依达拉奉对脑出血大鼠SOD及MDA的影响

陆红　朱锦莉

[摘要] 目的 探讨依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织SOD及MDA的影响。方法 选SD大鼠90只，随机分成3组，每组30只，分别为假手术组、脑出血组及依达拉奉治疗组。将大鼠自体血注入尾状核制成脑出血模型；用黄嘌呤氧化法检测神经细胞SOD含量，改良的硫代巴比妥酸法测定MDA含量。结果 脑出血组与假手术组比较SOD活性显著降低，而MDA含量增加（P<0.05），依达拉奉治疗组与脑出血组相比，神经细胞SOD含量明显增高（P<0.05），而MDA含量减低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 依达拉奉具有清除自由基作用，该作用与增加细胞SOD含量，抑制脂质过氧化过程有关。

[关键词] 依达拉奉； 脑出血；自由基； SOD；MDA

[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）05（c）-0035-02

[Abstract] Objective To investigate the effect of edaravone on SOD and MDA in brain tissue around the hematoma of rats with cerebral hemorrhage. Methods 90 SD rats were chosen and randomly divided into 3 groups， control group， the cerebral hemorrhage group and edaravone treatment group， respectively， each group of 30 rats. Cerebral hemorrhage model was made by injecting the autologous blood of rats into caudate nucleus. Xanthine oxidation method was used to detect the content of SOD in nerve cells， and improved thiobarbituric acid method was adopted to detect the MDA content. Results Compared with the control group， the SOD activity of the cerebral hemorrhage group decreased significantly， but MDA content increased（P<0.05）； compared with the cerebral hemorrhage group， the SOD content in nerve cells of edaravone treatment group obviously increased， but MDA content decreased， the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Edaravone has the effect of scavenging free radicals， which is related to the increase of cellular SOD content and inhibition of the lipid peroxidation process.

[Key words] Edaravone； Cerebral hemorrhage； Free radicals； SOD；MDA

脑出血（ICH）是指脑实质的血管发生破裂出血，因其发病急、进展迅速以及高致残率和高致死率等特点，被临床医生高度重视。研究证明，急性脑出血后生成大量自由基，造成脑组织不可逆的损伤，导致神经功能障碍加重。依达拉奉是自由基清除剂，临床应用对脑出血具有确切疗效[1]。该实验于2013年5月—2013年10月在辽宁医学院生理实验室完成。通过检测实验大鼠脑出血经依达拉奉治疗后SOD、 MDA含量，观察大鼠脑出血急性期应用依达拉奉治疗后血肿周围脑细胞自由基清除情况，为探讨依达拉奉在脑出血急性期应用提供理论依据。

1 实验动物与药品、仪器

实验动物：90只清洁级SD大鼠，3～4月龄，雌雄不限，重200～300 g，常规室温25 ℃，正常进食、饮水。（辽宁医学院实验动物中心提供，批号033）。实验过程遵循《关于善待实验动物的指导性意见》[2]。药物：依达拉奉注射液（易达生，吉林省博大制药有限责任公司，国药准字：H20051992），SOD、MDA试剂盒（购自南京建成生物工程研究所，试剂为国产分析纯级）。主要仪器：脑立体定位仪（美国Ridge Tool公司）；微量进样器（淄博库仑分析仪器有限公司）。

2 方法

2.1 分组和给药

90只大鼠随机分成假手术组，脑出血组和依达拉奉治疗组，各30只；3组大鼠均为雌雄各半，年龄为3～4个月，假手术组平均体重为（71±2.0）g，脑出血组平均体重为（72±1.5）g，依达拉奉组平均体重为（73±1.4）g，且3组健康状况均良好，正常进食和饮水，无明显差异，具有可比性。治疗组造模后立即尾静脉注射依达拉奉，用量为每次3 mg/kg ， 2次/d。脑出血组造模后立即向大鼠尾静脉注射同等量生理盐水，假手术组不注血，其余方法与脑出血组相同。

2.2 模型的制备

按照Xue[3]所提供的方法制成脑出血模型。在立体定位仪引导下以25 uL/min速度向大鼠右侧尾状核（矢状缝向右旁开3.0 mm，前囟后方0.2 mm，取深度5.8 mm）注入自体尾静脉血50 uL； 2 min内注完；停针10 min。假手术组不注血，其余方法与脑出血组相同。

2.3 按照Longa评分标准进行评分

0分：无神经系统功能缺损的体征；1分：左侧前肢不能完全伸展；2分：爬行时，大鼠向左侧追尾转圈；3分：爬行时，大鼠向左侧倾倒；4分：无自发性活动或伴有意识障碍。神经功能评分等于3分的大鼠入选本实验[4]。

2.4 取材及SOD、MDA测定

各组大鼠均于造模后48 h处死，迅速取针道后脑组织标本称重，将脑组织与生理盐水按1 g∶10 mL比例在冰水中用匀浆机充分匀浆，4 000 r/min离心，15 min后取上清液，配成10%的脑组织匀浆，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，改良的硫代巴比妥酸法测定MDA。

2.5 统计方法

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析及处理。计量资料采用t检验，用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较用方差分析。

3 结果

假手术组和脑出血组相比，SOD含量明显减少，说明SOD活性明显降低，而MDA含量显著增多，表明MDA活性明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；依达拉奉组与脑出血组比较，SOD含量明显增高，差异有统计学意义（t=17.624，P<0.05）。而MDA含量明显降低，差异有统计学意义（t=5.246，P<0.01）。见表1。

4 讨论

脑出血后神经细胞损伤是多种原因综合作用的结果，其中自由基产生是引起神经细胞损伤重要因素之一。依达拉奉亲脂性强，在血脑屏障中的透过率达到60%[5]，具有较强的自由基清除能力。由以上表1可知，在3组中，脑出血组SOD值（57.35±7.56）与假手术组SOD值（70.06±3.98）比较，SOD活性显著降低，而脑出血组MDA值（4.98±0.43），假手术组为（1.31±0.13），相比含量增加（P<0.05），依达拉奉治疗组SOD含量为（65.05±8.96）与脑出血组（57.35±7.56）相比，神经细胞SOD明显增高（P<0.05），而MDA含量，依达拉奉组为（2.24±0.38），脑出血组为（4.98±0.43），明显减低，差异有统计学意义（P<0.05），由此可推断，在脑出血急性期，应用依达拉奉可清除血肿周围的脑细胞自由基，避免脑组织的不可逆损伤，此研究结果与刘春寒 ， 薛慎伍等[6]在关于依达拉奉对慢性脑缺血大鼠神经功能损伤的保护和MDA、SOD的影响中的研究结果相一致，其意义如下所示。

4.1 SOD在3组中的变化及意义

该研究结果显示：脑出血组与假手术组比较SOD活性显著降低， 说明ICH后血肿周围脑组织氧化抗氧化平衡紊乱，有大量自由基产生，可能是清除自由基系统受到消耗或抑制。依达拉奉治疗组与ICH组比较SOD活性显著增加，说明依达拉奉具有清除血肿周围脑组织中自由基，减轻自由基对脑组织的病理损伤作用。

4.2 MDA在3组中的变化及意义

MDA是脂质过氧化的终产物，其含量间接反映细胞受自由基攻击的严重程度。本研究结果显示：ICH 组血肿周围脑组织MDA含量明显高于假手术组，说明ICH后血肿周围脑组织氧化抗氧化平衡紊乱，有大量自由基产生，可能是清除自由基系统受到消耗或抑制。而依达拉奉组血肿周围脑组织MDA含量显著低于ICH组，说明依达拉奉具有抑制血肿周围脑组织中自由基产生，提高自由基清除能力，对抗脂质过氧化作用。

综上所述，依达拉奉具有增加SOD活性，清除自由基、抗脂质过氧化、减轻脑水肿的作用，在脑出血急性期应用效果明显。其可能的作用机制为通过抑制次黄嘌呤一黄嘌呤氧化酶的活性，降低甚至清除患者体内的氧自由基，从而抑制神经细胞发生迟发型损伤，使脑出血患者的神经功能得到改善[7-8]。研究表明，依达拉奉有减轻脑水肿和脑组织损伤程度的作用[9]，其机制也与清除氧自由基，抑制脂质过氧化及脑细胞过氧化作用有关。依达拉奉尚能通过刺激前列环素生成，减少炎性介质白三烯生成，而降低自由基浓度，阻断自由基的级联反应，同时抑制脂质过氧化，阻止脑细胞凋亡，促进神经功能的修复[10]。

该实验仅从依达拉奉清除自由基， 增加SOD活性，减轻脂质过氧化单一角度探讨其作用机制，存在局限性，在实验条件充裕情况下，应进一步研究依达拉奉多种作用机制综合作用结果，为其临床应用提供全面，透彻理论依据。

[参考文献]

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[2] 程津津，任萍萍.学习《关于善待实验动物的指导性意见》后的体会[J].实验动物科学， 2011（3）：78-79.

[3] Xue M，Del Bigio MR. Intracerebral in jection of autologous whole blo- od in rats： time course of inflammation and cell death[J].Neuroscience Le-tters，2000，283：230.

[4] Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et a1.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：84-91.

[5] 刘贵安.依达拉奉治疗急性脑出血的疗效观察[J].中外医学研究杂志，2013，11（7）：25-26.

[6] 刘春寒，薛慎伍.依达拉奉对慢性脑缺血大鼠神经功能损伤的保护和MDA、SOD的影响[J].药学与临床研究，2011（6）：518-520，533.

[7] 屈继波，刘岭.依达拉奉联用尼莫同治疗急性脑梗死临床疗效观察[J].重庆医学，2011，40（33）：3404-3405.

[8] 林昌福，于朝春，齐一龙. 依达拉奉对脑出血大鼠脑组织含水量、肿瘤坏死因子-α含量、血清基质蛋白酶-9水平和超氧化物歧化酶的影响[J].临床神经病学杂志，2012，25（5）：362-364.

[9] 刘西，李建明，林新国.依达拉奉治疗急性重型颅脑损伤的疗效观察[J].白求恩军医学院学报，2011，9（1）：9-11.

[10] 谢行才，李静，郑振雨.依达拉奉联合白蛋白治疗脑出血迟发性水肿29例疗效观察[J].中国实用神经疾病杂志，2013，3（5）：82-84.

（收稿日期：2014-02-11）