加减苍附导痰汤调控痰湿阻滞型多囊卵巢综合征患者子宫内膜容受性研究

王慧颖，林 喧

（广州中医药大学第一附属医院妇科，广东 广州 510405）

加减苍附导痰汤调控痰湿阻滞型多囊卵巢综合征患者子宫内膜容受性研究

王慧颖，林 喧

（广州中医药大学第一附属医院妇科，广东 广州 510405）

〕目的观察加减苍附导痰汤对痰湿阻滞型多囊卵巢综合征（PCOS）患者子宫内膜整合素αvβ3、葡萄糖转运体4（GLUT4）表达的影响以探讨该方对子宫内膜容受性的影响。方法收集符合证型患者90例，随机分为加减苍附导痰汤组(中药组)、克罗米芬组(西药组)、加减苍附导痰汤+克罗米芬组（中西药组）各30例。对照组为输卵管性不孕患者30例。连续治疗3个月经周期，观察各组治疗前后排卵率、妊娠率和免疫组化法检测整合素αvβ3、GLUT4表达。结果治疗后中药组的排卵率低于其他3组（P＜0.05），中西药组与西药组排卵率差异无统计学意义（P＞0.05），且均低于对照组（P＜0.05）；中药组、中西药组的妊娠率均高于西药组（P＜0.05）；治疗前 PCOS各组 αvβ3、GLUT4表达均显著低于对照组（P＜0.01）；中药组、中西药组治疗后整合素 αvβ3、GLUT4 表达较治疗前升高（P＜0.05）；西药组治疗后整合素 αvβ3 的表达较治疗前下降（P＜0.05），GLUT4表达治疗前后差异无统计学意义（P＞0.05）。结论加减苍附导痰汤能一定程度上拮抗克罗米芬促排后降低子宫内膜容受性的作用；能有效增加痰湿阻滞型PCOS患者子宫内膜整合素αvβ3、GLUT4，可提高子宫内膜容受性，从而提高受精卵着床率。

多囊卵巢综合征；痰湿阻滞证；加减苍附导痰汤；整合素αvβ3；葡萄糖转运体4

多囊卵巢综合征 (polycystic ovary syndrome，PCOS)是一种具有高度异质性的、临床表现多样性的疾病，是引起育龄期妇女不孕和月经失调的常见内分泌综合征。近年来研究发现子宫内膜容受性障碍会导致患者生育力弱和妊娠结局不良。现为明确PCOS患者子宫内膜缺陷的分子学基础，从子宫内膜容受性角度进一步探讨加减苍附导痰汤治疗PCOS不孕的作用机制，我们对90例患者治疗前后的中医证候、月经情况及应用免疫组化法检测整合素αvβ3、葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达进行观察及系统分析。

1 资料与方法

1.1 临床资料

所观察90例病例为2011年3月至2013年3月广州中医药大学第一附属医院妇科门诊就诊的痰湿阻滞型PCOS患者。诊断标准采用2003年鹿特丹会议上推荐的诊断标准[1]，中医证候诊断标准参照《中药新药临床研究指导原则》中“中药新药治疗月经不调、闭经的临床研究指导原则”痰湿阻滞证标准[2]。采用随机数字表法将患者分为中药组、西药组及中西药组各30例，并选取输卵管性不孕患者30例为正常对照组。各组间年龄、体质量差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。所有观察对象无肝肾疾病、心脑血管疾病、糖尿病，3个月内无使用激素类药物史。

1.2 治疗方法

表1 各组患者年龄、体质量比较 （±s）

表1 各组患者年龄、体质量比较 （±s）

组 别对照组中药组西药组中西药组n 30 30 30 30年龄（岁）31.1±5.6 30.8±5.5 29.9±5.4 30.0±5.6体质量（kg）61.2±3.2 58.7±3.7 56.9±3.1 60.8±3.4

1.2.1 中药组 服用加减苍附导痰汤(药物组成：苍术 10 g，香附 15 g，胆南星 10 g，陈皮 6 g，石菖蒲10 g，法半夏 10 g，菟丝子 20 g，皂刺 10 g，茯苓15 g，当归 10 g，丹参 15 g，熟地黄 15 g。 水煎液由广州中医药大学第一附属医院中药房提供)，月经干净后（闭经患者就诊当天）开始服用，经期停药，每日1剂，早晚2次，连续治疗1个疗程（3个月经周期，无月经来潮、无排卵者用药3个月）。

1.2.2 西药组 给予克罗米芬（枸橼酸氯米芬胶囊，通化长青药业股份有限公司生产，国药准字H22022100，50 mg／粒），月经周期第 5 天(自然周期或黄体酮后撤退性出血)开始服用，每天50 mg，共5 d，疗程同上。

1.2.3 中西药组 服用克罗米芬促排卵的同时口服加减苍附导痰汤，服用方法及疗程同上。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 治疗期间各组排卵率及妊娠率 （1）排卵监测：各组均于月经第9天行阴道超声监测卵泡生长，监测频率为1次/3～4 d，至少测定1个卵泡直径大于14 mm时改为隔日监测，观察到优势卵泡并消失则视为排卵。（2）妊娠监测：于排卵后第8天（无月经来潮、无排卵者于治疗完成后当天）抽血查人绒毛膜促性腺激素（HCG），以确定有无成功受精；3～4周行阴道超声检查，若看到宫腔内有胎囊及胎心搏动者则为妊娠。

1.3.2 整合素 αvβ3、GLUT4 表达检测 排除妊娠者，经患者同意，采用Medscand Eddorette管吸取内膜组织并用10%福尔马林液体固定，脱水，石蜡包埋切片，备用。标本按免疫组化CSA法处理，测定相关指标。结果判定：整合素αvβ3、GLUT4在子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞的细胞质中，呈阳性表达，棕黄色，但强度有所不同。所有切片采用北京航天航空大学病理图像分析系统3.0版对染色强度进行定量分析。放大倍数为200倍，普通光源照明。在高分辨率图像监视器下对每张玻片均随机选取5个视野，测定每个视野的阳性表达的光密度值（OD）。计算其均值，作为该片的代表值。

1.4 统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件包对数据进行统计分析。计量资料用“±s”表示，同组治疗前后计量比较用独立样本t检验；方差齐性时，用单因素方差分析，组间比较用q检验。均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 治疗期间各组排卵率比较

中药组排卵率低于其他3组，差异有统计学意义（P＜0.05）；中西药组与西药组排卵率差异无统计学意义（P＞0.05），均低于对照组（P＜0.05）。 见表 2。

表2 各组治疗期间排卵率比较 （±s）

表2 各组治疗期间排卵率比较 （±s）

注：与中药组比较 *P＜0.05；与对照组比较▲P＜0.05。

组 别中药组中西药组西药组对照组n 30 30 30 30排卵（例）15 23 22 30排卵率（%）50.0 76.7*▲73.3*▲100*

2.2 治疗期间各组妊娠情况比较

治疗期间中西药组妊娠9例，中药组妊娠5例，均为宫内妊娠，两组妊娠率差异无统计学意义（P＞0.05）。西药组患者均未妊娠。

2.3 各组治疗前后αvβ3、GLUT4表达的比较

治疗前PCOS各组αvβ3、GLUT4表达比较差异无统计学意义 （P＞0.05）， 均显著低于对照组 （P＜0.01）。治疗后中药组 αvβ3、GLUT4 表达较治疗前升高（P＜0.05）；与西药组比较 αvβ3、GLUT4 表达升高（P＜0.05）；与中西药组比较仅整合素 αvβ3 的表达升高（P＜0.05）；与对照组比较仅 GLUT4 表达差异有统计学意义（P＜0.05）。 治疗后中西药组 αvβ3、GLUT4较治疗前升高（P＜0.05），均高于西药组（P＜0.05），低于对照组（P＜0.05）。 治疗后西药组仅 αvβ3 的表达较治疗前下降 （P＜0.05），αvβ3、GLUT4 的表达均低于对照组（P＜0.05）。 见表 3。

表 3 各组治疗前后 αvβ3、GLUT4表达比较 （±s）

表 3 各组治疗前后 αvβ3、GLUT4表达比较 （±s）

注： 与同组治疗前比较 *P＜0.05； 与对照组比较 #P＜0.05，##P＜0.01；与中西药组比较▲P＜0.05；与西药组比较△P＜0.05。

组 别中药组n西药组中西药组治疗前治疗后治疗前治疗后治疗前治疗后对照组30 25 30 30 30 21 30 αvβ3 6.27±1.41##11.56±1.26*▲△6.58±1.77##2.73±0.86*#▲5.51±1.85##7.18±1.08*#12.91±1.14 GLUT4 93.95±11.16##110.74±5.22*#△97.85±18.43##103.62±21.13#▲90.38±12.33##113.38±4.19*#137.72±10.81

3 讨论

妊娠生理中，子宫内膜对胚胎的接受能力是胚胎成功植入的关键因素。有证据表明，PCOS患者机体紊乱的内分泌会导致子宫内膜容受性下降[3]。整合素的表达是决定子宫对胚泡的接受状态的因素之一[4]，是目前被公认的评价子宫内膜对胚胎接受性的可靠分子指标之一。本次研究发现，PCOS患者治疗前内膜整合素αvβ3的表达低于正常对照组，且经克罗米芬促排后整合素αvβ3表达较治疗前下降，说明克罗米芬治疗出现的高排卵率、低妊娠率可能与其导致内膜整合素表达减少有关。而经过本方治疗后PCOS组的整合素表达均有不同程度的增加，可能在一定程度上能对抗克罗米芬造成的内膜整合素表达下降。但其造成该对抗性的深层机制和作用位点需进一步的探索。

子宫内膜细胞的分化和成熟需要足够量葡萄糖的转运利用，GLUT4作为其转运载体在子宫内膜腺体组织成熟过程中发挥着重要作用[5]。GLUT4的表达程度与胰岛素抵抗密切相关[6]。王玮等[7]研究表明内膜细胞分化和代谢过程需要GLUT4参与，推测其表达程度的降低参与了子宫内膜的胰岛素抵抗，最终引起子宫内膜代谢出现异常，表现为子宫内膜增殖症或着床失败。而本次实验中，经中药治疗的组别GLUT4的表达较治疗前有所提高，且均较单纯克罗米芬组增强，妊娠几率增高。证明加减苍附导痰汤能够促进子宫内膜组织能量代谢，但更深层次作用机制需进一步研究。

中医有诸多古医家提到女子月事不调、无子当责之于痰，如元代朱震亨《丹溪心法·子嗣》指出：“自气成积，自积成痰，……遂成窠囊”，又云：“……不能成胎，……宜行湿燥痰。”苍附导痰汤是化痰燥湿的经方，方中苍术燥湿，香附理气散结以开胸胁之痰，胆南星辛烈，专走经络，协二陈化痰除湿，实乃祛湿豁痰之良方，但用于治疗痰湿阻滞型PCOS时方中缺乏行血调经之品。故在此基础上加以菟丝子、当归、熟地黄等，或补其不足，或预培其损，配伍于众多祛湿化痰药中又可使燥湿化痰而不伤阴血，补髓生血而不碍脾胃。本次研究表明PCOS患者经加减苍附导痰汤治疗后可改善其临床症状，增加内膜整合素αvβ3、GLUT4表达，提高子宫内膜容受性。但其具体基因及分子作用位点、机制仍需进行深入研究，且如何提高中药治疗的排卵率也是日后需要研究的重要部分。

[1]The Rotterdam ESHRE/ASRM-sponsored PCOS consensus workshop group.Revised 2003 consensus on diagnostic criteria and long-term health risksrelated topolycysticovary syndrome(PCOS)[J].Hum Rep rod，2004，19(1)：41.

[2]郑筱萸.中药新药临床研究指导原则[S].北京：中国医药科技出版社，2002：390-392.

[3]Hyunjung Jade Lim，Dey SK.HB－EGF：a unique mediator of embryo－uterine interactions during implantation[J].Exp Cell Res，2009，315(4)：619－626.

[4]曾 琪，林金芳.子宫内膜胚胎容受性相关因素的研究进展[J].国外医学·计划生育分册，2003，22（3）：157-159.

[5]Sheet EE，Tsibris JC，Cook N I，et al.In vitro binding ofinsulin and epidermal growth factor to human endometrium and endocervix[J].Am J Obstet Gynecol，1985，153(1)：60-65.

[6]Fernandez-Veledo S， Hernandez R， Teruel T， et al.Ceramide mediates TNF-alpha-induced insulin resistance on GLUT4 gene expression in brown adipocytes[J].Arch Physiol Biochem，2006，112(1)：13-22.

[7]王 玮，蔡建辉，马毓梅，等.GLUT4在多囊卵巢综合征大鼠子宫内膜中的表达及意义[J].中国病理生理杂志，2007，23（3）：587－590.

（本文编辑 马 薇）

Research on Jiajian Cangfu Daotan Decoction in Treating Endometrial Receptivity in Dampness-phlegm Obstructing Type Patients with Polycystic Ovary Syndrome

WANG Huiyin,LIN Xuan
（Department of the First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou,Guangdong 510405,China）

Objective To study the effect of Jiajian Cangfu Daotan Decoction on endometrial receptivity in the dampness-phlegm obstructing type patientswith polycystic ovary syndrome(PCOS).Methods90 patients with the dampness-phlegm obstructing type of polycystic ovary syndrome (PCOS)patients were collected who aged between 22-40 years old.All patients were randomly divided into the traditional Chinese medicine group(30 cases),the clomiphene group(30 cases)and Chinese medicine combined clomiphene group(30 cases).The control group of 30patients with tubal infertility.For a course of treatment,observation statistics the ovulation rate,pregnancy rate,TCM syndrome integral,menstrual score,expression of integrin αvβ3,GLUT4.ResultsAfter treatment,the ovulation rate of traditional Chinese medicine group was lower than other three groups,with significant difference（P＜0.05）.The Chinese medicine combined clomiphene group：after treatment,integrin αvβ3,GLUT4s expression had enhanced compared with non-treatment,there were significant difference,the same as Chinese medicine group.Clomiphene group:the expression of integrin αvβ3 decreased than before treatment.The GLUT4 express did not show statistically significant before and after treatment.ConclusionJiajian Cangfu Daotan Decoction can effectively increase polycystic ovary syndrome with stagnation and blockade of phlegm-damp patients,integrin αvβ3,GLUT4 expression.It can improve the receptivity of the fertilized egg implantation rate.

polycystic ovary syndrome;dampness-phlegm obstructing;Jiajian Cangfu Daotan Decoction;GLUT4; αvβ3

R711.75

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2014.06.010.031.04

2014-01-12

广东省科技厅资助项目（2010B030700042）。

王慧颖，女，博士，主任医师，主要从事妇科内分泌疾病的研究。