TNF—α、SP—A在儿童不同程度肺炎中的表达和临床意义

周佳磊++徐冬新++李仪++陈志敏

[摘要] 目的 观察不同程度小儿肺炎时，血清致炎性因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、肺表面活性蛋白A（SP-A）表达含量的变化及其临床意义。方法 将195例肺炎儿童根据病情严重程度将其分为普通肺炎患儿及重症肺炎患儿，另外选择65例非肺炎患儿作为对照组，采用ELISA方法检测不同程度肺炎血清中的TNF-α和 SP-A 水平。 结果 TNF-α、SP-A在普通、重症肺炎患儿血清中表达水平显著升高，且重症肺炎组的TNF-α、SP-A表达水平显著高于普通肺炎组。结论 在小儿重症肺炎患儿发病过程中，血清中肿瘤坏死因子TNF-α和肺表面活性蛋白SP-A 的表达水平明显增多，可以反映肺损伤程度，可作为临床检测指标。

[关键词] 儿童肺炎；TNF-α；肺表面活性蛋白A（SP-A）；血清

[中图分类号] R725.6[文献标识码] B[文章编号] 1673-9701（2014）18-0145-03

TNFα， SP-A expression and clinical significance of varying degrees of pneumonia in children

ZHOU Jialei1 XU Dongxin1 LI Yi1 CHEN Zhimin2

1.Laboratory，Medicine of First People's Hospital in Xiaoshan District of Hangzhou City，Hangzhou 311200，China； 2.Respiratory Department of Children's Hospital of Zhejiang University，Hangzhou 310003，China

[Abstract] Objective To observe the expression levels change and it's clinical significance of TNF-α， SP-A in children with varying degrees of pneumonia. Methods A total 195 cases of pneumonia children patients were divided into ordinary pneumonia and severe pneumonia patients， another 65 cases of non-pneumonic children patients as the control group， ELISA assay was used to detect serum TNF-α and SP-A level. Results The levels of serum SP-A and TNF-α ofpneumonia children group were higher than the control group's， and severe pneumonia patients were higher than ordinary pneumonia. Conclusion The expression level of TNF-α and SP-A increased significant in the pathogenesis of children with severe pneumonia which could reflect the degree of lung injury and as a indicator in clinical testing.

[Key words] Child pneumonia； TNF-α； SP-A； Serum

小儿肺炎是儿童中最常见一种呼吸道疾病，居小儿常见疾病首位，四季均容易发生，3岁以下的婴幼儿常在春季和冬季患病；其临床表现多为咳嗽、发热、气促、呼吸困难或肺部啰音，如治疗不彻底，容易反复发作，引起不同类型的重症并发症，病情重者死亡率较高[1]。小儿肺炎的发生一方面与细菌、病毒的侵染有关，造成肺部损伤，另一方面与机体的过度防御反应有关，且一些细胞炎性因子如肿瘤坏死因子（TNF-α）会显著增加[2]。肺表面活性蛋白A（SP-A）对维持肺泡的结构及正常功能有着非常重要的作用，与多种肺部疾病密切相关[3]，且当疾病引起肺部损伤的时候，肺组织内的SP-A可进入血液循环。本研究通过检测不同程度肺炎患儿血清中TNF-α及SP-A表达水平，探讨其对诊治小儿肺炎的临床指导意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择我院自2011年3月～2012年4月收治的195例肺炎儿童患儿，普通肺炎和重症肺炎按照或参照“小儿四病防治方案和小儿肺炎防治方案”诊断标准定义，并排除既往有心肺疾病患儿；其中重症肺炎患儿组90例，男59例，女31例，年龄1～3岁，平均（2.85±0.71）岁，病程7～20 d，平均（9.62±4.34） d；普通肺炎患儿组105例，男85例，女20例，年龄1～5岁，平均（2.91±2.63）岁，病程3～15 d，平均（5.79±3.38） d；同期选择本院无肺炎的65例儿童作为对照组，其中男34例，女31例，年龄13个月～4岁，平均（3.02±1.65）岁。本研究经医院伦理委员会批准同意，所有患儿家长均自愿参加本研究，并签署知情同意书。三组患儿的性别构成、年龄分布、病程等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

在入院诊断后三组患儿在治疗前抽取静脉血4 mL，然后室温下放置1 h，之后以3000 r/min离心速率离心20 min，弃去沉淀取上清液，置于20℃冰箱保存以待检测TNF-α和SP-A的表达水平。TNF-α的测定根据酶联免疫吸附法原理，采用购自中国医学科学院的试剂盒测定；同样，采用ELISA法测定血清SP-A水平，该试剂盒购自美国 RD 公司。测定的原理是在酶标仪下检测450 nm波长下各孔的吸光度值（OD 值） ，根据吸光值的大小和相关曲线方程分析反应样品中TNF-α和SP-A浓度。endprint

1.3 统计学方法

采用SPSS15.0统计软件进行分析，计量资料以（x±s）表示，多组比较采用方差分析，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

TNFα、SP-A在普通、重症肺炎患儿血清中表达水平显著升高（普通肺炎组：tTNFα=4.81，tSP-A=3.20，P<0.05；重症肺炎组：tTNFα=9.52，tSP-A=5.63，P<0.01），且重症肺炎组的TNFα、SP-A表达水平显著高于普通肺炎组（tTNFα=4.68，tSP-A=3.26，P<0.05），见表1。

表1 不同程度肺炎血清TNF-α、SP-A检测（x±s，ng/L）

注：与对照组比较，a P<0.05，b P<0.01；重症肺炎组与普通肺炎组比较，c P<0.05

3 讨论

肺炎是小儿常发的肺部局部炎症，除了感染病原菌作用外，机体的细胞免疫反应性在肺炎发生中也发挥重要作用。目前已经了解到，重症肺炎的发生与病原体感染后过激的炎症反应相关，由肺部局部炎症发展成为全身性炎症。对于肺炎衣原体（Cpn）感染所致的急性呼吸道感染、肺炎及其相关性疾病研究表明，感染Cpn后机体多呈慢性经过，不仅诱发以Th1型细胞免疫反应为主的特异性免疫，同时体液免疫及有ToⅡ样受体参与的非特异性免疫也在病原菌的清除过程中发挥了重要的辅助作用。基于此，在本研究中选用常用的血清TNF-α和SP-A作为炎症免疫性反应的客观评价指标。

TNF-α是一种广泛存在于肺泡组织细胞中的肿瘤坏死因子[4]，可以杀死肿瘤坏死细胞，在肺炎发生时大量表达杀死被破坏的非正常细胞，可诱导其他炎症因子的释放，是免疫调解中的重要因子，由巨噬细胞和中性粒细胞产生。可介导多种炎症的生理反应，如局部免疫、器官损伤、系统损害，在炎性细胞因子中TNF-α是感染后机体最早产生的细胞因子之一，促进B细胞增殖、诱发多种细胞因子网络的产生，可以损伤毛细血管内皮细胞，增加肺部毛细血管的通透性，大量细胞内容物外泄发生炎症反应[5]。虽然TNF-α因子是机体清除病原体必需的，但是过度的释放会引起组织损伤[6]。在本院测定的65例重症肺炎和普通肺炎组小儿患者的TNF-α水平比非肺炎对照组显著增高，表明TNF-α可能参与了肺炎炎症反应的过程， 推测可能是由于TNF-α水平的显著升高通过一系列级联反应，最终导致患儿肺的损伤；且TNF-α含量多少可能反映了肺损伤程度，二者之间具有一定的相关性，因而可以作为临床检测指标之一。

SP-A是肺表面含量最多的一种糖蛋白[7]，最早在肺泡Ⅱ型上皮细胞中被发现，其表达量多、信号丰富，参与肺表面活性生物膜的形成和代谢。SP-A可以和二棕榈酰卵磷脂结合形成肺表面PS（一种脂蛋白复合物）成分[8]，PS可以减少肺泡萎缩等肺病，其中SP-A是PS最重要的成分，对稳定PS意义重大[9]。SP-A 在肺内表达量丰富，肺外及其他器官组织表达量低，具有调节肺局部免疫和炎症反应的作用[10]，其生物学特性和功能复杂。当儿童机体无肺炎病症时肺泡和周围的毛细血管可以阻止SP-A通过屏障进入血液循环，但是当机体肺部发生炎症肺部损伤时，SP-A通过肺泡和毛细血管屏障进入到血液循环，成为肺损伤的标志性血清学检验指标[11]。SP-A随着病情的加重不仅肺泡中的含量减少，血清中的含量也会逐渐减少，但是在一定损伤程度的范围内，肺部损伤程度与血清中SP-A 水平成正比，血清SP-A是反映肺功能障碍可靠的指标[12]。体外检测血清中SP-A水平，取样简单易行，减轻患儿的痛苦，结果具有明显特异性，有利于指导临床治疗[13]。

本文通过对重症、普通肺炎患儿以及非肺炎患儿的比较表明，TNF-α在重症、普通肺炎患儿血清中表达水平升高，提示当炎症反应异常活跃，致炎性细胞因子TNF-α过度释放是向重症肺炎发展的迹象[14]；TNF-α引发炎症反应使肺泡和周围毛细血管通透性增加，SP-A从肺泡渗漏到血液，血清内SP-A水平升高而肺泡内SP-A水平降低。在患儿不同程度的肺炎中，TNF-α和肺表面活性蛋白SP-A 表达水平不同，在普通肺炎患儿中两者的表达水平均在一定程度增高；在儿童重症肺炎血清中肿瘤坏死因子TNF-α和肺表面活性蛋白SP-A 的表达水平明显高于普通组和非肺炎患儿组。这与类似文献研究的结果是基本一致的，如李颖[3]等选取重症肺炎患儿20例、普通肺炎患儿25例以及择期手术的非肺炎患儿14例，分别于治疗前应用ELISA定量法检测各组患儿的血清SP-A水平，研究结果表明重症肺炎及普通肺炎组患儿血清SP-A水平均高于择期手术的非肺炎患儿的水平。进一步的相关性研究表明，重症肺炎组和普通肺炎组患儿血清SP-A水平与其动脉血氧分压（PaO2）呈显著负相关，进而认为血清SP-A水平能有效反映儿童肺炎后肺损伤的严重程度，有利于进一步指导临床治疗，对于儿童肺炎预后的判断亦具有一定临床意义。在本研究中，仅选取了血清TNF-α和SP-A作为炎症免疫性反应的客观评价指标，在肺炎的发生发展过程中可能有其他较多的细胞因子和免疫炎症介质也参与其中，如白细胞介素家族、α-干扰素（α-INF）以及CD4+T、CD8+T淋巴细胞亚群等，由于伦理学所限及其他因素的原因，本研究未纳入其他可能更具有意义的客观性评价指标，是本研究的不足之处。同时本研究未对肺炎患儿血清TNF-α与SP-A的相关性进行分析，二者之间是否具有相关性亦未可知，也是本研究的不足之处。

综上所述，可见肺炎患儿血清TNF-α与SP-A水平较高，且随着疾病严重程度的增加，二者水平亦随之增高，表明血清TNF-α与SP-A可能参与了患儿肺损伤的病理发生发展过程，在一定程度上反映了患儿肺损伤的程度，可作为临床诊断和预后评估的检测指标之一。

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（收稿日期：2013-12-17）endprint

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