HPLC法测定柴芩清感颗粒中黄芩苷的含量

广东省妇幼保健院，广东 广州 510010

HPLC法测定柴芩清感颗粒中黄芩苷的含量

黄瑞红庄少雄

广东省妇幼保健院，广东 广州 510010

目的建立HPLC法测定柴芩清感颗粒中黄芩苷含量的方法。方法色谱柱为Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)；流动相为甲醇-0.2%磷酸(40∶60)；流速为1.0ml·min-1；检测波长为280nm；柱温为室温。结果黄芩苷线性范围为30.25～605.0μg·ml-1，平均回收率为100.92%，RSD为1.21%。结论该法操作简单，重现性好，结果准确，可作为柴芩清感颗粒中黄芩苷含量的测定方法提供参考依据。

柴芩清感颗粒；黄芩苷；HPLC

柴芩清感颗粒由柴胡、黄芩、桑叶、菊花、连翘、杏仁等组成，用于治疗风热型上呼吸道感染。黄芩苷是黄芩的主要有效成分，具有抗炎、抗病毒等作用[1]。为了有效控制柴芩清感颗粒的内在质量，保证疗效，实验选择黄芩苷为含量测定指标，建立柴芩清感颗粒中黄芩苷含量的HPLC测定方法。结果表明该方法操作简单，准确，重现性好。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：SPD-20A紫外检测器，LC-20AT泵(日本岛津公司)；Sartorious BT 25S电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ-100DE型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-6数显恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司)。

柴芩清感颗粒(广州蓝天医药科技有限公司，批号20100805，20100809，20100811)；黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110715-201117)；甲醇为色谱纯；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性 色谱柱：Agilent HC-C18(5μm，4.6×250mm)；流动相：甲醇-0.2%磷酸(40:60)；流速：1ml·min-1；检测波长：280nm；柱温：室温；进样量：10μl。黄芩苷峰与前后峰的分离度均在1.5以上，理论板数按黄芩苷峰计算应不低于3000。

2.2 溶液的制备 对照品溶液的制备：取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，精密称取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。结果见图1。

2.4 线性关系考察 精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.6050mg的对照品储备液，分别精密吸取对照品储备液适量，用甲醇配制成0.03025、0.0605、0.1210、0.3025mg/ml的对照品溶液，分别精密吸取上述4个对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定。以黄芩苷对照品的浓度(mg/ml)为横坐标，测得的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=107x-48965，R2=0.9998，表明该法测定黄芩苷在30.25～605.0μg·ml-1线性良好。

2.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液(60.5μg/ml)10μl连续进样6次，记录峰面积，计算黄芩苷峰面积的RSD( n=6)为0.6%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性考察 取同一个供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10h进样，按上述色谱条件测定，结果黄芩苷峰面积的RSD(n=6)为1.3%，表明供试品溶液在10小时内稳定。

2.7 重复性试验 取同一批样品(批号：20100805)，按供试品溶液制备方法平行制备6组供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果样品中黄芩苷的平均含量(n=6)为12.36mg/g，RSD为2.1%。

2.8 加样回收率试验 取已知黄芩苷含量的柴芩清感颗粒(批号：20100805，含量：12.36mg/g)约0.25g，分取6份，精密称定，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(3.09mg)，按“3.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果平均回收率(n=6)为100.92%，RSD为1.21%。见表1。

表1 加样回收率试验测定结果

2.9 样品测定 取柴芩清感颗粒，3批，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，柴芩清感颗粒的平均含量为12.378mg/g，见表2。

表2 黄芩苷含量测定结果(mg/g)

3 讨论

3.1 检测波长与流动相选择 参考2010年版中国药典一部黄芩项下的含量测定方法[2]，以及黄芩苷含量测定相关的标准、文献，本试验选择检测波长为280nm。流动相的选择参考文献[3、4]，对比了甲醇-0.2%醋酸、乙腈-0.2%磷酸、甲醇-0.2%磷酸等系统，结果选择甲醇-0.2%磷酸(40：60)，黄芩苷峰形对称且重现性好，分离度大于1.5。

3.2 样品提取时间的选择 由于药材中的成分，在工艺提取过程中已被提取出来，且该制剂为颗粒剂，其中的成分容易溶出，所以选择超声处理提取样品中的黄芩苷，方法简便快捷。试验中对比了20、30、40分钟三个超声时间对黄芩苷提取效果的影响，结果表明三个时间的提取效果无明显差异，故选择超声20分钟。

3.3 提取溶剂的选择 试验中对比了甲醇、70%乙醇、70%甲醇对黄芩苷提取效果的影响，结果表明，70%乙醇的提取效果更佳。

[1]李景松，张贵君，张智圆，等．黄芩药材中活性成分黄芩苷的研究概况[J]．世界中医药，2013，8(4)：469-471.

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：170.

[3]张宇洁，雷楠，李金娟．HPLC测定双黄连口服液中黄芩苷含量的实验条件优化[J]．光谱实验室，2012，29(4)：2277-2281.

[4]黄其春，涂文升．RP-HPLC法测定甘露扶正口服液中黄芩苷的含量[J]．中国药房，2011，22(3):253-254.

objective：To establish a method for determination of the contents of baicalin in Chaiqin Qinggan granules.MethodsThe chromatographic condition：Agilent HC-C18column(5μm，4.6×250mm),CH3OH-0.2%H3PO4(40-60) as mobile phase, the flow rate is 1.0 ml·min-1, the detection wavelength is 280 nm, the column temperature is room temperature.ResultsThe calibration curves showed good linearlty in the range of 30.25～605.0μg·ml-1,the average recoveries is 100.92%，RSD is 1.21%.ConclusionThis method is simple,with exact result and good repeatiton and can be used as the references for determination of the contents of baicalin of Chaiqin Qinggan granules.

Chaiqin Qinggan granules; baicalin; HPLC

R284.1

A

1007-8517(2014)03-0021-02

2013.11.29)