G蛋白耦联受体、CD44v6和E-cadherin在卵巢黏液性腺癌中的表达及意义

栾 磊

(齐齐哈尔医学院第一附属医院妇产科，黑龙江 齐齐哈尔 161000)

卵巢黏液性腺癌是由部分或全部含细胞内黏液的瘤细胞构成的肿瘤，病变进展中多种蛋白异常表达。富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5作为WNT信号通路的靶基因和肿瘤干细胞标记物，与多种肿瘤的生物学进展密切相关〔1，2〕。白细胞分化抗原(CD)44v6是一种跨膜糖蛋白，参与多种细胞生长、生存、分化的过程，在细胞恶变过程中参与黏附、移动和转移的过程〔3，4〕。上皮型黏附素(E-cadherin)是经典的黏附蛋白，在正常上皮中高表达，对维持上皮的结构和功能有重要作用，当其表达丢失后，可以引起上皮细胞的松解，使细胞易于迁移〔5，6〕。本研究针对卵巢黏液性腺癌术后组织中LGR5、CD44v6和E-cadherin的表达进行检测，关注其相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 我院近3年行卵巢黏液性腺癌根治术后的蜡块组织及临床资料114例作为观察组，均符合WHO中相关的标准，并经病理学医师再次HE切片后确定。年龄50～78(平均66.3)岁。我院同期行卵巢交界性黏液性囊腺瘤术后的组织蜡块70例作为对照组，年龄51～77(平均65.4)岁。我院同期行卵巢黏液性囊腺瘤术后的组织蜡块70例作为正常对照组，年龄52～70(平均64.3)岁。3组一般资料无明显差别。

1.2LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白的检测 LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白的检测应用免疫组化SABC法。三种抗体的浓缩液均购自武汉博士德生物工程公司，依据不同比例进行稀释后进行预实验，选择最理想的配比浓度进行正式实验，应用DAB染色，操作均按说明书进行，严格质控，减少误差。

1.3LGR5、CD44v6和E-cadherin结果的判断方法 LGR5以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性细胞，CD44v6以细胞质和(或)细胞膜中出现棕黄色为阳性细胞，E-cadherin以细胞膜中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。计数5个400倍视野，以阳性细胞≥5％定为阳性，以阳性细胞<5％定为阴性。

1.4统计学方法 采用SAS6.12软件进行χ2检验、线性相关分析。

2 结 果

2.1观察组不同临床特征患者LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白表达阳性率的比较 观察组LGR5、CD44v6和E-cadherin的表达与肿瘤的最大径、脉管浸润、TNM分期、腹水中是否有癌细胞密切相关。见表1。

表2 观察组不同临床特征患者LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白表达阳性率的比较〔n(％)〕

2.2LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白在三组中表达阳性率的比较 LGR5、CD44v6和E-cadherin在三组中表达阳性率的差别均显著(P<0.000 1)。见表2。

2.3观察组LGR5、CD44v6和E-cadherin表达的相关性分析 观察组LGR5和E-cadherin(r=-0.47，P=0.037 1)、CD44v6和E-cadherin(r=-0.49，P=0.0251)表达均呈负相关。

表2 LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白在三组中表达阳性率的比较〔n(％)〕

3 讨 论

卵巢黏液性腺癌多见于中老年人，肿瘤细胞与宫颈内膜、胃幽门部或小肠上皮相似，部分肿瘤中有散在的杯状细胞分布。病变发展时常伴有出血、坏死。多种研究认为卵巢黏液性囊腺癌在进展时有明显的间质侵袭。病理学者认为肿瘤的异质性明显，不仅反映肿瘤从良性到恶性的发展过程，还由于多种相关基因和蛋白的调节失常，加速了肿瘤性病变的进展〔7〕。LGR5又名GPR49、HG38、FEX、GPR67，是由18个富含亮氨酸的重复单位和7个跨膜区域组成的大分子蛋白，其也是LGR的重要成员之一〔8〕。在WNT经典信号途径的研究中，LGR5作为WNT信号通路中B联蛋白TCF4的靶向基因，可以高效调控肿瘤细胞的增殖和分化过程〔9〕。有研究显示LGR5阳性的细胞具有分化成为所有的上皮系细胞的潜能，也证实了其为小肠和结肠干细胞的特异性分子标记蛋白〔10，11〕。CD44是一种广泛分布的跨膜糖蛋白，其亚型CD44v6含有变异型拼接外显子，即在细胞膜外靠近细胞区插入了43个由v6变异拼接型外显子所编码的不同序列氨基酸〔12，13〕。CD44v6作用机制可能是表达CD44v6的肿瘤细胞与远离的淋巴管和血管内相应配体结合，使转移该处的肿瘤细胞的稳定性增加〔14〕。E-cadherin作为机体调节黏附蛋白，广泛分布在胚胎组织和成熟组织的上皮细胞中，E-cadherin可以调节胚胎组织的发育、组织的构成，同时对调节细胞间的信息传递有积极作用〔15，16〕。肿瘤进展时，E-cadherin常表达减少或丢失，引起上皮细胞松动，易于发生转移。也有观点认为E-cadherin作为经典的黏附蛋白，是肿瘤细胞浸润转移的抑制剂〔17〕，如果致癌因素引起E-cadherin表达失调，则细胞间连接松动，为肿瘤细胞脱离原发灶创造了重要条件，此时转移潜能增加〔18〕。

本实验提示LGR5、CD44v6和E-cadherin异常表达是肿瘤恶变的重要因素。LGR5作为WNT信号通路中的靶基因，当其异常表达时，引起LGR5对WNT进行负性调控，可以直接引起上皮细胞的增生和分化〔19〕。由于黏液性癌是上皮源性的，也起自原始干细胞，因此LGR5干细胞标记特征也证实肿瘤细胞的分化尚不够成熟，分化程度低。本结果提示三种蛋白参与肿瘤的进展。由于脉管浸润、TNM分期及腹水中有无癌细胞是判断肿瘤生物学行为及预后的重要指标，因此LGR5、CD44v6和E-cadherin的联合检测可能在一定程度上预示着肿瘤的预后。腹水中有癌细胞提示肿瘤处于进展状态，其与肿瘤浸润和播散有密切关系。LGR5和E-cadherin、CD44v6和E-cadherin的表达均呈负相关性，提示三者具有协同作用，也提示LGR5和CD44v6高表达后，在一定程度上可以下调E-cadherin的表达，使肿瘤处于进展状态，尤其是使癌细胞易于脱落，诱发转移的发生。但是关于CD44v6的作用机制可能更趋多元性，有研究认为CD44v6可以促进肿瘤MMP-2和MMP-9的表达，使肿瘤转移的屏障消失〔20〕，此时在E-cadherin下调引起细胞松动后，使脱落的细胞易于离开原发灶，出现转移。

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