三种不同来源精子行卵胞浆内单精子注射临床结局的比较

张丹+谭丽+赵冬梅

【摘要】 目的：比较三种方法获得的精子行卵胞浆内单精子注射的临床结局。方法：回顾性分析笔者所在医院2011年1月-2012年12月374个卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）治疗周期的妊娠结局，依据精子来源不同分为三组：射出精液组（A组），经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精子组（B组），供精组（C组），比较三组的受精率、卵裂率、优质胚胎率和临床妊娠率。结果：A组的优胚率高于C组（P<0.017），三组患者的受精率、卵裂率、临床妊娠率比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：精液、附睾或睾丸精子、供精行ICSI助孕的结局相近。精子的成熟度、精子的冷冻可能并不影响最终的妊娠率。

【关键词】 卵胞浆内单精子注射； 射出精液； 附睾睾丸精子； 供精； 临床妊娠率

Comparison of Clinical Outcomes of Intracytoplasmic Sperm Injection Using Three Different Sources of Sperm/ZHANG Dan，TAN Li，ZHAO Dong-mei.//Medical Innovation of China，2014，11（32）：011-013

【Abstract】 Objective：To compare the clinical outcomes of intracytoplasmic sperm injection （ICSI） using the three different sources of sperm.Method：374 intracytoplasmic sperm injection （ICSI） treatment cycles were analyzed retrospectively in our center from January 2011 to December 2012.They were divided into three groups according to the sperm from different sources： ejaculate group （A group）， percutaneous puncture epididymis and testicular sperm group （group B）， donor sperm group （group C）.Fertilization rate，cleavage rate， excellent embryo rate and clinical pregnancy rate of the three groups were compared.Result： The excellent embryo rate of patients in group A was higher than group C（P<0.017）， difference of patients fertilization rate， cleavage rate， clinical pregnancy rate in the three groups was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion：Semen， epididymal or testicular sperm，donor sperm for ICSI outcome is similar to assisted reproductive.Maturity sperm and frozen sperm may not affect the final pregnancy rate.

【Key words】 Intracytoplasmic sperm injection； Ejaculate； Epididymal testicular sperm； Donor sperm； Clinical pregnancy rate

First-authors address：The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450014，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.32.004

不孕症夫妇中大约30%是男方因素导致不育而就诊的，而其中无精子症的发病率高达10%～15%[1]。卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术是治疗男性不育的有效方法[2]，经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精子及供精为无精子症患者获得后代提供了可能。本文对比射出精液、经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精子、供精行ICSI助孕的结局，分析不同来源的精子对最终妊娠结局的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 对笔者所在医院2011年1月-2012年12月374个卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）治疗周期的妊娠结局进行分析，不育原因是严重少弱畸精子症、无精子症。依据精子来源不同分为三组：射出精液组（A组），308个周期；经皮附睾穿刺和经皮睾丸穿刺取精子组（B组），41个周期；供精组（C组），25个周期。所有无精子症患者进入治疗周期前进行附睾穿刺或睾丸活检，以明确附睾或睾丸内有无活动精子。若有活动精子则用附睾或睾丸穿刺所获精子，若无活动精子及不动精子则采用精子库中精子，入组的供精组患者当天解冻处理后的精子活率密度均符合ICSI标准。拟定ICSI标准为：男方3次精液常规检查至少有2次以上符合以下任一标准：（1）严重少精症：一次射精的活精子密度≤2×106/mL；（2）少弱畸精症：精子密度>2×106/mL，但是<20×106/mL，其活动率<40%，同时a+b级运动精子<20%，或形态正常精子<15%；（3）弱畸精症：精子密度≥20×106/mL，按严格标准进行精子形态检查，形态正常精子<10%，或a+b级运动精子<5%；（4）精液处理后活动精子密度<5×106/mL。endprint

1.2 方法

1.2.1 常规超排卵 采用促性腺激素激动剂（GnRHa）进行降调节，用FSH或HMG促超排卵，至2个以上卵泡直径≥18 mm，肌注hCG10 000单位或艾泽250 μg，36～38 h行阴超介导下经阴道取卵术。

1.2.2 精液精子获取 射出精液放入37 ℃、5% CO2 培养箱中待用，液化后，采用梯度离心法进行处理。

1.2.3 PESA或TESA获取精子 患者取仰卧位， 常规消毒铺巾后， 以1%盐酸利多卡因行局部麻醉。用7号输液针头连接10 mL注射器吸取培养液约1 mL，左手固定一侧附睾、睾丸， 右手持输液针经皮穿刺附睾， 持续施加负压抽吸， 同时缓慢后退，直至有淡黄浑浊附睾液体抽出，将抽出的附睾液放入培养皿中，在倒置显微镜下寻找活动的精子。如未抽出液体或未找到活动精子，则穿刺对侧附睾。如仍未找到活动精子，则行TESE。TESE获取精子时麻醉方法同上，固定一侧睾丸后用注射器经皮穿刺睾丸抽吸，将抽吸出的曲细精管置于培养皿中，用注射器针头撕碎曲细精管，倒置显微镜下寻找活动的精子。PESA或TESA获取精子的处理采用直接离心法，获得的沉淀备用。

1.2.4 供精 PESA或TESA未获取精子及有供精指征的患者，取卵当天将供精进行37 ℃水浴复温后采用梯度离心法处理。

1.2.5 受精、移植及临床妊娠情况的判定 取卵后3～4 h行ICSI，受精后16～18 h观察双原核以确定是否正常受精。取卵后第3天根据患者的年龄和治疗周期数选择评分最高的1～3个胚胎进行移植。移植后14 d测血β–hCG 阳性，移植后30 d腹部B超显示可见孕囊确定临床妊娠。

1.3 统计学处理 应用SPSS 17.0统计软件进行分析。计量资料采用（x±s）表示，比较应用方差分析，计数资料的比较采用 字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组临床资料的比较 三组患者的年龄、不孕年限、Gn用量、Gn天数、移植胚胎数比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

2.2 三组受精率、卵裂率、优胚率及妊娠率的比较 三组患者的受精率、卵裂率比较差异无统计学意义（P>0.05），临床妊娠率从数据上看B组和C组略高于A组，但差异无统计学意义（P>0.05）。A组、B组的优胚率要高于C组，经过多行多列卡方检验显示三组差异有统计学意义（P<0.05），进一步进行两两组之间的比较，发现A组与C组比较差异有统计学意义（P=0.017）。

3 讨论

随着辅助生殖技术的不断发展，1992年卵胞浆内单精子注射（ICSI）技术诞生，该技术为治疗男性因素导致的不育症提供了有效的方法[2]。根据患者的病情，对于梗阻性无精子症的男性可从附睾或睾丸获取精子行ICSI助孕，获得自己的血亲后代[3]。若无法从附睾或睾丸获得精子者则需采用供精试管婴儿术助孕。但精液精子、附睾或睾丸精子、供精精子行ICSI治疗的临床结局如何，是目前普遍关注的问题。

Bukulmez等[4]比较射出精子组、附睾精子组、睾丸精子组的ICSI结局，结果各组间无显著性差异。研究者认为梗阻性无精子症患者应优先使用附睾精子行ICSI，并提出男性的配子可能会影响胚胎的发育潜能。Dozortsev等[5]则认为附睾精子组的受精率比睾丸精子组高，睾丸精子比附睾精子形成的胚胎有更好的发育潜能。有文献报道冷冻精子复苏后会增加精子的DNA损伤[6-7]，影响精子的DNA完整性[8-9]。Bungum等[10]研究认为ICSI可绕过精子DNA损伤给精子和卵母细胞受精时带来的损害。国内有文献报道不同来源的精子对结局没有明显影响[11-12]。本研究与其结局一致。

本研究显示三组患者的受精率、卵裂率差异无统计学意义，不同的精子来源对ICSI操作后卵子的受精及卵裂无影响。可能由于ICSI技术直接将精子注入到卵母细胞内，形成受精卵，对于精子的受精能力要求较低。即使是冷冻复苏后的精子，通过ICSI技术也不会影响精卵的结合。Bukulmez等[4]认为一旦受精完成后，胚胎的发育与精子的来源无关。本研究也显示出三组患者的卵裂率没有差异。但射出精子组的优胚率从数据上看高于附睾或睾丸组和供精组，附睾或睾丸组高于供精组，三组差异有统计学意义（P<0.05）。进一步作两两比较时，显示射出精子组与供精组差异有统计学意义（P<0.05），虽然附睾或睾丸组的优胚率从数据上看高于供精组，但进一步比较后显示差异无统计学意义。射出精子组的优胚率从数据上看高于附睾或睾丸组，可能由于附睾或睾丸组的精子来源和分离较之射出的精子困难，且ICSI操作过程中要尽量寻找较好的精子进行注射导致操作时间相对较长，致使卵子在外暴露的时间延长，故其优胚率低于射出精子组。有文献报道供精的精子行ICSI后优胚率低于新鲜精子组[13]。本研究也显示出供精组的优胚率低于射出精子组。可能在精子的冷冻过程中损伤了精子的核染色质，中心体，影响了胚胎的正常分裂。但仍需要大样本的研究进行进一步证实。

本研究临床妊娠率从数据上看B组和C组略高于A组，但差异无统计学意义，与国内的部分研究相一致。附睾或睾丸组和供精组的妊娠率在数据上高于射出精子组，可能是由于这两组患者的女方通常都具有正常的生育能力，其内膜拥有正常的允许胚胎着床的能力，但差异无统计学意义。说明只要能获得一定数量的可移植胚胎，不同来源的精子对ICSI结局无明显影响。综上所述，本研究认为只要能够获得足够数量质量较好的胚胎，无论是射出的精子、还是附睾或睾丸精子、供精的精子，对ICSI助孕结局均无明显影响。

参考文献

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（收稿日期：2014-05-08） （本文编辑：石亚飞）endprint