免疫组化染色的操作技巧和注意事项

王志生 李晓辉 任 飞 薛凤艳 张国静

免疫组化染色的操作技巧和注意事项

王志生 李晓辉 任 飞 薛凤艳 张国静

目的 本院对免疫组化染色过程中存在的问题及对策进行深入的探讨以及仔细的分析。方法 自从2010年6月~2011年7月期间, 本院共收治免疫组化染色标本患者有200例, 对其中存在问题的60例患者标本进行了仔细的分析, 并且要提出科学的应对措施。结果 本院对疫组化染色过程提出了主要的积极应对措施和科学的建议。结论 对于每一个步骤以及环节, 都会影响到染色的最终后果, 对此, 要尽量避免在染色过程中会出现一些问题, 会使免疫组化染色的质量有所提高。

免疫组化；技术方法；质量控制；抗原修复；原因分析

对于免疫组化(IHC)技术在上世纪的80年代之后, 在我国就迅速的开展, 至今已经有20年快速发展的历程, 现在已经逐渐的成为病理科工作中主要的组成要素。综合性操作技术主要是导致免疫组化, 这样会使其反应步骤增加, 出现复杂的影响因素, 技术员在基础技术上的操作要求是相对较高的, 对免疫组织学习要进行不断的提高, 了解这种技术在病理诊断方面是主要的辅助方式, 在对疾病诊断、分析、预后以及指导临床个体化治疗等方面, 都有着主要的作用。在免疫组化的技术方面, 也存在着各种实质性的问题, 收治免疫组化染色标本200例, 其中有60例标本存在着问题, 本院对其进行仔细的分析, 并且提出相应的科学对策治疗方式。

1 免疫组化染色不理想的原因分析及改进措施

1.1 由于大分子的化学结构相对稳定, 它在水中呈现胶状体, 不易被机体破坏或排除, 这样在体内存留时间就很长,有利于持续刺激淋巴细胞。抗体是人体抵抗感染的一种重要武器, 抗体是人或动物受抗原物质刺激后, 由浆细胞合成和分泌的一种特异性蛋白质, 并具有疏水性, 因此当对抗体进行稀释时可降低它的疏水性, 当pH接近抗体的等电点时,抗体的疏水性能十分巨大。

1.2 抗体与抗原的交叉反应 抗原是一类能诱导免疫系统发生免疫应答, 并能与免疫应答的产物发生特异性结合的物质；抗体是人或动物受抗原物质刺激后, 由浆细胞合成和分泌的一种特异性蛋白质。组织中其它蛋白质存在相同的抗原,就能与抗体直接产生反应, 会有其它反应, 临床由于多克隆抗体适应性强, 极容易有交叉反应单克隆抗体也能产生交叉反应, 所以对克隆抗体的应用必须谨慎, 使交叉反应降到最低。

1.3 抗原修复不足 对于固定的组织, 会导致抗原之间有相交的联系, 是抗原决定簇被封闭, 对此, 要尽早的对抗原进行有效的修复。应根据需要进行选择在修复时所用的方式,通常可以使用酶消化修复以及热修复等方式。在使用微波修复还是高压高温进行修复, 热修复都能达到有效的修复作为实验的科学依据。

1.4 组织固定不恰当 当试验的组织固定的位置是否正确时对试验结果有很大影响, 它的好与坏与抗原的保存有直接关系；当固定不及时会出现组织自行溶解或者干硬变形, 一旦出现自溶就会造成抗原丢失, 而干硬就是蛋白质变性的结果, 就会出现大量抗原性功能消失, 极易脱色即便染上也会是棕色的, 所以对体积的要求就更严格了。

2 IHC过程及注意事项

2.1 组织准备 对于IHC先决条件是进行良好的组织处理,组织固定要确保能够做到最好, 包括对保存细胞以及组织的形态的结构, 并且在最大限度方面, 能够保存其抗原的免疫活性值。这样, 在组织和固定反方面必须进行即时、必要处理。

2.2 蜡块选择与切片质量 对于脱水和包埋质量好的蜡块在选择上, 能够充分的保证蜡膜的完整、均匀程度。通常,切片的厚度要确保在3 μm之内, 对于出现过厚的切片会导致与载玻片的粘附性不牢固, 对于乳腺组织是人体中脂肪含量最多的部位之一, 在高温和高压的修复处理作用时, 容易产生脱片现象［1］。

2.3 抗原修复 在整个修复的过程中, 逐渐的减弱多聚赖氨酸分子和组织切片之间的有效结合力, 这样, 修复是免疫组化最常出现的脱片现象。对于适当将修复液是非常重要的,可以选择相对比较温和药物, 比如是枸橼酸修复液等。

2.4 染色中应注意的一些细节 把孵育盒放置在一个比较平稳的地方, 不要使抗体液流到组织的另一侧, 这会使结果呈现假阴性反应；另外抗体孵育盒里面要留有适量的蒸馏水,但水不宜过多, 防止因水蒸汽在盒盖聚成水滴, 掉落在切片上, 造成抗体稀释；再有就是保持切片在整个染色过程中,一定要保持湿润, 不要出现干片的现象。最后在加入抗体的时候, 要把组织上的水弄干, 避免抗体稀释影响检测结果。

3 结果

对于免疫组化染色过程, 提出了主要的应对措施以及科学合理的建议。

4 讨论

因为人体的抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,而免疫组织化学正是通过这种原理。它先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来, 以此作为抗原或半抗原, 并通过免疫动物后获得特异性的抗体, 在用抗体去检测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于免疫组化技术是一个貌似单一的技术, 但其中千变万化的环节却很难掌握。只有在关键的地方达到标准化, 才能取得较好好的检测结果。现在科技更新较快, 结合大量的临床先进经验要求医护人员熟练的掌握操作技能, 只有认真的规范和严格遵守各项标准, 才能让免疫组化技术在临床发挥更完善、更彻底、更好的为患者治疗。

［1］ 李德本, 王涛, 姜骏.免疫组化染色的操作技巧和注意事项.临床与实验病理学杂志, 2011, 27(11):1260-1261.

2014-04-01］

130012 长春, 吉林省肿瘤医院

李晓辉