p63蛋白和p73蛋白在滋养细胞疾病中的表达及其临床意义

陈燕

(长江大学荆州临床医学院 荆州市中心医院妇产科，湖北 荆州 434020)

滋养细胞疾病是一组来源于胎盘滋养细胞的疾病 ，其发病原因尚不完全清楚，除与染色体异常有关外，原癌基因也参与了疾病的进展。据报道突变型的p53在正常绒毛组织、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中的表达随恶性程度的增高阳性表达率增高，染色增强 ，且p53在侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中的表达差异具有显著性[1]。无转移和低度转移的滋养细胞肿瘤的治愈率几乎为100%[2]，耐药和复发是其治疗中面临的主要问题，目前还没有较好的判断其预后的指标。

人p63和p73基因作为p53家族的新成员分别于1998年和1997年被发现。p63和p73有2种异构体：全长表达的TA异构体和截短的ΔN异构体：TA异构体具有反式激活区，可与经典p53 DNA结合位点结合并激活p53相关靶基因诱导细胞周期停滞和凋亡,而被认为是抑癌基因。截短的ΔN异构体不具有转录激活活性，可以抑制全长表达的异构体和p53依赖的靶基因的转录，促进转化细胞的生长，被认为是致癌基因[3-4]。50%以上的肿瘤与p53突变失活有关[5]。p63和p73的羧基端均含有一个不育基序，可能在细胞的发育和分化中起重要作用[3]。有人推测，p53对生长发育的作用，很可能是通过与p63、p73的相互作用来实现的。不同于p53的是：p63和p73在组织中很少发生突变，p63和p73基因编码的产物，具有明显的组织特异性[3]，三者位于不同的染色体上。

1 对象与方法

1.1 对象

收集同济医院2000年至2007年间所有患滋养细胞肿瘤并行手术患者的病理标本共25例，以12例正常早孕期胎盘组织为对照，用免疫组化SP法，检测 p63和p73在GTD中的表达情况。

1.2 实验试剂

p63(4A4+63p02)单克隆鼠抗由Labvision公司提供，P73单克隆鼠抗由 ABCAM公司提供，SP试剂盒及DAB显色盒采购于中杉金桥公司，苏木素采购于 sigma公司。

1.3 判断标准

p63 和p73均为核表达，阳性染色为细胞核含黄色均匀颗粒。选染色均匀区，在400倍视野下计数着色细胞染色程度及阳性细胞占视野细胞总数的百分数，共计数5个视野，取平均值。

1.4 统计学分析

所有数据经SPSS12.0处理，各组间样本率差异的比较采用χ2检验、四格表精确概率法。p63、p73蛋白表达相关性采用Spearman等级相关分析,α= 0. 05，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 P63蛋白在细胞滋养疾病(GTD)表达情况

图1 正常胎盘组织可见细胞滋养细胞和合体滋养细胞p63表达中度阳性 图2 少数胎盘组织p63表达阴性 图3 在葡萄胎的细胞滋养细胞中可见p63表达高度阳性，而在其合体滋养细胞中均未见表达

本实验中p63蛋白在早孕胚胎组、完全性葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组、绒毛膜癌原发灶组、绒毛膜癌原转移灶组中的阳性表达率分别为66.7%、100.0%、100.0%、0.0%、100.0%(见表1)。

表1 p63、p73在滋养细胞疾病中的表达情况

在侵蚀性葡萄胎中，p63在细胞滋养细胞中表达中度阳性，在少数合体滋养细胞中呈弱阳性表达。p63在绒癌原发灶中无表达，在绒癌转移灶的合体滋养细胞中呈中度阳表达(见图4-6)。

图4 在侵蚀性葡萄胎中，p63在细胞滋养细胞中表达中度阳性，在少数合体滋养细胞中呈弱阳性表达 图5 p63在绒癌原发灶中无表达 图6 在转移性小肠绒癌中，可见较多合体滋养细胞p63表达中度阳性

2.2 p73蛋白在细胞滋养疾病(GTD)表达情况

本实验发现p73除在2例正常的胚胎组织和1例葡萄胎中表达阳性外，余组织均未见表达(见图7(a)～(d))，其在正常早孕胚胎组、完全性葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组、绒毛膜癌组中阳性表达率为16.7%、12.5%、0.0%、0.0%(见表1)。

图7 p73在正常胎盘组织、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中均无表达

3 讨论

3.1 p63蛋白在细胞滋养疾病(GTD)表达研究及临床意义

在转录后水平，截短的p63ΔN异构体常在能表达p63家族成员的ΔN异构体的组织中检测到 ，而全长表达的p63TA异构体往往瞬间表达并很快降解，提示ΔN异构体蛋白比TA异构体具有更高的稳定性[6]。本实验所用的p63、p73均为鼠单克隆通用性抗体，故推测本实验检测到的为ΔNp63异构体。

本实验发现p63在细胞滋养细胞中的阳性表达率随肿瘤恶性程度增高而降低，由于免疫组化的方法检测到的p63为具有致癌作用的ΔNp63异构体，不能解释其在GTD的细胞滋养细胞中随肿瘤组织恶性程度增高而降低的情况，提示p63 在滋养细胞疾病中的表达与细胞的分化密切相关，而可能并没有参与滋养细胞肿瘤的发生进展。

3.2 p73在GTD中的表达研究及临床意义

本实验发现p73在良性病变中低表达，而在恶性肿瘤表达阴性，提示滋养细胞疾病的发生发展可能与p73表达无关或与p73基因发生突变、灭活、功能受抑有关。

3.3 细胞滋养细胞和合体滋养细胞中的表达趋势明显不同

恶性滋养细胞由妊娠滋养细胞发生而来，它由合体滋养细胞(ST)、细胞滋养细胞(CT)和中间层滋养细胞(IT)三种类型组成，CT是绒毛上具有生发功能的滋养细胞，在绒毛表面，CT直接融合成ST,并失去增殖能力，ST渐凋亡，其细胞核被排到绒毛外间隙中 ，各种维持妊娠的激素(如HCG,SP-1，HPL)由ST产生[6]。早期绒毛与足月胎盘两种细胞比例不同，前者以细胞滋养细胞为主，后者以合体滋养细胞为主，正常绒毛在妊娠3月以后，滋养细胞仅剩合体滋养细胞，而在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中2种细胞均持续存在 ，恶性滋养细胞以合体滋养细胞为主者多见。北京协和医院1034例恶性滋养细胞肿瘤中仅3例以细胞滋养细胞为主，此类患者对化疗欠敏感，易有先天耐药细胞 ，以合体滋养细胞为主者血HCG高而对化疗敏感，但对化疗耐药者疗效极差[7]。Ramalho LN等的研究指出绒癌的p63均阴性；水肿性流产、葡萄胎的p63阳性细胞分布没有差异[8]。Shih IM等的研究指出根据免疫组化和RT-PCR，似乎细胞滋养层表达ΔNp63异构体[3]。

本实验提示p63在细胞滋养细胞和合体滋养细胞中的表达趋势明显不同。P63可能与合体滋养细胞恶变有关，原发于合体滋养细胞的滋养细胞肿瘤可能恶性程度更高。p63在细胞滋养细胞中的明显表达差异提示p63蛋白可能作为一种早期预测滋养细胞肿瘤预后进展的新指标。

3.4 p73与p63在GTD中表达的相关性分析

p63在人体组织中呈广泛而有选择性分布，在各种上皮组织的发育、分化和形态发生及胚胎形成过程中外胚层的发育具有重要的意义。p73在人体正常组织中低表达，在各种上皮组织呈高表达。P63和p73由于位于不同的染色体上，具有不同的启动子及转录途径，故其在GTD中的表达可无明显的相关性。

3.5 化疗实验结果的影响

本实验中获得的侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌均为化疗后手术标本，目前还没有关于化疗对GTD中p63和p73表达影响的研究，故本实验得出的结论不能排除化疗的影响。

[参考文献]

[1]康安静，孙润芹，黄莺，等.妊娠滋养细胞疾病p16与p53蛋白表达及意义[J]. 西安医科大学学报，2001，23(3)：233-235.

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[3]孙传海，韩壮，王敏. P53基因家族的新成员p73和p63[J].中国肿瘤，2001，10(7)：403-406.

[4]郑建明，朱明华，钱海龙.胰腺癌组织中p73和p63蛋白过表达的意义[J].临床与实验病理学杂志 ，2004，20(2)：247-249.

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[7]潘惠艳，杨秀玉，张浩，等.多药耐药基因在滋养细胞肿瘤组织中的表达及其临床意义[J].中国实用妇科与产科杂志，2001，17(7)：403-406.

[8]Ramalho LN,Maggiori MS,Ribeiro-Silva A,et al.P63 expression in hydropicabortion and gestational trophoblastic diseases[J].Placenta，2006 Jun-Jul，27(6-7)：740-743.