丹参中丹参素钠的含量测定

周振旗，王宁莉，王丽霞

(1.铜川市食品药品检验检测中心，陕西 铜川 7270312.西安市阎良区630医院，陕西 西安 710089)

丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBunge.的干燥根及根茎,其性味苦、微温,具活血化瘀、安神宁心的功效。[1]现代研究表明丹参具有改善血液黏稠，扩张血管，改善微循环，抗心肌缺血等药理作用[2-3]，所以丹参药材和含有丹参的成方制剂是作为治疗心脑血管疾病的重要药物之一，应用十分广泛。丹参作为一味中药材，其质量会因生长或种植的环境、气候、规范管理及采收时间等的不同而参差不齐。为保证使用效果，提高丹参的药材质量， 2005年版和2010年版的《中国药典》中均对丹参药材中活性成份丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量作了具体的规定，但对丹参中丹参素钠的含量却没有质控要求,有研究表明丹参素钠对心肌、扩张冠状动脉、抑制血小板聚集及抗凝、抗动脉粥样硬化及降血脂、抗菌消炎及增强机体免疫、抗肿瘤等方面有明显的作用[2-3]。为更加全面的控制丹参药材的质量，本文参考有关文献资料[4-5]，对丹参素钠的含量测定方法进行了研究，为完善丹参药材的质量标准提供了部分科学依据。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津LC-20AT

检测器：SPD-20A

天平：AY—220型电子天平

丹参素钠对照品：中国食品药品检定研究院，批号：110855-200809

样品：陕西龙山药业,批号:1-001；亳州市中药饮片厂，批号：2-001；西安鸣鹿药业，批号：3-001；亳州市中药饮片厂,批号：4-001

其他：甲醇为色谱醇；水为屈臣氏蒸馏水

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱：Agilent TC-C18(2)(5 μm,4.6×250 mm) 588925-902；填充剂：十八烷基硅胶键合硅胶；柱温：40℃，检测波长：281 nm；流动相：甲醇-1%醋酸溶液(12∶88)；流速：1.0ml/min,理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 丹参素钠对照品(批号：110855-200809)，丹参素钠对照品先用五氧化二磷减压干燥48 h，精密称取适量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取丹参药材20 g，粉碎,过四号筛，在60 ℃减压干燥2 h，精密称取约3 g样品，置于250 mL锥形瓶中，精密加入甲醇100 ml，精密称定，超声处理1 h，放至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

对照品、供试品及空白实验的色谱图分别见 图1～图3。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 空白实验色谱图

2.3 线性关系的考察

分别精密吸取对照品溶液2 μl、4 μl 、6 μl、8 μl、10 μl、 12 μl、注入液相色谱仪测定，以浓度为纵坐标(Y)，峰面积为横坐标(X)，计算回归方程 ：Y=6.56×107-69.67X ,r=0.99999，结果表明：丹参素钠在1.8～11 μg范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验

精密量取丹参素钠对照品溶液10 μl，进样6次，测得峰面积平均值为60068，其相对标准偏差RSD值为0.211%,n=6。

2.5 稳定性试验

取同一样品的供试品溶液，分别在0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h进样，考察测定的结果在24 h内的稳定性，6次测定峰面积的RSD为1.299%。结果表明样品在24 h内具有良好的稳定性。

2.6 重复性试验

按2.2中供试品溶液的制备方法，对同一供试品平行处理6份，分别进行结果测定，测得丹参素钠平均含量为0.21 mg/g。 RSD为0.73% 。

2.7 加样回收率试验

取已知含量的供试品6份，每份各2 g，精密称定，每份均精密加入5 mL浓度为0.01 mg/mL的丹参素钠对照品溶液，按照2.2中供试品溶液制备的方法进行处理，测定并计算。结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.8 样品含量测定

取丹参待测样品四批，按照2.2中供试品溶液的制备方法进行制备，得到样品溶液。分别精密量取10μl的对照品溶液和样品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。结果见表2。

表2 不同厂家丹参中丹参素钠的含量

3 讨论

3.1 提取方法

实验分别采取了超声处理和加热回流提取两种方法，结果表明回流处理提取方法使得丹参素钠的成分有所减少，提取效果不佳，所以采用超声处理提取。

3.2 提取时间

实验设置了30 min、40 min、60 min、90 min的提取时间，结果表明超声60 min丹参素钠的含量最高。所以选择处理时间为60 min。

3.3 提取溶剂

实验使用了纯甲醇、甲醇和水的不同比例混合溶液为提取溶剂进行提取，实验数据表明纯甲醇作为提取溶剂效果最佳。

3.4 流动相

实验选择了不同比例的甲醇-1%醋酸溶液、乙腈-1%醋酸溶液为流动相，结果表明，以甲醇-1%醋酸溶液(12:88)为流动相时，丹参素钠分离效果较好、峰形佳、保留时间适中，因此，选用流动相为甲醇-1%醋酸溶液(12:88) 。

3.5 检测波长

根据色谱图丹参素钠对照品溶液在281 nm波长处有最大吸收，故检测波长为281 nm。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部[M].北京:中国医药科技出版社，2010：70-71.

[2]张名娟.丹参素的药理作用研究[J].北方药学,2012,9(3):106-107.

[3]孙锡铭,蔡海江.丹参素新药理作用[J].中草药，1991，22(1)：20-23.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版增补本[M].北京:中国医药 科技出版社，2009：103-104.

[5]罗兴平，张彩霞，王 峰，等.高效液相色谱法测定强力救心滴丸中丹参素钠的含量[J].中国药品标准,2002,3(4):60-62.