依达拉奉对小鼠脑损伤后脑功能的保护机理*

高占良 王合金 何建凡 阳书坤

当今人类死亡率最高、致残率最高、恢复最困难的脑卒中也是我国老年人中最常见和多发的疾病。根据世界卫生组织的资料显示，在57个有数据的国家中[1]，将脑卒中列为死亡率排名第三的有40个国家，而中国和日本已列为首位[2]。所以，降低死亡率和致残率是当前医学亟待攻克的主要难点和重点。成功开发出治疗脑卒中的药物将对社会带来极大的价值，为家庭卸下极大的重担。依达拉奉是亲脂性的基团，能够起到清除自由基的作用，能够清除患者体内的活性氧分子，在这个基础上，保护血管内皮细胞，防止神经细胞发生死亡或者重度损伤[3]。目前，依达拉奉对临床治疗脑梗死有较好的疗效[4]。

1 材料与方法

1.1 实验动物 本实验选择40只雄性小鼠，体重20~40 g。

1.2 实验方法 （1）取体重20~40 g小鼠常规饲养5周，选择体重在35~60 g小鼠编入实验组和对照组各20只。（2）将小鼠固定在解剖板上，剥离小鼠两侧颈动脉，使用颈动脉丝线结扎法控制小鼠脑供氧。使其两侧颈动脉直径均在1 mm以下，脑血压下降70%以上。（3）使用动物用压力呼吸机维护小鼠生命体征1 h以上。（4）恢复小鼠脑部供血，缝合皮肤，继续饲养3周，观察小鼠体征变化。（5）在生命体征维持阶段，实验组小鼠给予依达拉奉药物治疗，对照组给予等量的生理盐水，在相同条件下培养，测量两组小鼠SOD、MAD等指标含量。（6）处死所有小鼠，取血，取全脑，完成试验标本制作。

1.2.1 术前准备 （1）对试验小鼠进行充分麻醉，麻醉用药为乌拉坦，浓度控制在1 g/kg。（2）小鼠接入动物用呼吸机，建立机械通气通道。（3）连接动物用四肢皮下心电图。（4）找到股静脉，使用生理盐水微量泵建立静脉通道。

1.2.2 实验过程 （1）剥离小鼠两侧颈动脉，使用颈动脉丝线结扎法控制小鼠脑供氧。使其两侧颈动脉直径均在1 mm以下，脑血压下降70%以上。（2）实验组在静脉通道内输入依达拉奉3 mg/kg。对照组继续使用生理盐水维护静脉通道。（3）1 h后，解除对小鼠颈动脉的结扎，缝合皮肤伤口。

1.2.3 组织取材 （1）完成试验后4周，观察小鼠的心率指标，观察小鼠的伤口愈合情况。（2）小鼠活体状态下各取下腔静脉血20 mL。（3）小鼠取全脑，沿纵隔劈开，左脑用于标本制作，右脑用于化学比色法检测SOD、MDA以及S-100蛋白的含量。（4）半脑在福尔马林岑克尔溶液中浸泡24 h，用酒精脱水，加入二甲苯浸泡至透明，均匀淋入石蜡包裹，使用苏木素染色液染色。最终形成半脑标本。（5）利用化学比色法检测MDA、SOD的浓度，利用酶联免疫吸附法测定S-100蛋白含量。

1.3 疗效判定 有效：小鼠SOD、MAD与S-100蛋白含量下降幅度不明显；无效：小鼠SOD、MAD及S-100蛋白含量等指标下降幅度较为明显。

1.4 统计学处理 采用软件SPSS 10.0对数据进行统计分析，计量资料以（±s）表示，采用t检验，计数资料采用 字2检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组小鼠心肺复苏的有效率比较 实验组有效率70%（14/20），对照组有效率20%（4/20），两组比较差异有统计学意义（ 字2=4.89，P<0.05）。

2.2 两组治疗前后SOD的含量比较 治疗前两组小鼠体内的SOD含量差异无统计学意义（P>0.05），进行药物辅助治疗后，实验组小鼠的SOD含量明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组小鼠的SOD含量比较（±s） U/mL

表1 两组小鼠的SOD含量比较（±s） U/mL

组别 治疗前 治疗后实验组（n=20） 34.24±3.44 36.99±3.60对照组（n=20） 34.68±3.40 31.56±3.69 t值 0.0043 4.98 P值 >0.05 <0.05

2.3 两组治疗前后MDA的含量变化 两组治疗前MDA的含量比较差异无统计学意义（P>0.05），治疗后实验组MDA的含量降低，对照组MDA的含量增加，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 两组小鼠的MDA含量分析（±s） μmol/g

表2 两组小鼠的MDA含量分析（±s） μmol/g

组别 治疗前 治疗后实验组（n=20） 8.79±3.50 6.15±3.01对照组（n=20） 8.37±3.10 10.12±4.12 t值 0.0055 4.87 P值 >0.05 <0.05

2.4 两组治疗前后S-100蛋白的含量变化 两组治疗前S-100蛋白的含量比较差异无统计学意义（P>0.05），治疗后实验组S-100蛋白的含量增加，对照组S-100蛋白的含量降低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 两组小鼠的S-100蛋白含量分析（x-±s） μg/L

3 讨论

相关研究发现，早期自由基的清除和晚期的抗炎症机制是依达拉奉得以发挥脑功能保护和神经保护功能的主要途径。依达拉奉可消除自由基，在抑制脂质过氧化功能上具有显著作用，可彻底修复脑缺血及脑缺血引起的脑水肿、组织受损[5-6]。在临床治疗中，对脑卒中治疗一般是在发病数小时后[7]。考察小鼠生命周期与人体生命周期的投射作用，本文研究小鼠缺血型脑卒中模型1 h时抢救过程，等效于人类缺血性脑卒中2~4 h抢救过程[8]。本研究从实际出发，添加依达拉奉药效实验观察依达拉奉在缺血2 h后对脑缺血的保护作用[9]。

本研究纳入40只小鼠，分为两组，试验的结果表明：治疗前，两组小鼠体内SOD含量分别为（34.24±3.44）U/mL、（34.68±3.40）U/mL，治疗后分别 为（36.99±3.60）U/mL、（31.56±3.69）U/mL， 差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组小鼠体内的MDA含量无明显差异，治疗后，实验组小鼠的MDA含量为（6.15±3.01）μmol/g，明显低于对照组的（10.12±1.21）μmol/g，差异有统计学意义（P<0.05）。而在S-100蛋白含量上，治疗后两组差异具有统计学意义（P<0.05）。这就表明依达拉奉的临床效果显著[10]。

实验主要采用小鼠证实了在脑卒中、急性脑缺血发生后几小时内使用依达拉奉进行治疗，明显缓解脑缺血程度，降低脑梗死体积，充分抑制脑水肿和并发症的出现[11-12]。

综上所述，依达拉奉在脑损伤后脑功能保护，具有明显的作用，是治疗脑部疾病的重要药物之一，值得在临床治疗中推广应用。

[1] 曹德峰.疏血通及血栓通治疗急性缺血性中风对比分析[J].中国医学创新，2012，9（36）：55-56.

[2] 桂委.驻马店第一人民医院住院患者抗菌药物应用情况调查分析[J].中国医学创新，2010，7（20）：13-15.

[3] 杨波.依达拉奉对老年脑梗死患者血清TNF-α和IL-8的影响及其疗效[J].中国老年学杂志， 2012，11（3）：60-61.

[4] 张东风.依达拉奉联合血栓通注射液治疗48例急性脑梗死疗效观察[J].中国现代医生，2012，15（28）：35-36.

[5] 王杨光.高血压并发急性心肌梗死的临床研究[J].中外医学研究，2013，11（7）：17-19.

[6] 徐添.脑卒中发病与预后的前瞻性队列研究[D].苏州：苏州大学，2014.

[7]杨晓光.依达拉奉治疗急性脑梗死的疗效及安全评价[D].大连：大连医科大学，2006.

[8]郭民旺.观察依达拉奉对急性脑出血的疗效[J].中国实用医药，2010，12（32）：25-26.

[9] 杨春伍.依达拉奉对急性脑出血血清超敏C-反应蛋白和神经功能恢复的影响[J].中国医学创新， 2012，9（13）：101-102.

[10] 傅绍辉.依达拉奉联合醒脑静注射液治疗急性脑出血临床观察 [J].中国中医急症， 2012，9（4）：95-96.

[11] 姚丽娟.联合用药对急性脑梗死临床治疗效果的观察[J].中国医药指南，2013，15（19）：38-39.

[12] 刘贵安.依达拉奉治疗急性脑出血的疗效观察[J].中外医学研究，2011，13（26）：84-85.