鼻敏康颗粒对肺气虚变应性鼻炎大鼠模型鼻黏膜中TLR2和TLR4表达的影响

张 伟，毋桂花

（山西中医学院，山西太原 030024）

变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR），是特应性个体接触致敏原后由IgE介导的以递质释放为开端的、多种免疫活性细胞和细胞因子等参与的鼻黏膜慢性炎症反应性疾病，临床主要表现为打喷嚏、流清涕、鼻塞和鼻痒［1］。Toll样受体家族（TLRs）是参与免疫炎症反应的一个关键因素，且认为是介导免疫和炎症反应的主体［2-4］。TLR通过识别其配体激活MyD88-NF-κB信号转导途径而介导天然免疫应答与炎症反应。中医药是较为有效缓解AR症状的药物之一，其疗效已受到广泛关注。本研究通过研究肺气虚AR大鼠模型使用中药复方鼻敏康颗粒后鼻黏膜内Toll样受体 2（TLR2）和 Toll样受体 4（TLR4）的含量变化，探讨中药治疗变应性鼻炎的作用机制以及实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 60只SD健康大鼠，雌雄各半，体重（200±20）g（由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供）。

1.1.2 仪器与药物 烟熏箱（山西中医学院附属医院），红金龙牌香烟（湖北中烟工业有限责任公司），酶标仪。脂多糖（LPS）（美国 Sigma公司，批号：L8880），卵清白蛋白（OVA），氢氧化铝粉末，氯雷他定片，鼻敏康颗粒，大鼠TLR2试剂盒，大鼠TLR4试剂盒。

1.2 实验方法

1.2.1 肺气虚AR大鼠模型的建立 肺气虚模型的建立：60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氯雷他定组和鼻敏康组，每组15只，参照文献［5-6］建立肺气虚模型。具体步骤如下：除空白组外，第1天、第14天分别在各组大鼠气管内注入LPS 200μg/200μL，第2天至第13天和第15天至第28天每日上午在容积为72L的烟熏箱内熏5%红金龙牌香烟0.5h，以大鼠出现活动量减少，拱背蜷卧，体质量增幅减低，呼吸急促，咳嗽频作，撮毛，食量减少，行动迟缓现象为造模成功。AR大鼠模型建立：参照文献［7-8］在肺气虚模型基础上建立大鼠AR模型。具体步骤如下：①基础致敏阶段：以卵清蛋白0.3mg、氢氧化铝凝胶30mg为佐剂加生理盐水1mL配成的混悬液对SD大鼠进行腹腔注射基础致敏，隔日1次，共7次。②强化致敏阶段：基础致敏完成后，以3%OVA生理盐水溶液滴鼻，每侧50μL，每日1次进行鼻腔激发，连续应用14d。空白组按同样的方法用生理盐水腹腔注射，然后用生理盐水滴鼻。以大鼠出现抓鼻、喷嚏、流涕等鼻部症状检测造模情况，症状评分总分超过5分为造模成功。评分标准：0分：无喷嚏、抓鼻及鼻分泌物；1分：喷嚏<4个，轻度抓鼻，前鼻孔有鼻分泌物；2分：喷嚏4～10个，频繁抓鼻，鼻分泌物超过前鼻孔；3分：喷嚏>11个，持续抓鼻、摩擦，脸部布满鼻分泌物。

1.2.2 给药 开始造模后29d开始给药，空白组和模型组给予生理盐水，氯雷他定组和鼻敏康组按照人鼠剂量转换，给予大鼠成人等效量的10倍即10g/kg灌胃治疗，每天1次，共7d。

1.2.3 取材与检测 各组大鼠在末次滴鼻后，行10%水合氯醛（0.3mL/100g）腹腔注射麻醉，游离出上颌骨，从鼻中线剪开鼻腔，暴露鼻中隔，剥取鼻黏膜，称取重量，加入PBS缓冲液，迅速放入液氮中保存。用ELASA方法测定TLR2、TLR4。鼻黏膜提取原浆，离心，取上清液作为样品，TLR2和TLR4试剂盒应平衡至室温（20℃～25℃）再试验。

1.3 统计学方法

2 结果

各组大鼠TLR2、TLR4含量比较，结果见表1。

表1 各组大鼠TLR2、TLR4含量比较 （mmol/L，±s）

表1 各组大鼠TLR2、TLR4含量比较 （mmol/L，±s）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.05，3）P＜0.01

组别 n TLR2 TLR4空白组 13 1.4160±7.16808 -10.7018±13.94510模型组 13 8.7712±6.131071） 2.6019±17.564641）氯雷他定组 13 2.5231±5.406272） -8.8827±11.753822）鼻敏康组 13 2.2942±4.420623） -10.3076±12.752933）

由表1可见，与模型组比较，氯雷他定组、鼻敏康组TLR2、TLR4含量降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），且鼻敏康的作用较氯雷他定更明显。

3 讨 论

TLR2、TLR4是人TLRs家族的重要成员。TLR4主要识别革兰阴性菌的LPS，TLR2主要识别革兰阳性菌肽聚糖、脂胞壁酸和脂蛋白等成分。TLRs识别其配体后，激活NF-κB等核转录因子和蛋白激酶，释放炎性介质激活天然免疫；同时还使抗原呈递细胞表达共刺激分子CD80、CD86，而最终启动后续的T细胞、B细胞介导的特异性免疫［9］。许多学者认为TLRs与哮喘、变应性鼻炎等的发病有关，所以研究TLRs在上呼吸道中的表达具有重要意义。

AR属于中医学“鼻鼽”“鼽嚏”的范畴。祖国医学认为肺开窍于鼻，鼻为肺所属，二者关系最为密切。肺气虚弱，不能宣发卫气津液于皮毛，致卫表不固，腠理疏松，风寒之邪易乘虚而入，犯于肺系。对于鼻鼽的病理机制大多数中医学者认为主要是由于肺气虚弱，卫表不固，加之风邪侵袭，邪滞鼻窍所致，其病位主要在肺。肺金受邪，宣降失调，水津不布，津液停聚；肺气虚弱，气不摄津，津液外泄；内外邪浊壅滞于鼻，遂致鼻鼽。鹿道温等指出，对于鼻鼽的中医辨证分型以肺气虚为最多［10］。说明肺气虚证在AR的发病中占据重要的地位。

鼻敏康颗粒是毋桂花副教授的有效经验方，由玉屏风散、苍耳子散加减变化而成，全方药物包括黄芪、防风、白术、白芷、藿香、陈皮、五味子、蝉蜕、细辛、桑白皮、川芎、甘草12味中药，有益气固表、芳香通窍之功。本方肺与鼻同治，体现了中医领域整体思维和专病专方的有效结合，大量临床证实，对于整体上表现为肺气虚的过敏性鼻炎症状者，有良好的疗效。

本实验研究结果表明，模型组大鼠鼻黏膜中TLR2、TLR4含量较正常组显著增多，提示造模成功。与正常组相比，模型组TLR2和TLR4表达升高，提示变应性鼻炎的发病机制与TLR2、TLR4表达的升高有关。用鼻敏康颗粒处理大鼠，能使大鼠鼻黏膜中TLR2、TLR4含量明显减轻。与氯雷他定组比较，鼻敏康颗粒组TLR2、TLR4含量相对减少。可见，鼻敏康颗粒对变应性鼻炎有肯定的疗效，并略优于西药氯雷他定。其机制可能与其能降低鼻黏膜内TLR2、TLR4的含量有关。

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［10］鹿道温，汪明辉，赵畔波.变态反应的中医辨证分型与变态反应学指标的相关性研究［J］.中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志，1996，4（3）：112.