渝东北山区野葛中葛粉与总黄酮含量动态变化研究

谭小燕 李达斌 林中翔 黄 静 贾 晗 王立青

1.重庆三峡医药高等专科学校，重庆 404020；2.重庆市巫溪县人民医院，重庆 405800；3.四川大学华西药学院，四川成都 610041

野葛 Pueraria lobata （Willd.）Ohwi为豆科葛属植物，茎叶可作饲料，根和花可入药。野葛的干燥块根为常见中药，具有解肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒的功能[1]。野葛根中富含的黄酮类成分具有多种药理作用[2-5]，而葛粉又是很好的保健食品，畅销国内外[6-9]。野葛从根、藤到花、叶在工业、农业、医药方面都有很高的研究利用价值。渝东北山区野葛资源丰富[10-11]，但从未被开发利用，因此本研究以渝东北山区的开县城口巫溪交界地带产野葛为样本，采用组织捣碎水沉淀法和UV法测定一年中每月采收野葛根中葛粉和总黄酮含量，对含量动态变化进行分析，以期确定最佳采收时期，为该区野葛根的开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

METTLER TOLEDO PL1501-S电子秤 （梅特勒-托利多中国地区）、电热恒温鼓风干燥箱DHG-9140A型（上海一恒科技有限公司）、高速中药粉碎机HX-500A型（浙江省永康市溪岸五金药具厂）、低速自动离心机 LD25-2、U-2800 分光光度计（UV2300）、特殊减压抽滤装置（四川大学华西药学院天然药物系自主设计）、水、95%乙醇（分析纯）、葛根素对照品（批号：110753-200912，中国药品生物制品检定所）。

试验样本采自重庆开县谭家乡。从2011年6月～2012年 5月，每月 9日（或前后 2日）选取生长年限一致，粗细相近的野葛根采挖，然后洗净泥沙，切成2～3 mm薄片，自然干燥。

1.2 方法

文献报道一般利用组织捣碎水沉淀法[12]或酶解-蒽酮比色法[13]测定葛根中葛粉含量，而且酶解-蒽酮比色法是最常用的淀粉含量测定方法。但因本实验目的在于通过测定野葛中葛粉含量，从而确定野葛的最佳采集时间，再用于提取葛粉的工艺中，为与提取工艺相结合，故选取组织捣碎水沉淀法来测定葛粉含量。野葛中总黄酮的含量测定采用UV分光光度法[14-20]。

2 结果

2.1 野葛葛粉含量测定

将12份试验样本各称取1 kg，粉碎后过40目筛，将药材用 1∶8倍量冷水（W/V）浸泡 1 h，然后物理搅拌，让葛粉充分混入水液中，用纱布过滤，将滤渣加入7倍量水，搅拌均匀后再过滤，滤渣再重复清洗1遍，合并3次的滤液胶浆，再用细纱布过滤1遍，去除微粒杂质。将葛粉浆液离心或放置沉降，待沉降完全（溶液变澄清）倒掉上清液，再加5倍量清水搅匀葛粉，再沉降，重复3次后得葛粉，将其恒温40℃减压干燥葛粉。葛粉干燥后，用电子天平称重。

根据试验结果表明，1年12个月野葛葛粉含量从 11月～第 2年 2月最高，3、8～10月其次，4～7月最低，具体测定结果见表1。

表1 每月野葛葛粉含量表

2.2 野葛总黄酮含量测定

2.2.1 标准曲线制备 准确称取葛根素对照品0.0155 g，用70%乙醇溶解，于100 mL容量瓶中定容，得0.155 mg/mL浓度的葛根素对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加70%乙醇定容，得系列对照品溶液。用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白对照，在250 nm波长处测定吸收度。所得结果见表2和图1。

表2 标准曲线制备

图1 对照品溶液标准曲线

根据标准曲线求回归方程为A=74.288C+0.0091，r=0.9999。

2.2.2 供试样品总黄酮含量测定 将每个月野葛样本粉碎成粉末，分别精密称取2 g置250 mL圆底烧瓶中，各加 70%乙醇 100 mL，称量，恒温 80℃回流 1.5 h，放冷，再称量，并加70%乙醇补足减少重量，摇匀，滤过，用移液管精确量取滤液1 mL于25 mL容量瓶，加70%乙醇稀释定容得待测液，用1.0 mL 70%乙醇溶液作空白对照，在250 nm波长处连续3次测定吸收度，结果取3次之平均值，通过标准回归方程即可计算出待测液浓度，再乘以稀释倍数，然后换算成总黄酮质量，最后用质量除以称取的粉末重量可得该月野葛样本的总黄酮含量。具体含量见表3，根据数据显示11月～第 2年 3月总黄酮含量高于 9%，8～10月稍高，约6%，4～7月含量较低，在 2%左右。

2.3 全年野葛葛粉和总黄酮含量变化趋势

根据“2.1”、“2.2”项下测定的一年中每月在渝东北山区采集野葛中葛粉和总黄酮含量结果 （即表1、表3中数据）制定葛粉和总黄酮含量随时间变化的趋势曲线图，见图2。

由图2可见渝东北山区野葛的葛粉和总黄酮含量随季节变化趋势基本一致，从10月起开始呈含量上升趋势，11月份达第一峰值，12月份略有下降，次年1月份达第二峰值，之后含量开始呈下降趋势，到次年4月份含量降到最低，4～10月一直处于含量低水平时期。总体显示在11月～次年3月期间葛粉和总黄酮含量都相对较高。

表3 野葛各月份总黄酮含量表

图2 渝东北山区野葛葛时间粉与总黄酮含量随时间变化曲线

3 讨论

葛粉和总黄酮含量测定方法皆参考文献报道并结合实际提取葛粉和总黄酮的工艺而确定，故未再做方法的稳定性、重复性等考察。

根据图2的渝东北山区野葛葛粉和总黄酮含量随季节变化趋势曲线显示在11月～次年3月期间葛粉和总黄酮含量都相对较高。因此认为最佳采集时间为11月～次年3月，采集时间段较长，将有利于野葛的加工生产。

根据研究测定结果发现渝东北山区一带所产野葛葛粉含量变化在8.9%～25.3%，总黄酮含量在2%～12%，总的来看，葛粉含量比粉葛类低，若利用其提取葛粉产率不及粉葛[21]，但总黄酮含量较高，异黄酮类成分丰富，药用价值更高。如果能对该区野葛的葛粉和总黄酮进行连续提取综合利用，定能提高其利用价值和经济效益。此部分研究不但确定了该区野葛采收时间段，更为后续关于综合连续提取野葛葛粉和总黄酮的工艺研究奠定了理论基础。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：312-313.

[2]赵新芳，边文贵，张俊卿.葛根素治疗心血管疾病的药理和临床研究[J].陕西中医，2006，27（8）：1018-1020.

[3]吴慧轩.葛根素注射液治疗高血压（肝阳上亢症）临床研究[J].天津中医药，2004，21（2）：15-17.

[4]秦文，董兴兵，杨勤.葛根素的临床应用新进展[J].中国药业，2004，13（7）：75-76.

[5]王林丽，向明凤.葛根及其制剂的药理作用及临床应用[J].中国药业，2004，13（8）：78-79.

[6]中国预防医学科学院营养与食品研究所.食物成分表[M].北京：人民卫生出版社，1992：45.

[7]杜先锋.葛根的开发研究和综合利用[J].食品研究与开发，1998，（1）：49-50.

[8]毛富春，赵伯善.野生葛藤的研究利用现状及其开发前景[J].西北林学院学报，1995，10（3）：88-92.

[9]邵兰兰，赵燕.葛根异黄酮、淀粉的提取及葛产品开发研究进展[J].食品工业科技，2012，33（6）：452-455.

[10]《万县中草药》编写组.万县中草药[M].万县：四川省万县地区卫生局，四川省万县地区科委，内部发行，1977：928-929.

[11]沈力.三峡中草药资源[M].北京：中国中医药出版社，2012：445.

[12]陶家兰，朱芸初.关于甘薯干率-淀粉率测定方法的探讨[J].浙江农业科学，1988，（6）：296-299.

[13]田晓燕，王文芹.淀粉含量快速测定法的探讨[J].发酵科技通讯，2004，33（2）：14-15.

[14]李青坡，王永圣，游剑，等.葛根总异黄酮提取工艺的研究[J].中国药业，2004，13（5）：46-47.

[15]潘玲玲，任江剑.野葛葛根素积累动态研究[J].中国现代中药，2011，13（9）：15-17.

[16]范淑英，吴才君.野葛主要营养和药用成分的分析[J].江西农业大学学报，1998，20（4）：460-462.

[17]励娜，杨荣平，王宾豪，等.紫外分光光度法测定肿节风不同部位总黄酮的含量[J].中国药业，2010，19（21）：14-15.

[18]苏本华，苏春英.分光光度法测定莲须中总黄酮的含量[J].中医药信息，2011，28（3）：81-82.

[19]曾明，张汉明.野葛中活性成分动态研究[J].第二军医大学学报，1997，18（2）：150-152.

[20]杨荣平，王宾豪，张小梅，等.紫外分光光度法测定补骨脂中总黄酮含量[J].中国药业，2007，16（1）：22-23.

[21]吴艳芳，王新胜.野葛与粉葛总黄酮提取方法的比较[J].中国现代中药，2011，13（3）：38-39.