TNF-α在痉挛型脑瘫中的异常表达

李雪明，吴建贤

TNF-α在痉挛型脑瘫中的异常表达

李雪明，吴建贤

选取痉挛型脑瘫患儿及正常儿童共82例，其中小龄［1～3（1.9±0.6）岁］患儿和大龄［3～12（5.5±1.9）岁］患儿各27例（观察组），小龄［1～3（2.2±0.6）岁］和大龄［3～12（6.9±2.7）岁］正常儿童各14例（对照组）。采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α（TNF－α）水平。结果显示小龄及大龄痉挛型脑瘫儿童血清TNF－α水平均较相应年龄正常儿童升高（P＜0.01）;小龄痉挛型脑瘫儿童血清TNF－α水平较大龄痉挛型脑瘫儿童血清TNF－α水平升高（P＜0.01），而对照组内正常儿童的不同年龄段的血清TNF－α水平无明显差异;痉挛型脑性瘫痪患儿血清TNF－α水平较正常儿童增高（P＜0.01）;TNF－α在痉挛型脑性瘫痪患儿体内持续过度表达，参与脑性瘫痪的后续脑损伤。

脑性瘫痪;免疫因子;肿瘤坏死因子α

吴建贤，女，主任医师，副教授，硕士生导师，责任作者，E－mail:ay2fyjianxianwu@126.com

脑性瘫痪是自受孕开始至婴儿期非进行性脑损伤和发育缺陷所导致的综合征，主要表现为运动障碍及姿势异常［1］，是造成儿童残疾的重要原因之一。但近年来，有研究［2］提示脑瘫患儿体内存在免疫功能异常，并指出脑瘫患儿的脑损伤并非静止，其脑组织内的异常炎症反应可持续存在，并影响大脑功能重建。该研究通过观察不同年龄组痉挛型脑性瘫痪患儿及相应年龄组的正常儿童血清中肿瘤坏死因子 α （tumor necrosis factor－alpha，TNF－α）的含量，探讨痉挛型脑性瘫痪儿童脑组织内炎症因子是否持续表达。

1 材料与方法

1.1 病例资料

1.1.1 观察组纳入标准 诊断标准符合以下条件:2006年在长沙召开的我国第二届全国儿童康复、第九届中国小儿脑瘫康复学术会议讨论通过的脑性瘫痪的定义、分型及诊断条件;痉挛型脑性瘫痪;1岁＜年龄＜12岁;生命体征稳定;患儿家长均签署知情同意书。

1.1.2 观察组排除标准 凡合并有以下任何一项者，则不能成为本研究的对象:非脑瘫疾病引起的运动发育迟缓，如进行性肌萎缩症、脑脊髓炎、重症营养不良、重症肌无力、听觉/视觉、癫痫、严重的小儿科其他疾患;近2个月内有发烧病史;有其他内分泌、代谢性、自身免疫性及遗传性疾病。

1.1.3 对照组纳入标准 无脑瘫病史;发育及运动功能正常;无异常肌张力;近2个月内无发烧病史。

1.1.4 对照组排除标准 符合观察组的纳入标准患儿;有内分泌、自身免疫性、代谢性及遗传性疾病。

1.2 一般资料

1.2.1 观察组 选择2012年12月～2013年8月在安徽医科大学第二附属医院康复科及安徽医科大学附属省立儿童医院康复科住院治疗的54例痉挛型脑瘫患儿为观察组，其中1～3（1.9±0.6）岁脑瘫患儿27例，男17例，女10例，作为小龄观察组;3～12（5.5±1.9）岁脑瘫患儿27例，男15例，女12例，作为大龄观察组。

1.2.2 对照组 选择同时期体检正常儿童28例作为对照组，其中1～3（2.2±0.6）岁14例，男7例，女7例，为小龄对照组;3～12（6.9±2.7）岁14例，男8例，女6例，为大龄对照组。对各组受试者之间年龄、体重、身高及性别等临床资料进行统计分析，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，表1。

表1 观察组与对照组一般资料比较（±s）

表1 观察组与对照组一般资料比较（±s）

组别 n 性别男 女年龄（岁） 身高（cm） 体重（kg）大龄观察27 15 12 5.5±1.9 110.61±11.87 19.73±5.49大龄对照 14 8 6 6.9±2.7 119.83±17.05 24.31±8.61小龄观察 27 17 10 1.9±0.6 84.73±10.17 12.56±2.75小龄对照14 7 7 2.2±0.6 90.74±8.97 14.06±2.89

1.3 标本采集与检测 用肝素钠抗凝采血管采集观察组及对照组儿童静脉血3 ml，以3 000 r/min离心5 min。离心后取血清，按1次用量分装，于－30℃保存备测，避免反复冻融。使用ELISA法检测血清TNF－α浓度，试剂盒购自德国bender公司，操作由专人并严格按照说明书进行。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件分析，数据以±s表示，进行方差齐性检验，各组数据比较采用t检验。

2 结果

由表2显示:①大龄及小龄观察组血清TNF－α明显高于相应对照组（P＜0.01）;② 观察组内小龄脑瘫儿童血清TNF－α较大龄儿童血清TNF－α水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01），而正常儿童的不同年龄段的血清TNF－α水平无明显差异。③ 观察组全组即脑性瘫痪患儿血清TNF－α水平较对照组全组正常儿童增高，差异有统计学意义（P＜0.01）。

表2 观察组和对照组组间及组内TNF-α水平比较（ng/L，±s）

表2 观察组和对照组组间及组内TNF-α水平比较（ng/L，±s）

与观察组比较:＊＊P＜0.01;与大龄观察组比较:△P＜0.05;全组c表示观察组全组或者对照组全组

项目 n 观察组 对照组大龄组 54 17.83±5.18 11.03±4.94＊＊小龄组 28 24.99±4.91△ 11.39±3.36＊＊全组c 82 21.42±6.17 11.21±4.11＊＊

3 讨论

在初次脑损伤后脑瘫患儿体内可能存在一种异常的持续激活机制，导致少突胶质细胞成熟障碍、神经元及轴突再生受限、神经突触形成受损等病理变化，从而阻碍大脑功能重建［3］。研究［2，4］表明脑瘫患儿血清TNF－α水平高于健康儿童，但也有学者［5］指出新生儿脐血炎症因子中TNF－α对脑瘫发生的预测没有意义。本研究显示观察组全组血清TNF－α水平高于对照组全组，表示痉挛型脑瘫体内存在异常免疫。TNF－α增高可能与外周单核细胞分泌增多有关，而单核细胞在此前已被证实参与神经系统疾病如脑白质软化症及自闭症的病理变化［6－7］。但本试验中脑瘫患儿血清TNF－α水平偏低，因本研究在设计阶段考虑到TNF－α缺乏特异性，故在选择患儿时严格控制入选标准，如2个月内无畏寒发热、无癫痫等神经系统疾病及其他炎症性疾病，可能是导致本研究TNF－α检测水平偏低的原因之一。

研究［8－9］显示中枢神经系统损伤过程产生的TNF－α通过作用于血管内皮细胞而致血管通透性增加或者脑血管内皮细胞的凋亡。不仅如此，TNF－α过量表达引起血脑屏障功能紊乱以及脑水肿的研究也有报道［10］。有研究［11］显示 TNF－α 可抑制少突胶质细胞前体细胞的分化，从而产生脑白质损伤。围生期及产后出现的神经系统炎症可改变大脑的可塑性，但是新生儿时期的炎症反应是否在脑瘫体内长期存在仍未有定论。该研究显示观察组组内小龄观察组血清TNF－α水平高于大龄观察组，且两组TNF－α水平均高于相应对照组，支持脑性瘫痪患儿的免疫异常持续存在，也间接反映TNF－α对脑瘫儿童的脑损伤并没有在短时间内消失。故脑瘫儿童免疫异常的治疗可能是脑瘫的防治新方向。该研究中最大的脑瘫患儿为12岁，提示这种脑损伤至少持续12年。

该研究显示小龄痉挛型脑性瘫痪患儿血清TNF－α水平较大龄痉挛型脑瘫患儿TNF－α水平明显升高，表明随着年龄升高，血清中TNF－α水平逐渐降低。这种现象提示脑瘫儿童体内的免疫异常可能随着年龄的增长逐渐减弱，表明患儿的免疫治疗具有时限性，具体的治疗窗有待进一步研究。在临床过程中脑性瘫痪患儿的功能障碍会随着时间的延长而愈发严重，这提示愈早期的免疫治疗可能会对脑性瘫痪患儿的功能改善愈有益，并与临床中脑瘫儿童康复介入越早效果越好的原则一致。

该研究中仅对不同年龄组的痉挛型患儿血清TNF－α进行对比分析，如能对小龄痉挛型脑瘫患儿进行长期随访研究，则将更有利于了解脑瘫患儿体内TNF－α的动态变化，进一步明确脑瘫患儿体内的持续激活机制。另一方面，早期对脑瘫患儿运用相应药物进行免疫治疗是否对脑损伤有帮助仍需要深入的研究，为脑瘫的早期治疗及预防提供临床指导。

［1］陈秀洁.小儿脑性瘫痪的定义、分型和诊断条件［J］.中华物理医学与康复杂志，2007，29（5）:309.

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［3］Favrais G，Van De Looij Y，Fleiss B，et al.Systemic inflammation disrupts the developmental program of white matter［J］.Ann Neurol，2011，70（4）:550－65.

［4］袁记霞.高压氧治疗对脑性瘫痪儿童血清白细胞介素6和肿瘤坏死因子水平的影响［J］.中国中西医结合儿科学，2011，3（6）:536－7.

［5］Kaukola T，Kallankari H，Tuimala J，et al.Perinatal immunoproteins predict the risk of cerebral palsy in preterm children［J］.Ann Med，2013，45（1）:57－65.

［6］Jyonouchi H，Geng L，Streck D L，et al.Immunological characterization and transcription profiling of peripheral blood（PB）monocytes in children with autism spectrum disorders（ASD）and specific polysaccharide antibody deficiency（SPAD）:case study［J］.J Neuroinflammation，2012，9:4.

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［11］Falahati S，Breu M，Waickman A T，et al.Ischemia－induced neuroinflammation is associated with disrupted development of oligodendrocyte progenitors in a model of periventricular leukomalacia［J］.Dev Neurosci，2013，35（2－3）:182－96.

The dysregulated expression of TNF-α for spastic cerebral palsy

Lin Xueming，Wu Jianxian
（Dept of Rehabilitation，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei230601）

82 spastic cerebral palsy and normal children were selected，including 27 younger and 27 older spastic cerebral palsy（observation group），and 14 younger and older normal children（control group）.The tumor necrosis factor α（TNF－α）levels were measured in the serum with ELISA.The TNF－α levels in the serum of the younger and older spastic CP groups were higher than those of the control groups（P＜0.01）.In observation groups，the TNF－α levels of younger spastic cerebral palsy were higher than those of the older（P＜0.01）.On the contrary，the normal children in the control group of different ages had no difference of TNF－α.TNF－α expression was significantly higher in the serum of the spastic CP group than that in the control group（P＜0.01）.TNF－α expressed continuouslyin vivoof children with spastic cerebral palsy involve subsequent brain injury.

cerebral palsy;immune factor;tumor necrosis factor－alpha

R 742.3;R 392

A

1000－1492（2014）05－0692－03

2014－02－24接收

安徽省高校省级自然科学研究项目（编号:KJ2010A194）;

安徽省卫生厅中医药科学研究项目（编号:2012zy57）

安徽医科大学第二附属医院康复医学科，合肥 230601

李雪明，女，硕士研究生;