2 血清SOD活性及MDA水平测定上述制模过程中于再灌注0 min及2、6 h分别取各组(模型组及对照组各取12只)腹主动脉血4 mL,静置10 min后,40 000 r/min离心10 min,移液器取上清液置入无菌Eppendorf管中,-20℃冷冻保存。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性;硫代巴比妥酸(TBA)法测定MDA水平。
1.3 统计学方法 采用SPSS11.0统计学软件行统计学处理。计量资料以±s表示,采用单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。
与对照组比较,模型组及治疗组各时相点SOD活性均显著降低,MDA水平均显著升高;治疗组0 min、2 h、6 h血清 SOD 活性高于模型组(P <0.05),治疗组0 min、2 h MDA水平低于模型组(P<0.05),见表1。
表1 三组各时点血清SOD活性及MDA水平变化(±s)
表1 三组各时点血清SOD活性及MDA水平变化(±s)
注:与对照组比较,#P<0.05;与相应时点模型组比较,*P<0.05
组别 n SOD(U/mL) MDA(nmol/mL)12模型组 36 124.96 ±21.04 5.68 ±1.26 0 min 12 98.49 ±17.48# 7.69 ±1.26#2 h 12 68.52 ±16.46# 8.85 ±1.34#6 h 12治疗组 36 74.16 ±14.21# 8.03 ±2.17#0 min 12 117.68 ±13.24* 6.38 ±1.97*2 h 12 89.54 ±17.84#* 7.10 ±2.11#*6 h 12 76.98 ±13.59#对照组7.18 ±1.98
I/R损伤引起的大量氧自由基释放是肠黏膜屏障损伤的重要原因,机体通过酶系和非酶系统产生氧自由基,后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引起脂质过氧化作用,形成过氧化物(LPO)如丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH-)及新的氧自由基[5~8]。机体在长期进化过程中形成了一系列对抗自由基、防止其损伤的系统,主要包括低分子自由基清除剂及抗氧化酶系统。SOD与MDA均为反映I/R损伤常用的指标,SOD是需氧生物体内的一种含金属离子的酶蛋白,其功能是催化超氧自由基的歧化作用,对机体起保护作用,其活性高低间接反映机体清除氧自由基的能力;MDA是脂质过氧化的代谢产物,其水平可反映氧自由基对组织损伤的程度(本研究模型组再灌注各时点血清中SOD活性显著低于对照组,而MDA水平高于对照组)。
临床上小肠I/R损伤常发生于腹部外伤、肠系膜血管缺血性疾病、失血性休克、感染和小肠移植过程中;其不仅可导致肠道损伤,还可导致远隔器官损伤,甚至引起多系统和器官功能衰竭[9~11]。I/R时富含黄嘌呤氧化酶的肠上皮细胞产生大量氧自由基,引发脂质过氧化,抑制线粒体酶活性,破坏肠黏膜细胞的结构和功能;肠黏膜通透性增高导致肠腔内毒素通过损伤的肠黏膜入血,血中内毒素水平上升;内毒素则可增加肠壁通透性,减少肠血流量,激发“呼吸爆发”,产生更多的氧自由基,形成恶性循环[12,13]。
乌司他丁是从人尿液中分离纯化的蛋白酶抑制剂,属人体内源性抑炎物质。其前体是肝脏合成的inter-α-胰蛋白酶抑制剂。研究证实,乌司他丁对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等多种酶有抑制作用,具有稳定溶酶体和细胞膜及调控炎性介质和氧自由基释放作用;可抑制多种水解酶的活性、稳定溶酶体膜、抑制炎性介质的过度释放及改善微循环和组织灌注[14,15]。
本研究结果显示,治疗组干预后各时点 SOD活性均高于模型组,MDA水平均低于模型组,证实乌司他丁对小肠I/R损伤具有一定的保护作用;其机制可能为提高SOD活性,抑制MDA水平。
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