大肠癌中STAT3、Twist的表达及与EMT关系的研究*

钟宝元

大肠癌（结直肠癌）是我国常见的恶性肿瘤，其发病率有逐年增高的趋势。由于大肠癌的早期症状常不典型且不易被发现，确诊时病程已到中晚期。因此，通过研究大肠癌的发生、发展机理，为其治疗提供更多的有效手段就尤为重要。本研究分析与探讨大肠癌中STAT3、Twist的表达及与EMT的关系，具体报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2005-2011年本院结直肠癌、癌旁组织标本80例，经常规石蜡包埋与10%中性甲醛固定标本。其中男45例，女35例，年龄为32~79岁，平均（51.2±10.5）岁，组织学分级：高中分化30例，低分化50例；44例肿瘤直径未超过5 cm，36例肿瘤直径超过5 cm。

1.2 方法 选用由北京博奥森公司生产的STAT3、Twist及EMT兔抗人多克隆抗体，DAB显色试剂盒、SABC（链霉亲和素-生物素复合物）试剂盒，采用免疫组化方法，切片常规石蜡，并脱蜡至水。用3%的双氧水进行10 min的室温封闭，3次蒸馏水洗，10 min抗原修复。每5分钟PBS洗3次，再加入适量山羊血清封闭液，20 min的室温封闭，多与液体取出，滴加一抗，并在4 ℃环境下过夜。每1分钟PBS洗3次，并适量加入生物素化二抗，室温（37 ℃）封闭20 min，每2分钟PBC洗3次。DAB显色，水洗蒸馏，盐酸乙醇分化，苏木精1 min复染。

1.3 抗体阳性判断标准 STAT3、Twist以细胞浆和/或细胞核呈棕黄色者为阳性细胞，EMT阳性表达为棕褐色，具体在细胞膜上定位，或者线形围绕细胞膜[1-2]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 15.0统计学软件进行处理，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 STAT3、Twist及EMT的表达对比 大肠癌中Twist蛋白阳性率为57.5%（46/80），癌旁组织阳性率26.3%（21/80）；大肠癌中STAT3蛋白阳性率63.7%（51/80），癌旁组织阳性率17.5%（14/80）；大肠癌中EMT阳性率为17.5%（14/80），癌旁阳性率62.5%（50/80），两组比较差异均有统计学意义（ 字2=50.00、75.21、66.58，P<0.05），见表 1。

表1 大肠癌及癌旁组织中STAT3、Twist及EMT的表达对比 例

2.2 STAT3、Twist表 达 与 EMT的 关 系 STAT3、Twist的表达和EMT呈现正相关性（r’s=0.262、0.243，P<0.05），见表 2。

表2 STAT3、Twist的表达与EMT的关系 例

3 讨论

STAT3是在1994年作为白细胞介素-6信号传递中的急性期反应因子被纯化的，是酸化激活酪氨酸磷的一个STAT 家族成员[3]。其异常表达与EMT现象在大肠癌中的关系，目前在国内外尚未见相关报道，而且有关STAT3蛋白的异常表达与EMT现象的作用机制的研究尚处于空白。很多实践研究表明，作为JAK/STAT的关键性信号分子，持续性激活STAT3和人体细胞恶性转化进程存在相关性[4-5]。在大肠癌的研究中发现，STAT3的异常激活在结直肠肿瘤中起了重要的作用[6-7]。

在肿瘤进展中，EMT是其关键过程之一，EMT的主要特征在于上皮细胞间质特性的获得与上皮细胞极性的丧失，和肿瘤细胞远处转移及原位侵袭具有相关性[8]。用于对EMT进行验证的分子学标志物有：上皮标志物E-cad和Cytok表达降低以及间质标志物N-cadherin和Vimentin达的增加[9-11]。EMT表型标志有三维侵袭、迁移性、增强抗凋亡能力，主要机制是在调控因子作用下造成E-cad表达降低与β-cat核定位，导致癌细胞膜上具有粘连作用的β-cat与E-cad降低，引发癌细胞的极性变化、粘连消失及形态改变，从而参与肿瘤转移与侵袭全过程[12-15]。本研究显示，大肠癌中，Twist蛋白的阳性率为57.5%，癌旁组织阳性率26.3%。STAT3蛋白阳性率63.7%，癌旁组织阳性率17.5%，大肠癌中，Twist与STAT3蛋白阳性率高于癌旁组织阳性率（P<0.05），EMT阳性率为17.5%，比癌旁阳性率62.5%低（P<0.05），STAT3、Twist的表达和EMT呈现正相关性（P<0.05）。

综上所述，大肠癌中SATA3与Twist表达和肿瘤生物学特征存在相关性，而激活SATA3可能会提升Twist与EMT的表达，对STAT3、Twist及EMT的检测有助于预测肿瘤侵袭转移与判断预后。

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