正交试验法优选黄芩饮片最佳切制工艺

戴衍朋，周 倩，孙立立*，曹玉华，王建刚

(1山东省中医药研究院，山东济南 250014;2山东博康中药饮片有限公司，山东济南 250014)

黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎的功效［1］。黄芩临床应用广泛［2-5］，为清热燥湿，泻火解毒之要药。除中医配方外，还大量用作中成药和提取黄芩素、黄芩苷的制药原料。

黄芩无论是中医处方调剂用还是制备中成药，均是以饮片为原料，黄芩饮片的制备方法，《中国药典》2010年版［1］规定为沸水煮10 min，取出，闷透或蒸0.5 h，切薄片。切制过程中蒸或煮主要是抑制酶对黄芩苷的酶解作用［6-8］。黄芩中的黄芩苷是其主要活性成分［9-13］，具有抗菌、抗病毒、解热、镇痛、降压、利尿、抗肿瘤等多种药理活性，黄芩苷在酶的作用下可发生水解，生成黄芩素，易被氧化为绿色的醌类衍生物［14］，影响黄芩的临床疗效。在高温处理抑制酶活性的同时，也不可避免地使有效成分流失和破坏。为更好地保证饮片质量，在灭酶的同时，需要最大程度的减少有效成分损失。因此本研究采用正交试验法对黄芩炮制工艺进行了优选，通过研究，明确了制备黄芩饮片的各项工艺参数，对于保证黄芩饮片的质量提供了重要的保障。

1 仪器和试药

Waters2695高效液相色谱仪 (Waters公司)，R200D型电子天平 (Sartorius公司)，DHG-9146A电热恒温鼓风干燥箱 (上海精宏实验设备有限公司)，HH-4型数显恒温水浴锅 (金坛市晶玻实验仪器厂)。

甲醇为色谱纯，水为超纯水，乙醇、磷酸等其他试剂为分析纯，黄芩苷 (批号110715-201117，中国药品生物制品检定所)。黄芩药材购自亳州药材市场，经山东省中医药研究院林慧彬研究员鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。

2 黄芩药材加热方法的考察

2.1 样品制备

2.1.1 煮法 取净黄芩药材100 g，投入沸水中，煮10 min，闷透，切薄片，干燥，即得。

2.1.2 蒸法 取净黄芩药材100 g，置已“圆气”的蒸锅内，蒸0.5 h，切薄片，干燥，即得。

2.2 外观性状 照《中国药典》2010年版黄芩饮片【炮制】项下要求对外观性状进行观察，主要包括切片形状，切面颜色和饮片完整情况。

2.3 内在质量 以黄芩中主要有效成分黄芩苷的量作为内在质量评价标准，照《中国药典》收载方法［1］进行测定。

2.3.1 色谱条件 Thermo Syncronis C18色谱柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水-磷酸 (47∶53∶0.2)。检测波长280 nm，体积流量1 mL/min，柱温25℃。

一是强化在评标阶段对虚假材料的甄别。二是坚持增加竞标活动的透明度，同时防范恶意质疑和投诉。三是统一供应商违规行为处罚政策，加大处罚力度。对虚假应标的处罚，监管部门应严格按《中华人民共和国政府采购法》第十三条、第七十七条(一)规定，处以罚款，并列入不良行为记录名单，一至三年内禁止参加政府采购活动。四是推出供应商违规行为的赔偿政策，打击供应商侥幸心理，调动政府采购各参与方追究违规供应商行为的积极性。

2.3.2 对照品溶液制备 取黄芩苷对照品适量，加甲醇适量制成每1 mL含60 μg黄芩苷对照品的溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (过40目筛)，每份 0.3 g，精密称定，加 70%的乙醇40 mL，加热回流 3 h，放冷，滤过，滤液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗涤液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中用甲醇定容至刻度，经0.45 μm滤膜滤过，即得。

2.3.4 测定法 取黄芩苷对照品溶液及各黄芩供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，照上述色谱条件进行测定，计算。

2.4 比较结果 黄芩饮片外观性状和内在质量结果见表1。由表1可知，两种方法制备的黄芩饮片，均未呈现绿色，表明蒸法和煮法均可杀灭黄芩药材中所含酶。但蒸法制备的黄芩饮片在切面颜色和饮片完整性方面均优于煮法，黄芩苷含量亦为蒸法较高，表明蒸的热处理方法优于煮法，更适于黄芩饮片的热处理。

表1 热处理方法对黄芩饮片质量影响Tab.1 Effects of different heating methods on the quality of Scutellaria pieces

3 “圆气”对黄芩饮片质量的影响

取净黄芩药材2份，每份100 g，置蒸锅内，分别以冷水 (不“圆气”)和沸水(“圆气”)蒸0.5 h，然后切薄片，干燥，得黄芩饮片。照“2.2”和“2.3”项下方法对二者进行外观性状和内在质量的比较，结果见表2。

表2 “圆气”对黄芩饮片质量影响Tab.2 Effects of“Yuanqi”on the quality of Scutellaria pieces

由表2可知，不“圆气”方法制备的黄芩饮片，切面略带黄绿色，表明该方法的杀酶效果较差，原因可能是冷水逐渐升温的过程中，黄芩酶尚未破坏，从而导致部分黄芩苷被酶解，进而变绿。黄芩苷含有量低于“圆气”蒸法制备的黄芩饮片。该结果提示，在蒸法处理黄芩药材时，应当在“圆气”后，加入药材处理。

4 正交试验设计优选黄芩切制工艺参数及结果

4.1 正交设计 根据预试验结果，首先确定了黄芩切制时宜采用蒸制的加热方法，在切制过程中影响黄芩饮片质量的主要因素为蒸制时间、切片厚度、烘制温度和烘制时间，因此将该四因素确定为正交试验的主要因素，每个因素分别设定三个水平，以传统质量标准 (外观性状)和内在质量标准 (黄芩苷量)为考察指标，选用L9(34)正交表进行试验。因素、水平设计见表3。

表3 因素水平Tab.3 Factors and levels

4.2 考察指标选择依据及评价标准

4.2.1 传统质量标准 参照《中国药典》2010年版黄芩【性状】项下规定 (类圆形或不规则形薄片。外表皮黄棕色或棕褐色。切面黄棕色或黄绿色，具放射状纹理。)将性状评分标准规定为:切面黄棕色4～5分，黄绿色2～3分，绿色1分，切片完整4～5分，有少量碎片2～3分，碎片多1分。评分结果见表4。

表4 L9(34)正交试验结果和直观分析Tab.4 Results of L9(34)orthogonal test and visual analysis

4.2.2 内在质量评价指标 以黄芩中主要有效成分黄芩苷量作为内在质量评价标准。照“2.3”项下方法进行测定。结果见表4。

4.2.3 综合评分标准 以综合加权评分的方法对各炮制品进行评价，传统质量和内在质量评价指标加权系数均定为0.5，各评价指标加权处理如下:外观性状评分=性状得分/9个样品中最高分×50;黄芩苷量评分=黄芩苷量/9个样品最高含有量×50;综合评分为二者之和;以综合评分为指标进行分析。

4.3 正交试验结果与分析 取净黄芩药材9份，每份100 g，置已“圆气”蒸锅中，照正交设计试验方进行试验。各制备样品进行传统质量和内在质量评分性状评分，结果见表4。

直观分析:由极差 (R)可知，对综合评分影响大小依次为A＞C＞B＞D;对A因素＞＞，对B因素＞＞，对C因素＞＞，对D因素＞＞，可得黄芩最佳切制工艺为 A2B1C1D1。

由表5方差分析可见A因素 (蒸制时间)和C因素 (烘制时间)对试验结果显著性影响。

表5 方差分析Tab.5 Variance analysis

综合直观分析和方差分析结果及实际情况，黄芩最佳切制工艺为A2B1C1D2，即取黄芩药材，蒸制30 min，取出切1～2 mm薄片，40℃烘60 min，即得。

5 工艺验证

取3份黄芩药材，每份500 g，按最佳切制工艺制备3批黄芩饮片，分别进行性状评分以及黄芩苷的定量测定，结果见表6。

表6 工艺验证试验结果Tab.6 Results of confirmatory experiment

结果，制备的3批黄芩饮片外观性状均符合药典标准，黄芩苷含有量平均为11.95%，RSD为2.1%，表明确定的黄芩切制工艺稳定可行。

6 小结与讨论

本实验通过预试验对煮法和蒸法进行了比较，结果，煮法制得的黄芩饮片颜色晦暗，片型不齐整，黄芩苷含有量较蒸法低，推测是由于黄芩粗细质地不同，煮法渗透力不够，受热不均，致杀酶效果不一［15］。同时通过比较发现， “圆气”蒸的方法优于不“圆气”蒸，因此最终确定以“圆气”蒸法作为黄芩的软化切制方法。

根据预试验结果，采用正交试验法对黄芩的切制具体工艺参数进行了优选，以传统外观质量要求和内在质量为指标，采用综合评分法，把黄芩饮片的传统质量与内在质量两方面结合在一起，可较客观反映各因素水平对黄芩饮片质量的影响，优选的最佳切制工艺为:取黄芩药材，蒸制30 min，切1～2 mm薄片，40℃烘60 min，即得。采用优选的炮制工艺制备了3批黄芩饮片，验证试验结果表明，优选的切制工艺稳定可行。

通过正交设计，优选出黄芩切制最佳炮制工艺，对于规范黄芩的炮制工艺，指导企业饮片生产，保证黄芩饮片的质量具有一定的意义。

［1］国家药典委员会.中华人名共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:282.

［2］高学敏.全国高等中医药院校规划教材——中药学［M］.2版.北京:中国中医药出版社，2007:96-97.

［3］章家铨.黄芩、金银花的药理与临床应用［J］.新医学，1975，6(3):155-157.

［4］瞿佐发.黄芩的药理作用及临床应用［J］.时珍国医国药，2002，13(5):316-317.

［5］童静玲.黄芩炮制方法及其临床应用［J］.实用中医内科杂志，2008，22(8):62.

［6］凌庆罗，吕秉森.应用薄层层析法控制黄芩的炮制时间［J］.中成药研究，1980(2):30-31.

［7］于留荣，王孝涛，刘美蓝.黄芩炮制的研究——炮制对粘毛黄芩主要成分的影响［J］.中成药研究，1982(6):16-19.

［8］唐恢天.两种加工方法对黄芩质量影响［J］.中国中药杂志，1991，16(1):29.

［9］冯 鑫，汪长中，汪天明，等.黄芩苷体外对白念球菌凋亡的影响［J］.中成药，2012，34(8):1443-1446.

［10］云 云，汪长中，桂 丽，等.黄芩苷经由TLR4信号转导通路抗呼吸道合胞病毒作用的研究［J］.中成药，2013，35(6):1116-1121.

［11］雷 芳.黄芩苷药理作用研究进展［J］.中国药业，2010，19(15):87-90.

［12］黄芩苷对人肺腺癌A549细胞的抑制作用及相关机制［J］.中成药，2012，34(11):2214-2216.

［13］Zhang D Y，Wu J，Ye F，et al.Inhibition of cancer cell proliferation and prostaglandin E2 synthesis by Scutellaria baicalensis［J］.Cancer Res，2003，63(14):4037-4043.

［14］叶定江，张世臣，吴 皓.中医药学高级丛书——中药炮制学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2011:386-390.

［15］袁俊贤，邵依囡，仵培坚.黄芩切制工艺的研究［J］.中成药，1993，15(11):20-21.