BRG1在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义*

时梅林 白津 梅鹏金 郑骏年

脑肿瘤中胶质瘤发病率最高，在国内约占原发性颅内肿瘤的40%~50%，由于肿瘤呈浸润性生长，手术、化疗及放疗效果均不理想，5年生存率不到3%[1]。BRG1是SWI/SNF染色质重塑复合物家族重要组成成分，含有一个具有ATP酶活性的类解旋酶亚基，通过ATP水解提供动力从而实现染色质重组[2]。BRG1已被证明在调节基因表达、细胞周期以及肿瘤发生发展上具有重要意义[3]。早期研究发现，BRG1在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、卵巢癌等组织和细胞系中表达减少或缺失[4-5]。但是近来研究却发现，BRG1在黑色素瘤、前列腺癌和胃癌中表达升高，并且与肿瘤的进展密切相关[6-8]。BRG1在人脑胶质瘤中的表达情况在国内外尚未见报道，为了解BRG1是否参与了胶质瘤的形成过程，笔者采用组织芯片和免疫组化技术检测了BRG1在190例胶质瘤组织、8例癌旁组织以及8例正常脑组织中的表达情况，并结合临床资料分析其相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集本院2008年1月-2011年12月胶质瘤手术标本190例，所有标本经病理确诊。参照WHO胶质瘤组织分类标准。将Ⅰ~Ⅱ级归为良性组、Ⅲ~Ⅳ级归为恶性组，其中良性胶质瘤组织120例，恶性70例（病理类型为：星形细胞瘤127例、胶质母细胞瘤38例、少突星形细胞瘤14例、室管膜瘤11例）。患者术前均未接受放疗、化疗及生物治疗，年龄10~73岁，平均47岁，男118例，女72例。另取正常脑组织和癌旁组织各8例作为对照。

1.2 方法

1.2.1 组织芯片构建 所有标本均经福尔马林溶液固定、石蜡包埋、4 μm厚连续切片，用于HE及免疫组化染色。根据HE染色切片确定具有代表性病变的部位，直径取1.0 mm，组织芯片间距1.0 mm。

1.2.2 免疫组化法检测BRG1表达 组织芯片脱蜡至水，抗原修复后，分别加入3% H2O2和10%正常山羊血清，孵育30 min后加入兔抗人BRG1单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）或PBS替代一抗作为阴性对照，4 ℃过夜，最后分别加入二抗和辣根过氧化物酶标记链霉卵白素，用DAB显色，苏木素复染，常规脱水封片。免疫组化超敏试剂盒、DAB显色试剂盒均购买于北京中杉金桥生物技术公司。

1.2.3 结果判断 BRG1染色阳性细胞为胞核呈棕黄色至深褐色，部分胞质同时呈淡黄色，若只有胞质着色则视为阴性。以免疫反应得分（IRS）评估组织阳性程度，IRS=SI（染色强度）×PP（阳性细胞百分率）。SI评分标准：0分，阴性；1分，弱阳性；2分，中等阳性；3分，强阳性。PP评分标准：1分，阳性细胞0%~10%；2分，阳性细胞11%~50%；3分，阳性细胞>50%。高倍镜下随即取5个不同的视野，其IRS平均值≥3分即判定为免疫反应阳性（+）。实验均在双盲法下完成。

1.3 统计学处理 应用SPSS 16.0软件进行统计学分析，计数资料比较采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 BRG1在人脑胶质瘤中的表达升高 BRG1在恶性胶质瘤组织（Ⅲ~Ⅳ级）、良性胶质组织（Ⅰ~Ⅱ级）、癌旁组织及正常脑组织中均表达于细胞核，呈棕黄色至深褐色，部分细胞质同时为黄色（图1）。数据统计结果如图2所示，BRG1在恶性胶质瘤组织中阳性表达率为82.9%（58/70），在良性胶质瘤中阳性表达率为80.8%（97/120）、在癌旁组织中阳性表达率为25%（2/8），在正常脑组织中的阳性表达率为25%（2/8）。BRG1的表达在癌旁组织与良性胶质瘤之间、癌旁组织与恶性胶质瘤之间差异均有统计学意义（P=0.000），但是在良性和恶性之间差异无统计学意义（P=0.847）。

图1 BRG1在胶质瘤组织中免疫组化染色情况

2.2 BRG1的表达与各临床病理特征之间的相关性 笔者发现，BRG1的表达与患者年龄、性别、WHO分级及病理类型均没有显著相关性，差异均无统计学意义（P>0.05）。虽然WHO分级和病理类型是胶质瘤预后重要的指标，但是笔者没有发现BRG1和它们之间有关系，见表1。

3 讨论

图2 BRG1在不同组织中的阳性表达率

表1 BRG1在190例胶质瘤中的表达与各临床病理特征的相关性

抑癌基因在抑制细胞生长、增殖及分化过程中起重要的负调节作用，并能潜在地抑制肿瘤生长。如果其功能失活或出现基因缺失、突变等异常，可导致细胞恶性转化从而发生肿瘤[9]。BRG1（Brahma-related gene 1）是SWI/SNF家族的重要成员，定位于人类染色体19 p上，其mRNA长度为5247 bp，基因编码的蛋白质相对分子量为2.05×105，它主要通过ATP水解产生的动力来影响细胞分裂过程中染色质的重组，使一些特异性的基因不能表达和抑制[2]。SWI/SNF复合物与许多基因的激活和转录的抑制有关，它主要通过转录的活化和抑制功能来控制肿瘤的生长[3]。不同研究发现，BRG1在膀胱癌、肺癌、卵巢癌、乳腺癌、食道癌、胰腺癌等多种肿瘤组织中表达缺失或突变[3-5，10-11]。

早期研究表明，BRG1在多种肿瘤组织和细胞系中表达失活，BRG1可以与Rb、BRCA等肿瘤抑制因子结合，通过上调P16、P15、P21等细胞周期蛋白从而抑制肿瘤细胞生长[12]。然而近来越来越多的研究结果却与早期相矛盾。BRG1被发现在胃癌、前列腺癌和黑色素瘤中表达升高[6-8]。BRG1可以通过抑制p53的活性从而调节黑色素瘤等肿瘤细胞的增殖[13-15]。此外，国内也有学者发现，BRG1在胃癌和宫颈癌中高表达与肿瘤的分期、有无淋巴结转移及浸润深度等临床病理因素有关[16-17]。因此，就目前的研究现状来说，BRG1在肿瘤中的作用是不确切的，BRG1的丢失可以导致肿瘤形成，然而也有研究发现沉默BRG1会抑制肿瘤细胞的增殖。

本研究结果发现，BRG1的表达在癌旁组织与良性胶质瘤之间、癌旁组织与恶性胶质瘤之间差异均有统计学意义（P=0.000），而在良性、恶性之间差异无统计学意义（P=0.847）。此外，BRG1的表达与各临床病理参数之间均没有相关性，这说明BRG1可能只参与了胶质瘤的形成过程。笔者的结果与BRG1参与了胃癌、宫颈癌和前列腺癌的进展不相符，但与Lin等[8]在黑色素瘤中研究结果一致。分析其原因，可能与其启动子异常甲基化、基因突变及其转录激活功能异常等因素有关[18]。笔者猜测，这可能是由于介导了不同的信号通路及组织或细胞类型的种属特异性造成的，其具体的分子机制还有待进一步的研究。

综上所述，BRG1在人胶质瘤中表达升高，并与胶质瘤的发生具有一定的相关性，BRG1在胶质瘤的发生过程中可能有重要作用。本研究为笔者判断胶质瘤的生物学行为和预后提供一个重要参考，BRG1有望成为胶质瘤新的治疗靶点。

[1]陶钧，仇波，张东勇，等.人脑胶质瘤干细胞Fas/Fas-L mRNA表达的研究[J]，中华肿瘤防治杂志，2011，18（18）：1450-1454.

[2] Asp P，Wihlborg M，Karlen M，et al.Expression of BRG1， a human SWI/SNF component， affects the organization of actin filaments through the RhoA signaling pathway[J].J Cell Sci，2002，115（13）：2735-2746.

[3] Reisman D，Glaros S，Thompson E A.The SWI/SNF complex and cancer[J]. Oncogene，2009，28（14）：1653-1668.

[4] Glaros S，Cirrincione G M，Muchardt C，et al.Reisman D. The reversible epigenetic silencing of BRM： implications for clinical targeted therapy[J].Oncogene，2007，26（49）：7058-7066.

[5] Reisman D M，Sciarrotta J，Wang W，et al.Loss of BRG1/BRM in human lung cancer cell lines and primary lung cancers：correlation with poor prognosis[J].Cancer Res，2003，63（3）：560-566.

[6] Sentani K，Oue N，Kondo H，et al.Increased expression but not genetic alteration of BRG1， a component of the SWI/SNF complex，is associated with the advanced stage of human gastric carcinomas[J].Pathobiology，2001，69（6）：315-320.

[7] Sun A，Tawfik O，Gayed B，et al.Aberrant expression of SWI/SNF catalytic subunits BRG1/BRM is associated with tumor development and increased invasiveness in prostate cancers[J].Prostate，2007，67（2）：203-213.

[8] Lin H，Wong R P，Martinka M，et al.BRG1 expression is increased in human cutaneous melanoma[J].Br J Dermatol，2010，163（3）：502-510.

[9]吕佳，孙晓阳，丁涟沭.EZH2基因沉默对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的研究[J].中华肿瘤防治杂志，2012，19（7）：494-497.

[10] Decristofaro M F，Betz B L，Rorie C J，et al.Characterization of SWI/SNF protein expression in human breast cancer cell lines and other malignancies[J].J Cell Physiol，2001，186（1）：136-145.

[11] Hornick J L，Dal Cin P，Fletcher C D.Loss of INI1 expression is characteristic of both convebtional and proximal-type epithelioid sarcoma[J].Am j Surg Pathol，2009，33（4）：542-550.

[12] Becker T M，Haferkamp S，Dijkstra M K，et al.The chromatin remodellling factor BRG1 is a novel binding partner of the tumor suppressor P16INK4a[J].Molecular cancer，2009，8（1）：4.

[13] Wang X，Sansam C G，Thom C S，et al.Oncogenesis caused by loss of the SNF tumor suppressor is dependent on activity of BRG1， the ATPase of SWI/SNF chromatin remodeling complex[J].Cancer Res，2009，69（20）：8094-8101.

[14] Naidu S R，Love I M，Imbalzano A N，et al.The SWI/SNF chromatin remodeling subunit BRG1 is a critical regulator of P53 necessary for proliferation of malignant cells[J].Oncogene，2009，28（27）：2492-2501.

[15] Keenen B，Qi H，Saladi S V，et al.Heterogeneous SWI/SNF chromatin remodeling complexs promote expression of microphthalmia-associated transcription factor target genes in melanoma[J].Oncogene，2010，29（1）：81-92

[16]李青，周晓军，谢海龙，等.胃癌中BRG1蛋白的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2004，20（4）：402-405.

[17]王秀明，何莲芝.BRG1基因在宫颈癌中的表达[J].安徽医学，2010，31（5）：446-448.

[18] Zhang B，Chambers K J，Faller D V，et al.Reprogramming of the SWI/SNF complex for co-activation or co-repression in prohibitinmediated estrogen receptor regulation[J].Oncogene，2007，26（50）：7153-7157.