HER2在膀胱尿路上皮细胞癌组织中的表达及其临床意义

管建云+++李军扩

[摘要] 目的 探讨人类表皮生长因子受体2（HER2）蛋白在膀胱尿路上皮细胞癌组织中的表达及其临床意义。 方法 应用免疫组织化学法检测HER2蛋白在62例膀胱尿路上皮细胞癌和23例正常膀胱黏膜组织标本中的表达情况，分析其与膀胱癌的发生发展、病理分级及临床分期的关系。 结果 HER2蛋白在膀胱尿路上皮细胞癌组织中的阳性表达率为43.5%，显著高于正常膀胱黏膜组织的0，差异有统计学意义（P<0.05）；HER2蛋白表达水平与膀胱尿路上皮细胞癌的病理分级、临床分期及复发相关（P<0.05）。 结论 HER2蛋白的过表达与人膀胱尿路上皮细胞癌的发生、发展相关。检测HER2的表达情况可能对预测膀胱尿路上皮细胞癌的预后及选择治疗方法具有重要价值。

[关键词] 膀胱肿瘤；尿路上皮细胞癌；人类表皮生长因子受体2蛋白；免疫组织化学

[中图分类号] R737.14 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）08（c）-0013-04

膀胱癌是常见的恶性肿瘤，其中90%以上为尿路上皮细胞癌[1]，病死率较高。肿瘤的药物靶向治疗具有选择性好、毒副作用小、临床疗效显著等特点，近年来已成为肿瘤临床治疗领域的研究热点之一。人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER2）蛋白在多种恶性肿瘤，如乳腺、卵巢、膀胱、胃、结肠、小肠和肺癌高表达。抗HER2治疗已成功应用于乳腺癌、胃癌的临床治疗，将来也有可能成为膀胱癌治疗的靶点。本研究采用免疫组织化学方法检测HER2蛋白在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达并分析其与膀胱尿路上皮细胞癌的临床病理关系，探讨其临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本组收集2010年6月～2013年3月安阳市肿瘤医院开放手术切除，均经病理证实为膀胱尿路上皮细胞癌患者的组织标本62例，男47例，女15例；年龄34～78岁，平均（57.8±6.1）岁；按WHO病理分级标准，Ⅰ级22例，Ⅱ级24例，Ⅲ级16例；按UICC-TNM临床分期标准：Ta～Tl期37例，T2～T4期25例；初发35例，复发27例。23例对照组正常膀胱组织取自同期其他膀胱手术患者，男17例，女6例；年龄26～72岁，平均（55.3±7.5）岁。两组患者的年龄、性别等差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 试剂与方法

鼠抗人HER2/neu单克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司；SP免疫组织化学试剂盒及DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。所有标本经常规10%甲醛固定，脱水，包埋，4 μm薄切片，脱蜡，分别作HE及免疫组织化学染色。免疫组织化学SP法，按试剂盒说明书操作。用PBS代替一抗作阴性对照，己知阳性片作为阳性对照。

1.3 结果判定

HER2蛋白阳性表达主要定位于肿瘤细胞膜，光镜下观察到细胞膜出现棕黄色颗粒，显色过强时呈棕褐色，计为阳性表达细胞。采用修订后的HercepTest评分标准[2]作结果判定：细胞膜无着色或<10%的细胞膜着色计为0，>10%的细胞膜见轻微着色计为+，>10%的细胞膜弱着色计为++，>10%的细胞膜中到强的完全着色计为+++；0和+为阴性，++和+++为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，小样本资料采用Fisher确切概率法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 膀胱尿路上皮癌和正常膀胱黏膜组织中HER2蛋白的表达

HER2蛋白阳性表达为细胞膜棕黄色颗粒状着色（图1）。HER2蛋白在62例膀胱癌组织中有27例呈阳性表达，表达率为43.5%，在23例正常膀胱组织中未见表达，表达率为0。HER2蛋白在膀胱癌组织中的阳性表达率明显高于正常膀胱黏膜组织，差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 HER2蛋白表达与膀胱尿路上皮癌临床病理特征的关系

HER2蛋白在膀胱尿路上皮癌Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中的阳性表达率分别为22.7%、41.7%、75.0%，随着膀胱癌病理分级的增高而增高，其组间比较，差异有统计学意义（P<0.05）。HER2蛋白在T2～T4组中的阳性表达率为64.0%，明显高于Ta～T1组的29.7%，差异有统计学意义（P<0.05）。HER2蛋白在初发、复发的膀胱癌组织中，阳性表达率分别为25.7%、66.7%，复发组明显高于初发组，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

HER2基因（也即c-erbB-2基因）为原癌基因，是HER家族的第2个成员，它定位人染色体17q21，编码p185跨膜糖蛋白。HER2蛋白为生长因子受体蛋白，由胞外配体结合区（extracellular domain，ECD）、单链跨膜区及胞内酪氨酸激酶区组成，具有内源性酪氨酸激酶活性。目前尚未发现其特异性配体，一般认为HER2蛋白的ECD与配体结合后，引发自身变构，导致其与同种蛋白或EGFR家族的其他成员形成同、异二聚体，使其胞内区发生自身磷酸化，从而具有酪氨酸激酶活性。其作用于特定的信号蛋白，激活磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K/Akt）和丝裂原活化蛋白激酶通路（RAS/MAPK）等信号通路，引发级联式放大反应，信号转导经细胞膜和细胞间质至细胞核，使核内早期反应基因如原癌基因c-fos、c-jun等激活，在转录水平增加，促进细胞增殖、分化、抗凋亡，从而导致癌变。MAPK信号通路对于促进细胞有丝分裂、阻止细胞凋亡起到关键作用[3]，PI3K/Akt信号通路与多种肿瘤的细胞增殖、凋亡抑制、肿瘤侵袭、转移及血管生成密切相关[4]。另外，RAS也可以直接激活PI3K[5]。HER2还可通过上调低氧诱导因子（HIF）而诱导血管内皮生长因子（VEGF）表达，促肿瘤血管生成。

HER2蛋白通常只在坯胎时期表达，成年后极少数组织内有低水平表达。在多种人类肿瘤包括乳腺癌、胃癌、子宫内膜癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌、神经胶质瘤和唾液腺癌等可见过度表达，并与之预后关系密切[6-7]；有研究表明除乳腺癌、大肠癌外，膀胱癌是第三个有HER2较高表达的恶性肿瘤[8]。国内外学者[9-10]对HER2基因及HER2蛋白与膀胱癌的关系进行了研究，证实在部分膀胱癌组织中HER2蛋白呈现出阳性过表达，此类肿瘤分期和分级多较高，容易发生浸润、转移，预后不佳。有报道显示[11-12]，HER2阳性表达与浸润性膀胱癌相关，并能作为指示肿瘤复发及病死率的独立预后因素。本研究显示HER2蛋白在部分膀胱癌组织中高表达，正常膀胱黏膜组织无表达，其差异有统计学意义（P<0.05），提示HER2参与了膀胱癌的发生，HER2蛋白过表达与膀胱癌的病理分级、临床分期和复发均有密切相关，差异有统计学意义（P<0.05），提示HER2蛋白表达阳性的膀胱癌恶性程度较高，且更容易复发。通过检测HER2的表达能够筛选出高复发风险的膀胱肿瘤患者并于术后密切监测[13]。这些肿瘤患者在根治性全膀胱切除术后HER2单克隆抗体的辅助性治疗可能获益。

临床上，膀胱移行细胞癌是一种常见的和致命性的癌症，易复发、复发后恶性程度增高，约25%的膀胱癌患者已是或将发展成为浸润性病变[1]，目前对这些患者的治疗是根治膀胱切除术或根治术后放、化疗相结合。尽管采取这些措施，仍有约50%的患者治疗后复发并最终在5年内死于该疾病。近20年来，晚期膀胱癌的生存率无明显提高，很大一方面是局限于无有效的新药物可用。近年来虽然其他实体肿瘤的分子靶向治疗已取得明显效果，但靶向治疗在膀胱癌的应用已明显落后。选择可能的分子靶点，应用靶向药物实施个体化治疗将会使更多患者受益。HER2在许多类型的癌症，包括膀胱尿路上皮癌中可能发挥重要的作用。目前曲妥珠单抗无论是单用还是联合化疗都己在HER2表达阳性的乳腺癌临床治疗中取得了明显疗效，以HER2为靶点的药物也已用于消化系统恶性肿瘤的临床治疗[14-15]。膀胱癌的抗HER2治疗已在动物试验及临床试验开展[16-17]，并显示出抗肿瘤疗效，但是要应用于临床治疗，还需要更深入的研究及整个泌尿外科参与和支持。

综上所述，HER2在部分膀胱尿路上皮癌中高表达，并与之发生、发展以及预后关系密切，检测HER2的表达情况可能对预测膀胱尿路上皮癌的预后及选择治疗方法具有重要价值。相信随着研究的不断深入，对于HER2过表达的膀胱尿路上皮癌患者，选择应用有效抑制HER2信号激活通路的药物，有望提高疗效、改善预后。

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（收稿日期：2014-06-27 本文编辑：郭静娟）

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（收稿日期：2014-06-27 本文编辑：郭静娟）