高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定

荆淑芹++孙媛媛+++李景辉

[摘要] 目的 建立高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定方法，找出影响不确定度因素。 方法 根据检验过程，建立数学模型，分析影响不确定度因素来源，通过不确定度的量化分析，得出扩展不确定度。 结果 本实验的扩展不确定度为0.105 mg（k=2）。 结论 高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度主要由对照品称量和测得色谱峰面积引入。

[关键词] 高效液相色谱法；含量测定；芍药苷

[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）08（a）-0010-03

Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC

JING shu-qin SUN Yuan-yuan LI Jing-hui

Institute for Food and Drug Control of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for the determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule，identify uncertainty factor. Methods According to its inspection process，a mathematical model was established to analyze the factors affecting the uncertainty source.The expanded uncertainty was gained by quantifying analysis. Results The expanded uncertainty of this experiment was 0.105 mg（k=2）. Conclusion Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC is mainly gained by weighing reference and measuring chromatographic peak area.

[Key words] High performance liquid chromatography；Content determination；Paeoniflorin

测量不确定度是“表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数”，是用来确定测量结果的可信程度。本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059-1999）[1]，并参考《化学分析测量不确定度评定》（JJF1135-2005）[2]、《化学分析中不确定度的评估指南》[3]，分析高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的检验过程，对其不确定度影响因素进行分析和评定[4]，找出不确定度主要来源，建立高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定方法。

1 材料与方法[5]

1.1 仪器与试剂

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，赛多利斯BT25S电子天平，梅特勒ML104电子天平，芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337），尪痹胶囊（某药厂生产）。

1.2 色谱条件和系统适用性试验

色谱柱：C18；流动相：甲醇-0.02 mol/L（20∶80）；检测波长230 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于4000。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品13.49、12.43 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

1.4 供试品溶液的制备

取装量差异项下本品研细，取约0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加水约35 ml，超声处理30 min，取出，放冷至室温，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

1.5 测定法[6]

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

1.6 实验数据

10粒装量5.5691 g，平均装量0.5569 g；其他实验数据及计算结果见表1、表2。

表1 对照品溶液实验数据

表2 供试品实验数据及计算结果

2 结果

2.4 合成标准不确定度urel（X）的计算

根据贝塞尔公式得

实验测得X=1.78 mg，标准不确定度u（X）：u（X）=urel（X）×X=0.02375×1.78=0.042275 mg。

2.5 扩展不确定度

取包含因子k=2[12]，含量测定结果的扩展不确定度U（X）：U（X）=k·u（X）=2×0.042275=0.08455 mg，则尪痹胶囊中芍药苷的含量结果表示为：X=（1.78±0.0846） mg，k=2。

3 讨论

由表3中8个分量不确定度可见，对照品称量、测得色谱峰面积引入的不确定度影响较大，而对照品纯度、样品稀释过程引入的不确定度较小，这一结果符合本实验操作过程，因此提示今后在设计含量测定方法和在实际检测过程中，要注意取样量多少、稀释过程和步骤、平行样测定以及仪器检定与维护保养等，以提高检测重复性和准确性。

[参考文献]

[1] 国家技术监督检验检疫总局.JJF1059-1999测量不确定度测定与表示[M].北京：中国计量出版社，1999：1-31.

[2] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.JJF1135-2005化学分析测量不确定度评定[M].北京：中国计量出版社，2005.

[3] 中国实验室国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南[M].北京：中国计量出版社，2002：12.

[4] 国家认证认可监督委员会.实验室资质认定评审准则[Z].2006.

[5] 国家食品药品监督管理局标准.YBZ01872008尪痹胶囊[S].

[6] 国家药典委员会.中国药典一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[7] 徐黎颖.高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑含量的不确定度评定[J].首都医药，2013，（12）：60-61.

[8] 段景春，边疆，王蕴馨，等.高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量的不确定度分析[J].中国实用医药，2013，8（5）：256-258.

[9] 林玲，张琴，赖森亚，等.HPLC法测定菊花中绿原酸含量的不确定度分析[J].辽宁中医药大学学报，2014，16（1）：68-69.

[10] 孙旌文.HPLC法测定醋酸地塞米松片含量的不确定度分析[J].药物分析杂志，2010，30（9）：1777-1780.

[11] 国家技术监督检验检疫总局.JJF196-2006常用玻璃量器检定规程[M].北京：中国计量出版社，2006：6-9.

[12] 中国合格评定国家认可委员会.测量不确定度评估和报告通用要求[M].北京：中国计量出版社，2006：4.

（收稿日期2014-06-13 本文编辑：李亚聪）

[摘要] 目的 建立高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定方法，找出影响不确定度因素。 方法 根据检验过程，建立数学模型，分析影响不确定度因素来源，通过不确定度的量化分析，得出扩展不确定度。 结果 本实验的扩展不确定度为0.105 mg（k=2）。 结论 高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度主要由对照品称量和测得色谱峰面积引入。

[关键词] 高效液相色谱法；含量测定；芍药苷

[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）08（a）-0010-03

Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC

JING shu-qin SUN Yuan-yuan LI Jing-hui

Institute for Food and Drug Control of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for the determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule，identify uncertainty factor. Methods According to its inspection process，a mathematical model was established to analyze the factors affecting the uncertainty source.The expanded uncertainty was gained by quantifying analysis. Results The expanded uncertainty of this experiment was 0.105 mg（k=2）. Conclusion Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC is mainly gained by weighing reference and measuring chromatographic peak area.

[Key words] High performance liquid chromatography；Content determination；Paeoniflorin

测量不确定度是“表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数”，是用来确定测量结果的可信程度。本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059-1999）[1]，并参考《化学分析测量不确定度评定》（JJF1135-2005）[2]、《化学分析中不确定度的评估指南》[3]，分析高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的检验过程，对其不确定度影响因素进行分析和评定[4]，找出不确定度主要来源，建立高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定方法。

1 材料与方法[5]

1.1 仪器与试剂

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，赛多利斯BT25S电子天平，梅特勒ML104电子天平，芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337），尪痹胶囊（某药厂生产）。

1.2 色谱条件和系统适用性试验

色谱柱：C18；流动相：甲醇-0.02 mol/L（20∶80）；检测波长230 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于4000。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品13.49、12.43 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

1.4 供试品溶液的制备

取装量差异项下本品研细，取约0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加水约35 ml，超声处理30 min，取出，放冷至室温，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

1.5 测定法[6]

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

1.6 实验数据

10粒装量5.5691 g，平均装量0.5569 g；其他实验数据及计算结果见表1、表2。

表1 对照品溶液实验数据

表2 供试品实验数据及计算结果

2 结果

2.4 合成标准不确定度urel（X）的计算

根据贝塞尔公式得

实验测得X=1.78 mg，标准不确定度u（X）：u（X）=urel（X）×X=0.02375×1.78=0.042275 mg。

2.5 扩展不确定度

取包含因子k=2[12]，含量测定结果的扩展不确定度U（X）：U（X）=k·u（X）=2×0.042275=0.08455 mg，则尪痹胶囊中芍药苷的含量结果表示为：X=（1.78±0.0846） mg，k=2。

3 讨论

由表3中8个分量不确定度可见，对照品称量、测得色谱峰面积引入的不确定度影响较大，而对照品纯度、样品稀释过程引入的不确定度较小，这一结果符合本实验操作过程，因此提示今后在设计含量测定方法和在实际检测过程中，要注意取样量多少、稀释过程和步骤、平行样测定以及仪器检定与维护保养等，以提高检测重复性和准确性。

[参考文献]

[1] 国家技术监督检验检疫总局.JJF1059-1999测量不确定度测定与表示[M].北京：中国计量出版社，1999：1-31.

[2] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.JJF1135-2005化学分析测量不确定度评定[M].北京：中国计量出版社，2005.

[3] 中国实验室国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南[M].北京：中国计量出版社，2002：12.

[4] 国家认证认可监督委员会.实验室资质认定评审准则[Z].2006.

[5] 国家食品药品监督管理局标准.YBZ01872008尪痹胶囊[S].

[6] 国家药典委员会.中国药典一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[7] 徐黎颖.高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑含量的不确定度评定[J].首都医药，2013，（12）：60-61.

[8] 段景春，边疆，王蕴馨，等.高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量的不确定度分析[J].中国实用医药，2013，8（5）：256-258.

[9] 林玲，张琴，赖森亚，等.HPLC法测定菊花中绿原酸含量的不确定度分析[J].辽宁中医药大学学报，2014，16（1）：68-69.

[10] 孙旌文.HPLC法测定醋酸地塞米松片含量的不确定度分析[J].药物分析杂志，2010，30（9）：1777-1780.

[11] 国家技术监督检验检疫总局.JJF196-2006常用玻璃量器检定规程[M].北京：中国计量出版社，2006：6-9.

[12] 中国合格评定国家认可委员会.测量不确定度评估和报告通用要求[M].北京：中国计量出版社，2006：4.

（收稿日期2014-06-13 本文编辑：李亚聪）

[摘要] 目的 建立高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定方法，找出影响不确定度因素。 方法 根据检验过程，建立数学模型，分析影响不确定度因素来源，通过不确定度的量化分析，得出扩展不确定度。 结果 本实验的扩展不确定度为0.105 mg（k=2）。 结论 高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度主要由对照品称量和测得色谱峰面积引入。

[关键词] 高效液相色谱法；含量测定；芍药苷

[中图分类号] R286 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）08（a）-0010-03

Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC

JING shu-qin SUN Yuan-yuan LI Jing-hui

Institute for Food and Drug Control of Benxi City in Liaoning Province，Benxi 117000，China

[Abstract] Objective To establish an HPLC method for the determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule，identify uncertainty factor. Methods According to its inspection process，a mathematical model was established to analyze the factors affecting the uncertainty source.The expanded uncertainty was gained by quantifying analysis. Results The expanded uncertainty of this experiment was 0.105 mg（k=2）. Conclusion Determination of content uncertainty of paeoniflorin in Wangbi capsule by HPLC is mainly gained by weighing reference and measuring chromatographic peak area.

[Key words] High performance liquid chromatography；Content determination；Paeoniflorin

测量不确定度是“表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数”，是用来确定测量结果的可信程度。本文根据《测量不确定度评定与表示》（JJF1059-1999）[1]，并参考《化学分析测量不确定度评定》（JJF1135-2005）[2]、《化学分析中不确定度的评估指南》[3]，分析高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的检验过程，对其不确定度影响因素进行分析和评定[4]，找出不确定度主要来源，建立高效液相色谱法测定尪痹胶囊中芍药苷含量的不确定度评定方法。

1 材料与方法[5]

1.1 仪器与试剂

岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，赛多利斯BT25S电子天平，梅特勒ML104电子天平，芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337），尪痹胶囊（某药厂生产）。

1.2 色谱条件和系统适用性试验

色谱柱：C18；流动相：甲醇-0.02 mol/L（20∶80）；检测波长230 nm；理论塔板数按芍药苷峰计算不低于4000。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品13.49、12.43 mg，置50 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密吸取1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

1.4 供试品溶液的制备

取装量差异项下本品研细，取约0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加水约35 ml，超声处理30 min，取出，放冷至室温，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

1.5 测定法[6]

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

1.6 实验数据

10粒装量5.5691 g，平均装量0.5569 g；其他实验数据及计算结果见表1、表2。

表1 对照品溶液实验数据

表2 供试品实验数据及计算结果

2 结果

2.4 合成标准不确定度urel（X）的计算

根据贝塞尔公式得

实验测得X=1.78 mg，标准不确定度u（X）：u（X）=urel（X）×X=0.02375×1.78=0.042275 mg。

2.5 扩展不确定度

取包含因子k=2[12]，含量测定结果的扩展不确定度U（X）：U（X）=k·u（X）=2×0.042275=0.08455 mg，则尪痹胶囊中芍药苷的含量结果表示为：X=（1.78±0.0846） mg，k=2。

3 讨论

由表3中8个分量不确定度可见，对照品称量、测得色谱峰面积引入的不确定度影响较大，而对照品纯度、样品稀释过程引入的不确定度较小，这一结果符合本实验操作过程，因此提示今后在设计含量测定方法和在实际检测过程中，要注意取样量多少、稀释过程和步骤、平行样测定以及仪器检定与维护保养等，以提高检测重复性和准确性。

[参考文献]

[1] 国家技术监督检验检疫总局.JJF1059-1999测量不确定度测定与表示[M].北京：中国计量出版社，1999：1-31.

[2] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.JJF1135-2005化学分析测量不确定度评定[M].北京：中国计量出版社，2005.

[3] 中国实验室国家认可委员会.化学分析中不确定度的评估指南[M].北京：中国计量出版社，2002：12.

[4] 国家认证认可监督委员会.实验室资质认定评审准则[Z].2006.

[5] 国家食品药品监督管理局标准.YBZ01872008尪痹胶囊[S].

[6] 国家药典委员会.中国药典一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[7] 徐黎颖.高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑含量的不确定度评定[J].首都医药，2013，（12）：60-61.

[8] 段景春，边疆，王蕴馨，等.高效液相色谱法测定饮料中咖啡因含量的不确定度分析[J].中国实用医药，2013，8（5）：256-258.

[9] 林玲，张琴，赖森亚，等.HPLC法测定菊花中绿原酸含量的不确定度分析[J].辽宁中医药大学学报，2014，16（1）：68-69.

[10] 孙旌文.HPLC法测定醋酸地塞米松片含量的不确定度分析[J].药物分析杂志，2010，30（9）：1777-1780.

[11] 国家技术监督检验检疫总局.JJF196-2006常用玻璃量器检定规程[M].北京：中国计量出版社，2006：6-9.

[12] 中国合格评定国家认可委员会.测量不确定度评估和报告通用要求[M].北京：中国计量出版社，2006：4.

（收稿日期2014-06-13 本文编辑：李亚聪）