针刺对慢性应激抑郁大鼠血清和脑炎性细胞因子的影响*

金树英，户 丽，包伍叶，3，邵润慧，梁 佳，图 娅，卢 峻△

(1.北京中医药大学，北京 100029;2.河北唐山市丰润区中医医院，河北 唐山 064000;3.内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028007;4.中国中医科学院，北京 100700)

抑郁症已成为现代社会常见的情感障碍性疾病，给患者和社会带来极大危害。针刺治疗抑郁症有较好疗效并可以缓解抗抑郁药的副作用［1－2］，在临床上的应用日益受到关注。针刺治疗抑郁症的机制研究正逐渐深入［3］。近年来提出的抑郁症细胞因子假说［4］认为，慢性应激引起免疫激活、产生炎性细胞因子，可以导致抑郁症的发病。已有临床研究发现［5－6］，针刺显著降低抑郁症患者血清IL－1β、IL－6和TNF－α的水平。海马和额叶皮层是抑郁症的重要病变脑区，但针刺对其中的炎性细胞因子的影响尚不明确。本实验采用慢性应激抑郁大鼠模型，观察针刺对血清、海马、额叶皮层IL－1β、IL－6和TNF－α含量的影响，探讨针刺治疗抑郁症的可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物分组与处理

选用Sprague－Dawley(SD)雄性大鼠32只，体重(180±20)g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供。动物随机分为4组:正常组、模型组、针刺组和氟西汀组，每组8只。正常组:常规饲养。模型组:孤养，并制备慢性应激抑郁大鼠模型。针刺组:造模处理同模型组，并隔日1次在应激前针刺。氟西汀组:造模处理同模型组，每日在应激前给药。

1.2 主要试剂和仪器

IL－1β、IL－6、TNF－α ELISA 试剂盒(美国R＆D公司产品，进口分装);氟西汀(浙江丽晶化学有限公司，分析纯)。其它试剂为国产分析纯。环球牌针灸针(苏州环球针灸医疗器械有限公司);摇床;台式冷冻离心机;超声匀浆器等。

1.3 造模方法

［7］方法改进，采用孤养结合慢性应激方法造模。大鼠适应性饲养1周后，28天造模过程中每日随机接受一种不同的应激刺激，具体方法包括:夹尾2 min;束缚3 h;断食24 h;断水24 h;冷水游泳5 min(10℃);振荡30 min。

1.4 治疗方法

针刺方法:参考《实验针灸学》［8］，选取“百会”及“内关”穴。用30号0.5寸毫针治疗，斜刺“百会”，直刺单侧“内关”，进针后捻转，留针10 min。

给药方法:每日应激造模前用氟西汀(10 mg/kg)灌胃给药。

1.5 ELISA法检测血清及脑IL－1β、IL－6和TNF－α含量

断头处死大鼠，取血，静置后离心(4℃，3000 rpm，15 min)，取上清，－80℃保存。断头后迅速取出海马和额叶皮层，置于液氮中，然后移入－80℃冰箱保存。检测前进行脑组织匀浆。采用ELISA试剂盒检测IL－1β、IL－6、TNF－α 含量，严格按照试剂盒说明书操作。

1.6 统计方法

采用SPSS17.0软件进行统计分析，数据以均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析，以P＜0.05作为差异显著性标准。

2 结果

2.1 各组大鼠血清、海马、额叶皮层IL－1β含量的比较

表1 各组大鼠血清、海马、额叶皮层IL－1β含量的比较(±s，n=8，单位:pg/ml)

表1 各组大鼠血清、海马、额叶皮层IL－1β含量的比较(±s，n=8，单位:pg/ml)

注:与正常组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，##P ＜0.01。

30.17 ±3.57 23.95 ±2.38 26.04 ±4.93模型组 44.51 ±3.46＊＊ 45.00 ±4.87＊＊ 45.78 ±7.95＊＊针刺组 33.12 ±4.93## 27.32 ±4.04＊＊## 32.47 ±4.76*##氟西汀组 27.95 ±3.89## 22.93 ±4.22## 27.71 ±5.06组别 血清 海马 额叶皮层正常组##

由表1可见，造模后，模型组与正常组比较，血清IL－1β含量显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);针刺、氟西汀治疗后，血清IL－1β含量与模型组比较显著降低(P＜0.01)。模型组与正常组比较，海马IL－1β含量显著升高(P＜0.01);经针刺、氟西汀治疗，海马IL－1β含量显著降低(P＜0.01)。与正常组比较，模型组额叶皮层 IL－1β含量显著升高(P＜0.01);针刺、氟西汀治疗使额叶皮层IL－1β含量显著降低(P ＜0.01)。

2.2 各组大鼠血清、海马、额叶皮层IL－6含量的比较

表2 各组大鼠血清、海马、额叶皮层IL－6含量的比较(±s，n=8，单位:pg/ml)

表2 各组大鼠血清、海马、额叶皮层IL－6含量的比较(±s，n=8，单位:pg/ml)

注:与正常组比较，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，##P ＜0.01。

23.91 ±1.84 20.47 ±2.25 22.78 ±3.15模型组 46.59 ±8.10＊＊ 47.12 ±4.99＊＊ 53.36 ±7.92＊＊针刺组 33.04 ±4.12＊＊##29.92 ±6.54＊＊## 34.40 ±6.20＊＊##氟西汀组 22.77 ±1.61## 20.48 ±2.66## 25.27 ±3.11组别 血清 海马 额叶皮层正常组##

由表2可见，造模后，模型组与正常组比较，血清IL－6含量显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);针刺、氟西汀治疗后，血清IL－1β含量与模型组比较显著降低(P＜0.01)。模型组与正常组比较，海马IL－6含量显著升高(P＜0.01);经针刺、氟西汀治疗，海马IL－6含量显著降低(P＜0.01)。与正常组比较，模型组额叶皮层IL－6含量显著升高(P＜0.01);针刺、氟西汀治疗使额叶皮层IL－6含量显著降低(P ＜0.01)。

2.3 各组大鼠血清、海马、额叶皮层TNF－α含量的比较

表3 各组大鼠血清、海马、额叶皮层TNF－α含量的比较(±s，n=8，单位:pg/ml)

表3 各组大鼠血清、海马、额叶皮层TNF－α含量的比较(±s，n=8，单位:pg/ml)

注:与正常组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;与模型组比较，##P ＜0.01。

21.47 ±1.89 21.33 ±1.99 19.78 ±3.74模型组 38.00 ±5.66＊＊ 40.09 ±5.98＊＊ 35.79 ±5.06＊＊针刺组 25.26 ±4.82## 28.47 ±5.27＊＊## 25.82 ±4.36*##氟西汀组 20.07 ±2.05## 21.21 ±3.27## 20.18 ±2.70组别 血清 海马 额叶皮层正常组##

由表3可见，造模后，模型组与正常组比较，血清TNF－α含量显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01);针刺、氟西汀治疗后，血清TNF－α含量与模型组比较显著降低(P＜0.01)。模型组与正常组比较，海马TNF－α含量显著升高(P＜0.01);经针刺、氟西汀治疗，海马TNF－α含量显著降低(P＜0.01)。与正常组比较，模型组额叶皮层TNF－α含量显著升高(P＜0.01);针刺、氟西汀治疗使额叶皮层TNF－α含量显著降低(P ＜0.01)。

3 讨论

慢性应激是引发抑郁症的重要原因。研究发现［9－10］，慢性应激可引起免疫系统激活，单核 －巨噬细胞活动增加，炎性细胞因子(IL－1，IL－6，TNF－α等)释放增加。抑郁症患者血中可检测到 IL－1β、IL－6和 TNF－α水平增高［10］。目前认为，炎性细胞因子通过对神经递质、神经内分泌等方面的影响，引起抑郁症状。

已有研究表明，IL－1β、IL－6和TNF－α与抑郁症的某些行为改变有一定的相关性。将IL－1β注射到大鼠脑室，可以引起发热、精神运动迟滞、睡眠障碍、体重减轻、食欲减退、快感缺失、认知和记忆损害等病态行为，类似人的抑郁症状［11］。IL－6缺失小鼠在强迫游泳和悬尾实验中出现绝望减少和快感增加的行为，提示IL－6缺失小鼠能够拮抗应激引起的抑郁作用［12］。TNF－α基因敲除小鼠表现出空间学习记忆能力提高，而TNF－α过度表达的小鼠则出现空间学习和记忆功能损伤［13］。

本研究结果表明，慢性应激引起大鼠血清IL－1β、IL－6和TNF－α含量显著升高，针刺可以降低模型大鼠血清中上述炎性细胞因子水平。研究显示［14］，针刺可以显著降低慢性应激抑郁大鼠血清IL－6和TNF－α含量，与本实验结果一致。有研究观察到束缚应激模型大鼠血清TNF－α含量降低［15］，可能是应激方法和时程不同所造成的差异。

慢性应激损害与认知和情绪密切相关的边缘系统，特别重视的是海马。海马是抑郁症的主要病变脑区之一［16］。额叶皮层在情绪调节中起重要作用，抑郁症患者出现额叶皮层的损害［17］。笔者的结果表明，慢性应激引起大鼠海马和额叶皮层的IL－1β、IL－6和TNF－α含量显著升高;而针刺可以降低上述细胞因子在相关脑区的表达。这提示了针刺可以抑制脑内炎性细胞因子的产生，缓解炎症反应对大脑的损害，这可能是针刺发挥抗抑郁效应的途径之一。

抑郁症属于中医“郁症”范畴，治疗时应调气安神为主。本实验以百会为主穴。百会位于巅顶，是手足三阳经及督脉、足厥阴交会之处，头为“精明之府”。百会是临床上针灸治疗抑郁症的常用穴位［2，6］。现代医学研究表明，针刺百会可抑制抑郁大鼠亢进的下丘脑－垂体－肾上腺皮质轴［7］，促进海马脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体 TrkB的表达，改善脑损伤［18］。内关，是心经络穴，八脉交会穴之一，通阴维脉，《甲乙经》:“心澹澹而善惊恐，心悲，内关主之”。两穴合用，可调神醒脑、缓解抑郁。

本实验结果表明，针刺可以降低慢性应激抑郁大鼠血清、海马、额叶皮层炎性细胞因子IL－1β、IL－6和TNF－α的表达，缓解外周和中枢免疫炎症反应。这可能是针刺发挥抗抑郁效应的机制之一。

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