原发性高血压患者尿足细胞标志蛋白podocalyxin的临床研究＊

樊瑞芬，赵莲英，瞿 峰，王桃霞，王银龙，李 勇，赵世峰

（河北工程大学附属医院：1.肾内科；2.检验科；3.病理科；4.神经内科，河北邯郸 056002；5.河北省邯郸市第二医院内科 056002；6.冀中能源峰峰集团第二医院神经内科，河北邯郸 056002）

高血压是严重威胁人类健康的隐形杀手，可以引起心脑肾重要器官功能损害。作者选择了182例原发性高血压（EH）患者，检测尿微量清蛋白（mALB）及尿足细胞标志蛋白podocalyxin（PCX）等，探讨不同年龄、不同血压分级与肾脏损害的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院门诊、住院EH病史5年以上，肾功能正常的患者182例，其中男106例，年龄40～78岁，女76例，年龄42～80岁，均符合2004年WHO及2010年中国高血压防治指南高血压病诊断标准的规定，收缩压（SBP）≥140 mm Hg和（或）舒张压（DBP）≥90mm Hg，其中EH 1级51例，2级73例，3级58例。排除糖尿病、肾血管性、慢性肾脏病的患者。患者均服用1种或2种降压药（钙拮抗剂和／或美托洛尔）。另选取本院体检中心的健康体检者30例，其中男18例，年龄36～74岁，女12例，年龄35～73岁，作为对照组。两组年龄、性别肾功能均具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 尿蛋白定量测定 收集各组晨7：00至次日晨7：00全部尿液，测量并记录24h尿量，混匀，取20mL送检。

1.2.2 mALB测定 收集各组清晨首次清洁中段尿10mL，2 500r／min离心10min后取上清液，一部分用免疫比浊法测定mALB，试剂盒为英国朗道厂家提供，所用仪器为日立7170全自动生化分析仪。另一部分保存于－80℃低温冰箱中，避免反复冻融，待检。

1.2.3 PCX测定 取上述备检尿标本，由美国R＆D公司提供PCX ELISA试剂盒，用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入PCX抗原、生物素化的抗人PCX抗体、辣根过氧化物标记的抗生物素蛋白，经过彻底洗涤后用底物四甲基联苯胺（TMB）显色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，计算样品浓度。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0软件进行处理，计量资料用s表示，正态分布的两组均数间比较用t检验，计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组尿蛋白定量、mALB、PCX比较 与对照组比较，高血压组mALB、PCX显著升高（P＜0.01），尿蛋白定量差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 两组尿蛋白定量、mALB、PCX比较s）

表1 两组尿蛋白定量、mALB、PCX比较s）

组别 n 尿蛋白定量（g／24h） mALB（mg／L） PCX（ng／mL）30 0.096±0.024 11.200±5.900 2.032±0.652高血压组对照组182 0.110±0.037 35.700±12.200 9.295±1.586

2.2 不同年龄组患者尿蛋白定量、mALB、PCX比较 与小于60岁组mALB、PCX比较，其余两组显著升高（P＜0.05）；小于60岁组尿蛋白定量与其余两组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 不同年龄患者尿蛋白定量、mALB、PCX比较s）

表2 不同年龄患者尿蛋白定量、mALB、PCX比较s）

年龄 n 尿蛋白定量（g／24h）mALB（mg／L）PCX（ng／mL）85 0.100±0.056 9.230±9.160 5.250±2.060 60～＜70岁 37 0.090±0.135 20.850±5.060 14.940±3.400 70～80岁＜60岁60 0.110±0.256 21.790±6.590 15.570±4.140

2.3 不同年龄患者尿蛋白定量、mALB、PCX阳性率比较 与不同年龄组尿蛋白定量阳性率比较，mALB、PCX阳性率显著增加（P＜0.01）；与不同年龄组mALB阳性率比较，PCX阳性率显著增加（P＜0.05）。70～80岁各指标阳性率与小于60岁组比较显著升高（P＜0.05）。见表3。

表3 不同年龄患者尿蛋白定量、mALB、PCX阳性率比较［n（%）］

2.4 不同高血压分级尿蛋白定量、mALB、PCX的比较 与对照组尿蛋白定量、mALB、PCX比较，EH各组显著升高（P＜0.05）；EH 1级组尿蛋白定量与EH 3级组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；与EH 1级组 mALB、PCX比较，EH 3级组显著升高（P＜0.01）。见表4。

表4 对照组与不同分级EH尿蛋白定量、mALB、PCX的比较s）

表4 对照组与不同分级EH尿蛋白定量、mALB、PCX的比较s）

分组 n 尿蛋白定量（g／24h）mALB（mg／L）PCX（ng／mL）30 0.096±0.024 11.200±5.900 2.032±0.652 EH 1级组 51 0.103±0.028 10.580±4.830 3.390±1.214 EH 2级组 74 0.261±0.167 16.850±6.620 7.480±1.750 EH 3级组对照组57 0.282±0.365 39.950±7.210 10.230±2.850

3 讨 论

足细胞是高度特化的肾小球脏层上皮细胞，是组成肾小球滤过膜的主要成分，也是阻止大分子滤过的最后屏障。由于它带有负电荷，是防止突起之间粘连，维持裂孔膜结构和肾小球滤过膜电荷屏障的物质基础［1－2］。当糖尿病、高血压等疾病引起肾脏损伤时，足细胞首当其冲。开始表现为形态方面的改变，如足突融合、收缩，胞体缩小，假囊肿形成等变化。接着与血管基底膜剥离，脱落至肾小囊中，随尿液排出。足细胞脱落后，血管基底膜裸露，打破了毛细血管袢血压与肾小囊内静水压之间的平衡，毛细血管扩张，直至与肾小囊壁层细胞粘连［3］。此外，足细胞脱落后大量蛋白渗漏，使毛细血管袢透明样变性。这些因素都是最后导致肾小球硬化的关键［4］。最近几年大量的研究证实［5－6］，尿液中足细胞的出现是诊断早期微小病变和局灶性节段性肾小球硬化最有效的方法，采用镜检方法来检测尿液中的足细胞，灵敏度太低，现在多通过免疫荧光法、免疫酶联法等免疫学方法检测足细胞上的标志蛋白来检测尿液中的足细胞。足细胞的标志蛋白主要有nephrin、podocin、CD2相关蛋白（CD2AP）和PCX等。其中，PCX是足细胞中最特异的标志蛋白，只存在于足细胞上［7－8］。因此，已有研究采用免疫比浊法定量检测尿液中PCX，用于糖尿病肾病的早期诊断，尿液中PCX是否可以用于EH肾损害的早期诊断，未见文献报道。

本研究发现EH患者24h尿蛋白定量与对照组比较差异无统计学意义时，其mALB和PCX明显高于对照组，说明mALB、PCX可以较早反映高血压肾脏损害；从不同年龄、不同高血压级别观察发现，24h尿蛋白定量无明显差异，mALB和PCX差异显著；70～80岁mALB、PCX比小于60岁组显著升高，PCX阳性率高于mALB阳性率，提示随着年龄的增加高血压患者肾损害发病率提高［9］，尿足细胞反映肾小球损伤较尿蛋白更为敏感，与Yu等［10］研究结果一致；研究还显示不同血压分级mALB、PCX随着血压级别的升高而升高，说明年龄、血压级别可以作为EH肾损害的独立危险因素。mALB、PCX可以作为高血压病患者肾损害的早期指标，尿中检测到PCX提示已有肾小球足细胞损伤，肾小球滤过屏障已受损。

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［10］Yu D，Peternann A，Kunter U，et al.Urinary podocyte loss is a more specific marker of ongoing glomerular damage than proteinuria［J］.J Am Soc Nephrol，2005，16（6）：1733－1741.