匹多莫德对重度烧伤患者免疫调理的临床观察

付丽等

【摘要】 目的：探讨匹多莫德对重度烧伤患者免疫调理的作用。方法：将入选重度烧伤患者30例，随机数字表法分为对照组和治疗组，治疗组应用匹多莫德0.8 g，2次/d，连续服用21 d；对照组未使用匹多莫德，在烧伤后1、7、14、21 d采集外周静脉血，检测各组患者淋巴细胞数目，流式细胞仪检测CD4+、CD8+T细胞的数量及其凋亡率，获得CD4+/CD8+值。观察两组临床愈合时间。结果：1 d两组淋巴细胞数目、CD4+和CD8+的数量及其凋亡率、CD4+/CD8+值比较，差异无统计学意义；7 d、14 d、21 d时，治疗组淋巴细胞数目、CD4+、CD4+/CD8+均高于对照组，CD4+、CD8+细胞凋亡率明显下降，比较差异有统计学意义（P<0.05）；治疗组临床愈合时间较对照组短，但差异无统计学意义。结论：匹多莫德在重度烧伤患者的治疗中是一种较好的免疫调节剂。

【关键词】 重度烧伤； 淋巴细胞； 免疫； 凋亡

【Abstract】 Objective： To observe the changes of lymphocyte in severe burn patients with the treatment of Pidotimod. Method： 30 severe burn patients were randomly divided into two groups. The observer group was treated with Pidotimod. The control group was treated without Pidotimod. The peripheral venous blood samples of the patients were collected on days 1， 7， 14， and 21 after the burn. The number of the lymphocyte was observed. CD4+， CD8+ lymphocyte and its apoptosis rate were detected by flow cytometry. The durations of the cure of the patients were observed. Result： There were no significant differences between the two groups on the lymphocyte， and the number of CD4+， CD8+ and its apoptosis rate on the 1 day after the burn. But the number of lymphocyte， CD4+， CD8+， and CD4+/CD8+ ratio of the observer group was significant higher than that of the control group （P<0.05） on 7， 14， 21 days after burn. At the same time the apoptosis rate of CD4+， CD8+ lymphocyte was lower than that of the control group. The average cure time of the observer group was shorter than that of the control group， but there was no significant difference. Conclusion： The Pidotimod as the adjustment of immunological function may be helpful in the treatment of the severe burn patients.

【Key words】 Severe burn； Lymphocyte； Immunology； Apoptosis

First-authors address： The 264th Hospital of the PLA， Taiyuan 030001， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.25.020

烧伤可导致机体免疫功能紊乱，严重的烧伤程度、过度的急性炎症反应会导致机体出现免疫抑制，这会使外周循环中淋巴细胞数目明显减少，即使存活淋巴细胞大部分也处于克隆无反应状态，甚至凋亡[1]。免疫细胞凋亡异常是导致免疫抑制、免疫麻痹的重要原因[2]，致使机体无力抵抗外界微生物的侵袭，甚至发生烧伤脓毒血症，危及患者生命。如何尽快改善这种免疫紊乱是防治烧伤感染、提高大面积患者治愈率的一个重要环节[3]。笔者尝试使用口服匹多莫德对重度烧伤患者进行免疫调控，探讨该药物对烧伤患者免疫调节的作用，评价其临床疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2009年2月-2013年11月严重烧伤6 h内入264医院烧伤重症监护室（BICU）的重度烧伤患者30例（TBSA 30%～50%），其中Ⅲ度烧伤小于10%，无吸入性损伤，性别不限，年龄16～50岁，排除原有心、肺、肝、肾等基础疾病。研究计划经本院伦理委员会讨论通过，患者或家属均签署知情同意书。入选的30例患者，男25例，女5例，年龄16～50岁，平均（30.2±8.9）岁；烧伤面积30%～50%，平均（40.3±7.2）%。两组患者性别、年龄及烧伤面积比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 研究设计 入选患者随机数字表法分为对照组和治疗组，每组各15例。入选患者均在入院即给予生命体征监护和相应支持治疗，根据烧伤面积、体重，按照三医大公式复苏补液，其余烧伤治疗方法两组基本相同，治疗组接受匹多莫德0.8 g，2次/d，口服；持续给药30 d。对照组未使用匹多莫德，所有患者分别于烧伤后24 h内，7、14，21 d凌晨6 h留取空腹静脉血标本进行检测。同时观察患者临床愈合天数。

1.3 免疫功能指标检测 （1）外周血T细胞分离，采用含二胺四乙酸二甲（EDTA）的无致热源试管（湖北金杏公司）收集血标本3 mL，与同体积无菌等渗盐水混合均匀，置于聚蔗糖-泛影葡胺液面上，18～20 ℃、1500转离心20 min，吸取第2层云雾状单个核细胞层，离心洗涤后，去除红细胞，进一步分离纯化淋巴细胞；（2）将获取的外周血单个核细胞浓度用磷酸盐缓冲液（PBS）调整为1×106个/mL，吸取100 μL加入流式管内，加入CD4+异硫氰酸荧光素（FITC）20 μL、CD8+别藻蓝素（APC）20 μL，避光混匀15 min后，加入

400 μL PBS，流式细胞仪检测CD4+、CD8+（荧光标记抗体、细胞溶解剂均和流式细胞仪均为美国BD Pharmingen公司产品）。CD4+、CD8+细胞凋亡率检测：采用PBS将分离好单个核细胞浓度调整为1×106个/mL，离心弃上清，用0.1 mL结合缓冲液将细胞沉淀悬浮于流式管中，加入CD4-FITC 20 μL，CD8-APC 20 μL，膜联蛋白V5 μL和7-氨基放线菌素D5 μL，避光孵育15 min，加入结合缓冲液，1 h内流式细胞仪检测。采用日本产Sysmex1000i血细胞分析仪计数外周血淋巴细胞。

1.4 统计学处理 使用SPSS 13.0统计软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，组间差异采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫功能指标的变化 两组烧伤后淋巴细胞前14天均呈下降趋势，21 d、30 d时淋巴细胞数目呈上升趋势，治疗组较对照组淋巴细胞波动较平缓，24 h、3 d两组比较差异无统计学意义；7 d、14 d、21 d两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；30 d时两组比较，差异无统计学意义。两组CD4+和CD8+及其相对值（CD4+/CD8+）在烧伤后1 d、3 d差异无统计学意义；治疗组7 d、14 d、21 d CD4+均较对照组明显升高，且此时CD4+和CD8+的凋亡率也下降明显，比较差异有统计学意义（P<0.05）。30 d时两组各项指标比较差异无统计学意义。见表1。

2.2 临床治愈时间 治疗组临床愈合时间平均（28.8±3.2）d，对照组为（26.2±4.1）d，治疗组较对照组短，但比较差异无统计学意义。

3 讨论

重度烧伤患者的早期，免疫细胞分泌大量的炎性介质，中性粒细胞及巨噬细胞等免疫细胞参与急性炎症反应，淋巴细胞参与非特异性自然免疫，然而机体并非处于一成不变炎症激活状态。随着病程的发展，机体逐渐进入免疫抑制阶段，因大面积烧伤致使淋巴细胞对特异性抗原刺激无增殖反应并且细胞因子生成明显受到抑制，表现为淋巴细胞增殖能力下降，淋巴细胞处于克隆无反应状态。同时，抗原特异性T、B淋巴细胞的被清除或失活。凋亡是诱发T淋巴细胞减少的主要原因[4]，此时，辅助性T细胞（Th）减少，而抑制性T细胞（Ts）相对增多，CD4+/CD8+比例下降，免疫功能缺陷，进一步增加患者易感性，这一阶段患者易发生脓毒症。细胞凋亡在脓毒症器官损伤、免疫失衡等方面发挥了重要作用，对脓毒症的预后有重要影响[5-8]。有研究表明，脓毒症时患者除大量淋巴细胞凋亡外，抗原呈递细胞也发生了凋亡，从而使免疫细胞不能有效的克隆增殖，虽然此时NK和巨噬细胞数量改变不大，但是由于CD4+、B细胞和树突状细胞大量凋亡，NK和巨噬细胞缺乏有效地免疫刺激，处于活性抑制状态，因此机体不能对病原体产生有效地免疫应答[9]。笔者临床观察中也发现，重度烧伤后淋巴细胞数目在7 d内持续下降，14～30 d时才缓慢上升，而淋巴细胞上升快的患者，愈合速度较快。而淋巴细胞作为机体主要的免疫细胞，其凋亡失控，可使机体的免疫系统紊乱，从而导致疾病的发生发展[10]。这提示，免疫调节治疗在是重度烧伤治疗中应处于中心地位。

免疫调理用于重度烧伤患者的药物很多，包括胸腺肽、谷氨酰胺等，匹多莫德作为免疫调节剂已广泛应用于多种疾病的治疗[11-15]，并取得良好的治疗效果。匹多莫德为口服剂型，服药方便，患者顺应性好；病且患者费用较低，可以减少患者的经济负担。笔者尝试将其应用于重度烧伤患者，匹多莫德的主要成分为吡酮莫特，为一种全合成的胸腺二肽类结构的新型免疫刺激和生物反应调节剂，通过调节和刺激免疫细胞产生效应，在人类和动物均有免疫刺激活性的发生[16]。匹多莫德在免疫反应的各个阶段均可起到作用，在快反应阶段可刺激非特异性自然免疫，促进γ-干扰素和IL-2的产生，使淋巴细胞母细胞诱导分化，在慢反应期可使体液免疫得到调节[17]，使B淋巴细胞增殖和抗体因刺激产生，通过这些免疫功能调节机制发挥作用，可降低和预防感染的发生。笔者研究发现，治疗组患者各测量点CD4+细胞的数量均较对照组多，7、14、30 d明显增加，且差异有统计学意义，CD4+/CD8+比值也较对照组高。CD4+ T细胞是辅助性T细胞，刺激B细胞成熟，分泌高效价的IgG，也能促进巨噬细胞及中性粒细胞的吞噬活性，提高其趋化性，并激活自然杀伤细胞，还能促进有丝分裂引起淋巴细胞增殖。CD8+T细胞为抑制性T细胞（Ts），CD4+/CD8+减低，提示机体使免疫功能低下，抗病能力下降。笔者临床观察中发现治疗组CD4+/CD8+均较对照组高，CD4+凋亡率明显低于对照组，提示匹多莫德对大面积烧伤患者有调节T细胞亚群，提高体液免疫和细胞免疫，改善免疫功能，加强免疫系统平稳机制，提高机体抗病的能力。是一种较好的免疫调节剂。

参考文献

[1] Edward R S， Toliver K. Mechanism of the inflammatory response[J]. Best Pract Res Clin Auaest Hesiol，2004，18（3）：385-405.

[2]刘慧琳，刘桂花，田兆兴.脓毒症患者血中淋巴细胞水平的变化[J].中华危重病急救医学杂志，2014，26（3）：148-152.

[3]冯祥生，张敬群，陈晓东，等.脱细胞异种真皮基质疗法对重度烧伤患者免疫功能的影响[J].中华损伤与修复杂志，2012，7（3）：36-40.

[4] Miller A C， Rashid R M， Elamin E M. The “T” in trauma： the helper T-cell response and the role of immunomodulation in trauma and burn patients[J]. J Trauma，2007，63（6）：1407-1417.

[5] Bantel H， Schulze-Osthoff K. Cell death in sepsis： a matter of how， when， and where[J]. Crit Care，2009，13（4）：173.

[6] Messaris E， Memos N， Chatzigianni E， et al. Time-dependent mitochondrial-mediated programmed neuronal cell death prolongs survival in sepsis[J]. Crit Care Med，2004，32（8）：1764-1770.

[7] Leslie M. Immunology. Stalling sepsis？[J]. Science，2012，337（6098）：1036.

[8] Peter M E. Programmed cell death： Apoptosis meets necrosis[J]. Nature，2011，471（7338）：310-312.

[9] Wesche D E， Lomas-Neira J L， Perl M， et al. Leukocyte apoptosis and its significance in sepsis and shock[J]. J Leukoc Bioc，2005，78（2）：325-337.

[10]刘扬，邓洁，齐云萍.淋巴细胞凋亡与老年心血管疾病[J].中国医学创新，2010，7（36）：190-192.

[11]巫治文，谢广渊.匹多莫德口服与雾化吸入对反复呼吸道感染疗效的比较[J].当代医学，2011，17（25）：20-21.

[12]黄建亚.匹多莫德治疗小儿反复呼吸道感染的临床效果观察[J].中外医学研究，2012，10（19）：12-13.

[13]申琴玉.匹多莫德治疗儿童反复呼吸道感染78例疗效观察[J].中外医学研究，2011，9（19）：37-38.

[14]马柱.匹多莫德对小儿反复呼吸道感染的治疗分析[J].中国医学创新，2010，7（19）：72-73.

[15]谢鹏，邹敏，黄洁.匹多莫德、小剂量糖皮质激素辅助治疗小儿支原体肺炎80例临床观察[J].中国医学创新，2014，11（10）：78-80.

[16]赵丽珍.匹多莫德口服液预防小儿支气管哮喘的临床分析[J].药物与临床，2011，49（16）：86-87.

[17]林海燕.匹多莫德口服液治疗小儿反复呼吸道感染临床探讨[J].临床医学，2007，27（6）：58-59.

（收稿日期：2014-04-08） （本文编辑：王宇）