荞麦黄酮复合物的抗真菌性阴道炎研究

姜妍+王妍+金玲+韩淑英

摘 要：为了观察荞麦黄酮复合物对小鼠真菌性阴道炎的影响，本文采用了体外实验MTT法评价荞麦黄酮复合物对白色念珠菌的抑制作用以及体内试验镜检阴道上皮脱落细胞数目。与模型对照组相比，各治疗组均可以使白色念珠菌减少且阴道上皮细胞脱落减少。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液疗效相近似。由此得知，荞麦黄酮复合物具有抑制白色念珠菌生长的能力，并且可以减少阴道上皮细胞的脱落。

关键词：荞麦黄酮复合物；抗菌活性；白色念珠菌性阴道炎

一、材料

雌性SPF级昆明小鼠（天津市山川红实验动物科技有限公司）；唐山市开滦医院检验科提供白色念珠菌临床新分离菌株；荞麦黄酮复合物（课题组成员已获得专利）采用正交试验法以水加分离剂（壳聚糖）技术从荞麦花叶提取的黄酮成分为主，配伍葛根、天花粉、麦冬、玄参和麻仁的水提物制成；显微镜（常州锐品精密仪器有限公司）、流式细胞仪（Sigma公司）。

二、方法

1.体外实验。取12支10ml灭菌试管。每支试管加入1.0ml培养基和1.0ml药液（荞麦黄酮复合物，西药对照氟康唑和中药对照洁尔阴），分别采用试管二倍稀释法，稀释倍数为：1：2～1：512。第11管不加菌液作为空白对照，第12管作为阳性对照。

2.体内实验。将110只昆明雌性小鼠随机挑出15只做空白对照组。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠处于假发情状态，6天后将密度为2.5×106cfu·mL-1的菌悬液20·L（即白色念珠菌孢子接种量为5×104cfu），灌注入小鼠阴道内。在接种白色念珠菌孢子后第2与第5天对小鼠进行模型鉴定。将造模成功的50只小鼠进行随机分组：模型对照组、西药氟康唑组、中药洁尔阴洗液对照组、荞麦黄酮复合物高剂量组、荞麦黄酮复合物中剂量组及荞麦黄酮复合物低剂量组。

三、指标检测

1.体外实验。采用MTT法，应用流式细胞仪，检测各实验组白色念珠菌数目。

2.体内试验。于实验结束时，用100ul PBS灌洗阴道5～6次，取10μl灌洗液置于清洁玻片上，镜检阴道上皮脱落细胞数。颈椎脱臼处死小鼠后，取阴道粘膜，Western-Blot法检测各组IGFBP7蛋白含量。

四、统计分析方法

采用SPSSl6.0统计软件处理数据。计量资料以表示。统计结果分别采用卡方检验和t检验进行数据处理，P<0.05作为显著性界限。

五、结果

1.体外实验结果。表1显示，正常对照组无白色念珠菌。模型组含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西阳性药物及荞麦黄酮复合物高剂量组白色念珠菌数目明显减少。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液对照组作用相近（P<0.01）。

表1荞麦黄酮复合物对白色念珠菌数的影响

■

1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.体内实验结果。各组小鼠阴道灌洗液脱落上皮细胞检查结果：见表2。

表2 荞麦黄酮复合物对阴道上皮脱落细胞数的影响

■

注：统计方法采用卡方检验。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差异有显著性意义，可以认为七组药物对小鼠阴道上皮脱落细胞抑制有差别。

六、讨论

目前的研究表明，白念珠菌为该病的主要致病菌，妊娠、口服避孕药物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制剂导致的菌群失调与该病关系十分密切。迄今为止，临床对本病的治疗重点还是西医抗真菌药物直接杀灭病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。药物的毒副作用和菌株的耐药性成为一个潜在的问题。随着对本病认识的深入以及医学微生态学的研究，出现了新的替代疗法：冲洗疗法、乳酸杆菌、硼酸及大蒜素治疗等。但是，由于药物带来的副作用或者使用的不便利性，一直没有广泛应用于临床。近年来，我国医学不断发展，中药制剂新剂型不断涌现，许多学者应用念珠菌动物模型，对中药制剂的安全性及有效性进行了研究。本次试验体内试验证实荞麦黄酮复合物具有逆转阴道上皮细胞脱落的作用，并且体外实验证明其可以抑制白色念珠菌生长。而在药物的副作用及远期疗效方面的研究不够深入。在以后的工作中，还可以筛选剂型稳定、效高、价廉、副作用少、顺应性好的药物进行广泛、多层次研究，以更好地服务于患者。

摘 要：为了观察荞麦黄酮复合物对小鼠真菌性阴道炎的影响，本文采用了体外实验MTT法评价荞麦黄酮复合物对白色念珠菌的抑制作用以及体内试验镜检阴道上皮脱落细胞数目。与模型对照组相比，各治疗组均可以使白色念珠菌减少且阴道上皮细胞脱落减少。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液疗效相近似。由此得知，荞麦黄酮复合物具有抑制白色念珠菌生长的能力，并且可以减少阴道上皮细胞的脱落。

关键词：荞麦黄酮复合物；抗菌活性；白色念珠菌性阴道炎

一、材料

雌性SPF级昆明小鼠（天津市山川红实验动物科技有限公司）；唐山市开滦医院检验科提供白色念珠菌临床新分离菌株；荞麦黄酮复合物（课题组成员已获得专利）采用正交试验法以水加分离剂（壳聚糖）技术从荞麦花叶提取的黄酮成分为主，配伍葛根、天花粉、麦冬、玄参和麻仁的水提物制成；显微镜（常州锐品精密仪器有限公司）、流式细胞仪（Sigma公司）。

二、方法

1.体外实验。取12支10ml灭菌试管。每支试管加入1.0ml培养基和1.0ml药液（荞麦黄酮复合物，西药对照氟康唑和中药对照洁尔阴），分别采用试管二倍稀释法，稀释倍数为：1：2～1：512。第11管不加菌液作为空白对照，第12管作为阳性对照。

2.体内实验。将110只昆明雌性小鼠随机挑出15只做空白对照组。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠处于假发情状态，6天后将密度为2.5×106cfu·mL-1的菌悬液20·L（即白色念珠菌孢子接种量为5×104cfu），灌注入小鼠阴道内。在接种白色念珠菌孢子后第2与第5天对小鼠进行模型鉴定。将造模成功的50只小鼠进行随机分组：模型对照组、西药氟康唑组、中药洁尔阴洗液对照组、荞麦黄酮复合物高剂量组、荞麦黄酮复合物中剂量组及荞麦黄酮复合物低剂量组。

三、指标检测

1.体外实验。采用MTT法，应用流式细胞仪，检测各实验组白色念珠菌数目。

2.体内试验。于实验结束时，用100ul PBS灌洗阴道5～6次，取10μl灌洗液置于清洁玻片上，镜检阴道上皮脱落细胞数。颈椎脱臼处死小鼠后，取阴道粘膜，Western-Blot法检测各组IGFBP7蛋白含量。

四、统计分析方法

采用SPSSl6.0统计软件处理数据。计量资料以表示。统计结果分别采用卡方检验和t检验进行数据处理，P<0.05作为显著性界限。

五、结果

1.体外实验结果。表1显示，正常对照组无白色念珠菌。模型组含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西阳性药物及荞麦黄酮复合物高剂量组白色念珠菌数目明显减少。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液对照组作用相近（P<0.01）。

表1荞麦黄酮复合物对白色念珠菌数的影响

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1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.体内实验结果。各组小鼠阴道灌洗液脱落上皮细胞检查结果：见表2。

表2 荞麦黄酮复合物对阴道上皮脱落细胞数的影响

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注：统计方法采用卡方检验。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差异有显著性意义，可以认为七组药物对小鼠阴道上皮脱落细胞抑制有差别。

六、讨论

目前的研究表明，白念珠菌为该病的主要致病菌，妊娠、口服避孕药物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制剂导致的菌群失调与该病关系十分密切。迄今为止，临床对本病的治疗重点还是西医抗真菌药物直接杀灭病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。药物的毒副作用和菌株的耐药性成为一个潜在的问题。随着对本病认识的深入以及医学微生态学的研究，出现了新的替代疗法：冲洗疗法、乳酸杆菌、硼酸及大蒜素治疗等。但是，由于药物带来的副作用或者使用的不便利性，一直没有广泛应用于临床。近年来，我国医学不断发展，中药制剂新剂型不断涌现，许多学者应用念珠菌动物模型，对中药制剂的安全性及有效性进行了研究。本次试验体内试验证实荞麦黄酮复合物具有逆转阴道上皮细胞脱落的作用，并且体外实验证明其可以抑制白色念珠菌生长。而在药物的副作用及远期疗效方面的研究不够深入。在以后的工作中，还可以筛选剂型稳定、效高、价廉、副作用少、顺应性好的药物进行广泛、多层次研究，以更好地服务于患者。

摘 要：为了观察荞麦黄酮复合物对小鼠真菌性阴道炎的影响，本文采用了体外实验MTT法评价荞麦黄酮复合物对白色念珠菌的抑制作用以及体内试验镜检阴道上皮脱落细胞数目。与模型对照组相比，各治疗组均可以使白色念珠菌减少且阴道上皮细胞脱落减少。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液疗效相近似。由此得知，荞麦黄酮复合物具有抑制白色念珠菌生长的能力，并且可以减少阴道上皮细胞的脱落。

关键词：荞麦黄酮复合物；抗菌活性；白色念珠菌性阴道炎

一、材料

雌性SPF级昆明小鼠（天津市山川红实验动物科技有限公司）；唐山市开滦医院检验科提供白色念珠菌临床新分离菌株；荞麦黄酮复合物（课题组成员已获得专利）采用正交试验法以水加分离剂（壳聚糖）技术从荞麦花叶提取的黄酮成分为主，配伍葛根、天花粉、麦冬、玄参和麻仁的水提物制成；显微镜（常州锐品精密仪器有限公司）、流式细胞仪（Sigma公司）。

二、方法

1.体外实验。取12支10ml灭菌试管。每支试管加入1.0ml培养基和1.0ml药液（荞麦黄酮复合物，西药对照氟康唑和中药对照洁尔阴），分别采用试管二倍稀释法，稀释倍数为：1：2～1：512。第11管不加菌液作为空白对照，第12管作为阳性对照。

2.体内实验。将110只昆明雌性小鼠随机挑出15只做空白对照组。剩余60只隔日皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.1ml·d-1使小鼠处于假发情状态，6天后将密度为2.5×106cfu·mL-1的菌悬液20·L（即白色念珠菌孢子接种量为5×104cfu），灌注入小鼠阴道内。在接种白色念珠菌孢子后第2与第5天对小鼠进行模型鉴定。将造模成功的50只小鼠进行随机分组：模型对照组、西药氟康唑组、中药洁尔阴洗液对照组、荞麦黄酮复合物高剂量组、荞麦黄酮复合物中剂量组及荞麦黄酮复合物低剂量组。

三、指标检测

1.体外实验。采用MTT法，应用流式细胞仪，检测各实验组白色念珠菌数目。

2.体内试验。于实验结束时，用100ul PBS灌洗阴道5～6次，取10μl灌洗液置于清洁玻片上，镜检阴道上皮脱落细胞数。颈椎脱臼处死小鼠后，取阴道粘膜，Western-Blot法检测各组IGFBP7蛋白含量。

四、统计分析方法

采用SPSSl6.0统计软件处理数据。计量资料以表示。统计结果分别采用卡方检验和t检验进行数据处理，P<0.05作为显著性界限。

五、结果

1.体外实验结果。表1显示，正常对照组无白色念珠菌。模型组含有大量白色念珠菌（P<0.01）。中、西阳性药物及荞麦黄酮复合物高剂量组白色念珠菌数目明显减少。荞麦黄酮复合物高剂量与中药洁尔阴洗液对照组作用相近（P<0.01）。

表1荞麦黄酮复合物对白色念珠菌数的影响

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1p<0.05vs正常，2p<0.01vs 正常，3p<0.05vs 模型，4p<0.01vs模型

2.体内实验结果。各组小鼠阴道灌洗液脱落上皮细胞检查结果：见表2。

表2 荞麦黄酮复合物对阴道上皮脱落细胞数的影响

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注：统计方法采用卡方检验。χ2=24.263，ν=6，P<0.005，差异有显著性意义，可以认为七组药物对小鼠阴道上皮脱落细胞抑制有差别。

六、讨论

目前的研究表明，白念珠菌为该病的主要致病菌，妊娠、口服避孕药物、糖尿病、使用抗生素以及免疫抑制剂导致的菌群失调与该病关系十分密切。迄今为止，临床对本病的治疗重点还是西医抗真菌药物直接杀灭病原菌，如氟康唑、制霉菌素等。药物的毒副作用和菌株的耐药性成为一个潜在的问题。随着对本病认识的深入以及医学微生态学的研究，出现了新的替代疗法：冲洗疗法、乳酸杆菌、硼酸及大蒜素治疗等。但是，由于药物带来的副作用或者使用的不便利性，一直没有广泛应用于临床。近年来，我国医学不断发展，中药制剂新剂型不断涌现，许多学者应用念珠菌动物模型，对中药制剂的安全性及有效性进行了研究。本次试验体内试验证实荞麦黄酮复合物具有逆转阴道上皮细胞脱落的作用，并且体外实验证明其可以抑制白色念珠菌生长。而在药物的副作用及远期疗效方面的研究不够深入。在以后的工作中，还可以筛选剂型稳定、效高、价廉、副作用少、顺应性好的药物进行广泛、多层次研究，以更好地服务于患者。