越鞠丸中不同工艺的栀子醇提物对小鼠的抗抑郁作用

石文静，周步天，张海楼，陈 刚

(1.南京中医药大学基础医学院，江苏南京，210000)

(2.南京中医药大学基础医学院脑病研究所，江苏南京，210000)

越鞠丸为金元医家朱震亨创立的治疗郁证的代表方剂，最早出现于《丹溪心法·卷三·六郁五十二》中，全方由栀子、苍术、香附、川芎、神曲组成，开创了中医专方防治郁证之先河［1］。栀子见于神农本经，为茜草科植物山栀的果实，性苦寒，无毒。入心、肝、肺、胃经［2］。栀子的化学成分较为复杂，达100多种［3］。栀子从汉代延续至今，记载的炮制方法约有14种之多，但临床上常用的为生栀子、炒栀子、焦栀子，中国药典1995年版中收载的栀子加工炮制品也为上述3种［4］。前期试验研究［5］结果显示，越鞠丸中栀子具有较强的抗抑郁作用。本文采用2种行为绝望小鼠模型，对不同工艺的栀子进行了抗抑郁活性研究，为其活性部位筛选提供实验基础。

1 资料与方法

1.1 实验动物

健康昆明种小鼠，48只，体质量25～30 g，全雄，由上海实验研究所提供。编号scxy－(上海实验研究所)－2012－004。

1.2 实验药物

生栀子、炒栀子、焦栀子(南京轩德堂提供生栀子、炒栀子、焦栀子，批号130702)。不同工艺的栀子(生、炒、焦)各取100 g，放入药物打磨机打碎，置入1 L烧杯中，加95%乙醇到1 L，放磁力搅拌机上浸泡12 h后静置1 h后取上层清液，此过程相同方法重复3次。将3次取得的上层清液过滤后放入旋转蒸发皿蒸发至200 mL后放入56℃的烘箱中烘3 h，保存备用。

1.3 实验试剂和仪器

乙醇为国产分析纯(纯度＞99.7%，批号为20130709);SHZ－Ⅲ循环水式真空泵(南京科尔仪器设备有限公司);旋转蒸发器RE－52A(上海亚荣生化仪器厂);通用隔离箱(上海吉量软件科技有限公司)。

1.4 方法

健康昆明种小鼠48只，放置动物房(25±2)℃，适应环境7 d，自由进食饮水，自然光照，普通饲料喂养，然后按体质量随机分为4组，即CTL组、生栀子组、炒栀子组、焦栀子组，每组12只。

采用慢性不可预知的温和性应激模型(CUMS)进行造模，CUMS抑郁模型的制作包括以下几种不同的应激因子:昼夜节律的调整和光照性质的改变(彻夜光照)、食物饮水的调整、环境的改变(鼠笼倾斜、潮湿垫料、束缚、异物)、游泳。将几种不同的应激因子在实验全程中应用，使动物不能预料刺激的发生。具体安排如下:第1天，禁食、禁水，均持续24h;第2天，空瓶、外来物体，分别持续1 h及24h;第3天，强迫游泳、彻夜光照，分别持续6 min、12 h;第4天，束缚、斜笼(45°)，分别持续2 h及7 h;第5天，禁食、湿笼，均持续24h;第6天，禁水、彻夜光照，分别持续24h及12 h;第7天，空瓶、斜笼，分别持续1 h及7 h。

造模28 d后，CTL组、生栀子组、炒栀子组、焦栀子给予组分别按体质量的1%给予9%生理盐水、4 g/kg的生栀子醇提物、炒栀子醇提物、焦栀子醇提物灌胃。

2 结果

2.1 小鼠悬尾实验(TST)

参照Steru方法［6］略有改动，将单个小鼠尾端(距尾2 cm处)用胶布粘在悬挂钩上面，放入通用隔音箱内，使其成倒挂状态，头部离箱底20 cm。小鼠为了克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间出现间断性不动，显示失望状态。观察6 min，记录后4 min内小鼠不动时间为失望时间。生理盐水作为阳性对照药，与生理盐水对照组比较，生栀子、炒栀子组均有趋势，其中焦栀子组具有显著性差异(P＜0.05)。越鞠丸中各种工艺的栀子醇提物对小鼠悬尾不动时间的影响见表1。

表1 越鞠丸不同工艺的栀子提醇提物对小鼠悬尾不动时间的影响

2.2 小鼠强迫游泳实验(FST)

参照Porsolt方法［7］略有改动。将单个小鼠放入水深5 L烧杯中，水温(25±2)℃，观察6 min，记录后4 min小鼠游泳的不动时间。不动指小鼠在水中停止挣扎，即显漂浮状态，仅有微小的肢体运动以保持头部浮在水面。实验完将小鼠放回笼内。生理盐水作为阳性对照药，与生理盐水对照组比较，生栀子、炒栀子组均有趋势，其中焦栀子组具有显著性差异(P＜0.05)。越鞠丸中各种工艺的栀子醇提物对小鼠强迫游泳不动时间的影响见表2。

表2 越鞠丸不同工艺的栀子提醇提物对小鼠强迫游泳不动时间的影响

3 讨论

由于抑郁症是一个包括了身体与心理异常的疾病，因此对抑郁症的动物模型争议非常大，所以抑郁模型的进一步研究显得尤为迫切。到目前为止，已有20多种方法可以用作抑郁症动物模型的制备，可从生物学、遗传学、社会心理学等各角度来模拟抑郁症的表现。分为应激模型、神经生化功能改变模型、转基因动物模型、孤养或分养模型等［8］。慢性不可预知的温和性应激模型(CUMS)主要模拟了人类抑郁的核心症状即快感的缺乏，同时模拟了其他重性抑郁障碍的症状表现，如运动能力及社会交往能力下降、侵犯攻击能力缺陷、探索行为能力下降、性行为能力下降等［9］。CUMS抑郁模型记录动物模型的抑郁并广泛用于了解抑郁症的病理生理机制。因为它有一个优势遗传模型在密切模仿人类抑郁症。此外，CUMS抑郁模型具有良好的效果，其潜在的三种类型相结合的有效准则如表面效度、结构效度和预测效度，符合抑郁症的动物模型的要求［10］。CUMS抑郁模型具有高度的有效性，并可持续几个月，是目前国外文献中广泛使用的模型。本实验中CUMS抑郁模型的小鼠变得激惹、开笼或触笼时有明显的攻击行为，对新异环境刺激反应淡漠。说明建立的模型有类似抑郁症的行为变化，也佐证了慢性应激抑郁小鼠模型的复制成功［11］。

［1］高巧林，于雷.越鞠丸治疗抑郁症研究近况［J］.山东中医杂志，2007，26(5):355.

［2］田智勇，于培明，许启泰.中药栀子的研究进展［J］.时珍国医国药，2004，15(11):782.

［3］Ji L，Xu Z L，Pan J G，et al.Ana－lysis of naphtha in gardenia fruits by GC －MS.Chin Pharm［J］.中国药学杂志，1993，28:398.

［4］马新，陶巧凤.不同炮制方法对栀子有关成分的影响［J］.中国现代应用药学杂志，1998，15(3):19.

［5］Wenda Xue，Xin Zhou，Nan Yi.Yueju Pill Rapidly Induces Antidepressant－Like Effects and Acutely Enhances BDNF Expression in Mouse Brain［J］.Creative Commons Attribution License，2013，184367(2013):9.

［6］Steru L，Chermat R，Thierry B，et al.The tail suspension test:a newmethod for screening antide － pressantsin mice［J］.Psychopharmacology，1985，85(3):3671.

［7］Porsolt R D，Anton G，Blavet N，et al.Behavioural despair in rats:a new model sensitive to antidepressant treatments［J］.Eur J Pharmacol，1978，47(4):3791.

［8］郭建友，李昌煜，葛卫红.抑郁证动物模型研究进展［J］.中国临床康复，2004，8(10):1932.

［9］秦琴，刘利学.抑郁症动物模型概述及评价［J］.实验动物科学，2010，27(1):54.

［10］Ankur Jindal，Radhakrishnan Mahesh，Shvetank Bhatt.Pharmacology，Biochemistry and Behavior［J］.Eur J Pharmacol，2013，105(2013):63.

［11］闫东升，周小琳，石和元，等.越鞠丸对抑郁症模型小鼠行为学、5－羟色胺及血浆皮质醇的影响［J］.江西中医学院学报，2007，19(2):66.