丹参注射液对实验大鼠系膜增殖及尿IV-C水平的影响

张小方，宋俊香，王 静，云 鹰

(1.黄淮学院，河南驻马店 463000;2.首都医科大学附属复兴医院，北京 100038)

丹参注射液为中药制剂，是治疗系膜增生性胃炎(MsPGN)常用的活血化瘀药，临床应用取得了一定的效果。目前，对丹参治疗MsPGN的研究多局限于血液指标的异常，而针对肾脏组织病理影响的研究报道较少。本实验通过抗Thy-1系膜增生性肾炎大鼠动物模型，从肾脏病理和分子水平初步探讨丹参注射液治疗MsPGN抗凝以外的疗效机制，为丹参注射液用于临床提供更多的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠45只 (由河南省动物实验中心提供)，清洁级，体质量(130±20)g。

1.1.2 药物及试剂 丹参注射液由正大青春宝药业有限公司提供 (规格10 mL/支)，肝素钠购自常州千红生化制药有限公司 (每支规格2 mL/12500单位)。IV-C放射免疫试剂盒购自上海海军医学生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分组及造模 大鼠购回后适应性喂养1周，测定尿潜血及蛋白定性为阴性，随机取9只为空白组。按文献资料制备兔抗大鼠胸腺细胞免疫血清 (ATS)［1］，另外36只均给大鼠尾静脉一次性注射ATS(8 mL/kg)，将已成模大鼠随机分为模型组、肝素组、丹参注射液高剂量组 (丹高组)、丹参注射液低剂量组 (丹低组)，每组9只。

1.2.2 给药 自MsPGN模型制备第1天起，肝素组予肝素钠注射液200 u/(kg·d)，丹高组、丹低组分别予丹参注射液5.6、1.4 mL/(kg·d)，腹腔注射，每日一次，连用14 d。

1.2.3 IV-C的水平测定 造模前及造模后第7天、第14天使用代谢笼收集大鼠12 h尿液标本，放免法测定尿IV-C的水平。

1.2.4 肾标本病理学检查及图像分析 造模后第14天处死大鼠，切除肾组织。肾脏病理切片采用苏木素－伊红(HE)、糖原 (PAS)染色，光学显微镜观察，计算肾小球系膜细胞 (GMC)数。将图像输入HPIAS-1000高清晰医学图像分析系统，鼠标圈定系膜区，计算ECM阳性面积比值 (阳性面积/肾小球总面积)。

2 结果

2.1 各组大鼠尿IV-C水平的变化 造模后一周，各防治组及模型组大鼠尿IV-C水平明显高于空白组 (P＜0.01)，但模型组、丹高组、丹低组、肝素组之间没有差异，提示造模后一周尿IV-C水平虽有明显升高，但一周时各用药组尚不能降低尿IV-C水平。造模后两周，丹高组、肝素组尿IV-C水平明显低于模型组 (P＜0.05)，但肝素组与丹高组之间没有差异，说明高剂量丹参注射液用药两周后虽未能使尿IV-C水平降至正常，但可明显降低尿IV-C水平。见表1。

2.2 丹参注射液对模型大鼠GMC及ECM的影响 模型组GMC数及系膜基质 (ECM)面积比值明显高于空白组(P＜0.01)，而丹高组、肝素组明显低于模型组 (P＜0.01)，提示高剂量丹参注射液与肝素可明显改善肾脏病理，疗效相当。见表2。

3 讨论

本实验采用目前国内外公认的抗Thy-1系膜增生性肾炎模型，病理切片观察示模型组及各防治组与空白组相比GMC数明显增多，ECM增加，同时实验大鼠尿检示IV-C水平明显高于空白组，造模后两周达高峰。这一结果，与国内外研究［2-7］报道一致，即系膜增生性肾炎时，尿中IVC水平随着GMC增殖、ECM积聚程度而递增。以上说明本实验建立的抗Thy-1系膜增生性肾炎模型符合实验要求。

表1 各组大鼠尿IV-C水平的变化 (ng/mL，)

表1 各组大鼠尿IV-C水平的变化 (ng/mL，)

注:与空白组相比，▲▲ P ＜0.01;与模型组相比，★P ＜0.05，★★P ＜0.01

造模前 造模后一周 造模后两周空白组 9 47.65±19.35 44.61±23.23★★ 43.67±22.34组别 动物数/个★★模型组 9 50.53±26.57 89.83±36.59▲▲ 116.92±36.93▲▲丹高组 9 49.61±20.34 95.49±24.38▲▲ 82.63 ±28.03▲▲★丹低组 8 49.71±20.48 106.17±29.04▲▲ 108.17±28.74▲▲肝素组 9 44.73±24.93 80.77±12.88▲▲ 89.69±32.19▲▲★

表2 ECM阳性面积比值及GMC计数比较 ()

表2 ECM阳性面积比值及GMC计数比较 ()

注:与空白组相比，▲▲P＜0.01;与模型组相比，★★P＜0.01

肾小球总面积空白组 9 45.44±8.29★★ 0.12±0.01组别 例数/n 肾小球系膜细胞数/个 ECM/★★模型组 9 88.67±13.17▲▲ 0.26±0.02▲▲丹高组 9 68.44±16.96▲▲★★ 0.16±0.01▲▲★★丹低组 8 82.38±17.58▲▲ 0.24±0.03▲▲肝素组 9 66.00±10.54▲▲★★ 0.15±0.01▲▲★★

丹参注射液是在肾脏疾病中广泛应用的活血化瘀药，且无明显毒副作用，并取得了一定的临床疗效［8］。现代药理研究证实丹参具有抑制凝血及血小板凝聚、激活纤溶、减少血栓形成、改善微循环等作用［9］，修复损伤的血管内膜，从而改善肾脏血供，保护肾脏功能和促进肾脏功能，起到防治并发症的作用［10］。既往研究多侧重于丹参对血液流变学、血小板功能的影响，而从分子生物学和肾脏病理改变角度探讨其对MsPGN影响的报道较少。本实验结果显示，丹参注射液用药一周并不能降低尿IV-C水平，用药两周后高剂量丹参注射液可明显降低尿IV-C水平。丹参注射液可降低尿IV-C水平，明显改善肾脏病理损害，这一结果与相关报道［11-13］一致。以上结果提示丹参注射液防治MsPGN的疗程应不少于两周。丹参注射液的活血化瘀作用除改善血液高凝指标外，尚可通过抑制IV-C的产生，有抑制GMC增生、减少ECM积聚的作用，为丹参注射液治疗MsPGN拓宽了应用范围，有助于指导临床。

肝素虽可减少多种ECM成分的堆积 (如 IV-C、FN等)，抑制糖尿病肾病大鼠的ECM蓄积，减轻肾脏病变［14］，但肝素治疗肾小球疾病在临床中有一定的副作用。有研究发现肝素能够抑制GMC增生，但因其易导致出血，使临床应用受到限制［15］。丹参注射液为纯中药制剂，尚未发现有明显不良反应，且价格低廉，在无检测出凝血指标的情况下使用，具有一定的优势。

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