白细胞介素-6基因-634C/G多态性与冠心病的相关性及其对血脂的影响

程 辉 江 庆 黄彩凤 蔡 鑫

(安庆市第一人民医院心内科，安徽 安庆 246003)

白细胞介素-6(IL-6)作为重要的炎症因子，可直接或间接作用于冠心病(CHD)的发生与发展。据此IL-6基因也就成为多种CHD发病候选基因中的一种〔1〕。有研究发现，IL-6基因启动子区存在-634C/G多态性，这种基因多态性的存在很可能导致IL-6的基因转录和表达水平在个体间有差异，从而影响IL-6的生物学水平及其作用。本文旨在研究IL-6基因启动子区-634C/G多态性与CHD的关系及其对血脂的影响。

1 对象与方法

1.1研究对象 蚌埠医学院第一附属医院2009年5月至2010年6月心内科住院患者，CHD组120例，心肌梗死者63例，心绞痛者57例，其中男70例，女50例，年龄(61.45±10.52)岁，CHD经冠状动脉造影检查证实,以管腔直径狭窄≥50%为有意义的病变，心绞痛组与心肌梗死组年龄及性别无统计学差异(P>0.05)。健康对照组100例,男58例，女42例，年龄(58.69±12.45)岁，为年龄、性别与CHD组相匹配的同时间段在蚌埠医学院第一附属医院门诊体检的健康人群，均无CHD史。各组受检者均为无血缘关系的中国汉族人。校正了合并呼吸系统、内分泌系统、风湿性疾病及严重肝、肾功能不全患者的影响。

1.2研究方法

1.2.1基因组DNA的抽提 取外周静脉血2 ml，采用全血基因组DNA提取盒(大连宝生物工程有限公司)提取人白细胞基因组DNA。

1.2.2引物的合成与设计 参照文献〔2〕设计引物，由上海生工有限公司合成。 IL-6-634C/G引物序列为,上游引物： 5'-GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3'， 下游引物： 5'-AACCAAAGATGTTCTGAACTGA-3'。

1.2.3PCR扩增条件 IL-6的PCR扩增反应体系均为25 μl，其中含10×PCR缓冲液2.5 μl；2.5 mmol/L dNTPs 2.0 μl；20 μmol/L上、下游引物各1 μl；模板DNA 4.0 μl；Taq DNA聚合酶1.25 U；不足体积用灭菌双蒸水补足至25 μl。置PCR仪中94℃预变性5 min。按下列程序循环35次：94℃变性30 s，54℃退火45 s，72℃延伸45 s；末次循环后72℃延伸5 min。

1.2.4扩增产物的限制性酶切 取PCR扩增产物10 μl，用10 U限制性内切酶BsrBⅠ酶切IL-6基因-634位点，37℃孵育3 h，反应终止后在2%的琼脂糖凝胶上(含0.5%溴乙啶)电泳1 h，电压100 V。以DL2000 DNA片段长度标准物为参考，在紫外灯下判断结果，并拍照。

1.2.5血脂水平的测定 总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)均由蚌埠医学院第一附属医院检验科测定。

1.3统计学方法 采用SPSS11.0软件包进行χ2和t检验。

2 结 果

2.1IL-6基因-634位点多态性 PCR扩增产物片段大小为180 bp(图1),根据限制性内切酶BsrBⅠ酶切片段的情况，基因型有CC型(180 bp 1个条带)、CG型(180 bp、120 bp、60 bp 3个条带)和GG型(120 bp、60 bp 2个条带)3种(图2)。

2.2CHD组与健康对照组IL-6基因-634C/G多态性的分布与比较 两组中IL-6基因-634位点基因型在两组人群中的分布差异有显著性(χ2=6.16,P<0.05);等位基因频率在两组人群中的分布差异也有显著性，随等位基因G的增加，患CHD的风险显著增加(χ2=5.53,P<0.05)。见表1。

2.3心肌梗死组与心绞痛组IL-6基因-634C/G多态性的分布与比较 IL-6基因-634位点CG、GG、CC基因型在两组人群中的分布均无显著性差异(P>0.05)。见表1。

2.4健康对照组与CHD组血脂及CHD组IL-6各基因型间血脂水平的比较 CHD组TC〔(5.11±1.14)mmol/L〕和TG〔(1.72±0.90)mmol/L〕水平均显著高于健康对照组〔(4.09±1.09)、(1.26±0.55)mmol/L〕(P<0.05)，HDL〔(1.13±0.29)mmol/L〕水平明显低于健康对照组〔(1.33±0.33)mmol/L〕(P<0.05)；CHD组IL-6基因-634位点CG+GG基因型携带者的血清TC水平显著高于CC基因型〔(4.72±1.09)mmol/L〕(P<0.05)。TG〔(1.75±0.83)mmol/L〕、HDL〔(1.07±0.31)mmol/L〕水平与CC基因型〔(1.70±0.92)、(1.14±0.30)mmol/L〕比较无显著差异(P>0.05)。

1：DL-2000 Marker；2～4：PCR产物

1：CC基因型；2～3：CG基因型；4～5：GG基因型；6：DL-2000 Marker

表1CHD组与对照组IL-6基因多态性的分布〔n(%)〕

组别n基因型分布CC CG GG等位基因C GCHD组12067(55.8)47(39.2)6(5.0)181(75.4)59(24.6)健康对照组10070(70.0)29(29.0)1(1.0)169(84.5)31(15.5)χ2/P值6.16/P<0.055.53/P<0.025心绞痛组5733(57.9)22(38.6)2(3.5)88(77.2)26(22.8)心肌梗死组6334(54.0)25(39.7)4(6.3)93(73.8)33(26.2)χ2/P值0.60/P>0.050.37/P>0.05

3 讨 论

炎症因子基因表达水平的差异可能与人群对冠心病的易感性有关。在外周动脉疾病中存在IL-6基因多态性等多种危险因素共同影响〔3〕。IL-6系迄今发现的功能最为广泛的炎性细胞因子之一，是肝急性期反应蛋白-C-反应蛋白(CRP)产生的主要介质，在CHD发生发展过程中的作用可能比CRP更重要，参与了动脉粥样硬化的发生，在CHD炎症反应过程中起关键作用〔4，5〕。 IL-6的基因定位于人类7号染色体短臂2区1带，其中包含5个外显子和4个内含子。IL-6基因启动子上游区域634位点存在C→G碱基置换。

IL-6基因多态性影响CHD发病的可能机制尚不明确。其可能是相关疾病发生发展过程中的一个重要角色〔6〕。推测 IL-6基因启动子区的-634位点多态性有可能改变基因的结合序列，增强或减弱基因的表达调控与表达水平，从而影响个体CHD发生的易感性。本研究认为携带G基因型的个体可促进血清TC的高度表达而间接增加CHD的发病风险。

总之，本研究结果显示IL-6基因-634C/G多态性可能是CHD发病的遗传危险因素之一，其可能通过改变基因的结合序列，增强或减弱基因的表达调控与表达水平，从而增加个体CHD发生的易感性。携带G基因型的个体可促进血清TC的高度表达而间接增加CHD的发病风险。

4 参考文献

1Daley GQ,Cargill M.The heart SNPs a beat:polymorphisms in candidate genes for cardiovascular disease〔J〕.Trends Cardiovasc Med,2001；11(2):60-6.

2Kitamura A,Hasegawa G,Obayashi H,etal.Interleukin 6 polymorphism(634C/G)in the promotor region and the progression of diabetic nephropathy in type 2 diabetes〔J〕.Diabet Med,2002；19(12):1000-5.

3Tuygun AK,Keser M,Tuygun A,etal.Effects of endothelial nitric oxide synthase,interleukin-6 gene polymorphisms and asymmetric dimethylarginine levels on risk factors and lesion sites in peripheral artery disease〔J〕.J Int Med Res,2009；37(4):1003-10.

4Navarro-Lopez F.Genes and coronary heart disease〔J〕.Rev Esp Cardol,2002；55(4)：413-31.

5Carter AM.Inflammation,thrombosis and acute coronary syndromes〔J〕.Diab Vasc Dis Res,2005；2(3)：113-21.

6Rainero I,Rubino E,Cappa G,etal.Pro-inflammatory cytokine genes influence the clinical features of frontotemporal lobar degeneration〔J〕.Dement Geriatr Cogn Disord，2009；27(6):543-7.