食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的高效液相色谱法

彭州市疾病预防控制中心 四川 彭州 611930

食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的高效液相色谱法

苏慧伍霞赖先志

彭州市疾病预防控制中心 四川 彭州 611930

目的：建立起食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的检测方法。方法不同种类的食品经前处理后，加入适量0.02mol/L氢氧化钠超声提取防腐剂、甜味剂，用10%乙酸铅，10%硫酸钠沉淀大分子物质，最后用0.02mol/L氢氧化钠溶液定容，取上清液，过0.22μm水系滤膜，进高效液相色谱分析。结果安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸在10.0mg/L-100.0mg/L范围内线性良好，相关系数在0.999以上，方法加标回收率均在95%-105%，相对标准偏差RSD值在1.56%-3.21%。结论该方法操作简单，干扰小，结果精密度良好，准确度可靠，适用于各类食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定。

高效液相色谱法；甜味剂；防腐剂；食品

苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸是我国常用的有机防腐剂，糖精钠、安赛蜜作为甜味剂也广泛的被应用于食品中，适当的使用防腐剂和甜味剂可以增加产品的保质期，提高产品的风味，但是过量的使用上述防腐剂和甜味剂会对人体产生毒副作用。国家对其使用量及使用范围有严格规定[1～ 2]。目前甜味剂和防腐剂的检测方法一般采用高效液相色谱法等[3～ 8]。从2010年起，我中心就接到上级单位食品风险监测的任务，每年都要开展不同种类食品中防腐剂、甜味剂的测定，通过几年的工作总结，本文对上述防腐剂、甜味剂的检测方法进行探讨。将不同种类的食品分别经前处理后，加入适量0.02mol/L氢氧化钠超声提取防腐剂、甜味剂，再用10%乙酸铅，10%硫酸钠沉淀大分子物质，最后用0.02mol/L氢氧化钠溶液定容，取上清液，过0.22μm水系滤膜，进高效液相色谱分析。建立起食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的检测方法。

1.材料与方法

1.1 主要仪器

大连依利特高效液相色谱1201 型(配有二元梯度泵、紫外检测器),色谱柱 SinoCHrom ODS-BP 4.6×200mm,超声波振荡器, 真空泵，抽滤器，pH计。

1.2 试剂

甲醇(J&K Scientific色谱纯), 0.02mol/L的乙酸铵(天津科密欧化学试剂有限公司 GR), 氢氧化钠(AR),标准物质：乙酰磺胺酸钾溶液标准物质(安赛蜜)GBW(E)100171、糖精钠溶液标准物质GBW(E)100008、山梨酸溶液标准GBW(E)082263、苯甲酸溶液标准GBW(E)082262、脱氢乙酸BW5010，上述标准品除脱氢乙酸含量为98.5%外，其余含量均为1000 mg/L。

1.3 方法

1.3.1 标准曲线 准确称取10.17g脱氢乙酸，溶于95%乙醇后用纯水定容至刻度，即为浓度1000 mg/L的脱氢乙酸标准溶液，分别吸取各种1000 mg/L的标准物质1.0mL、2.0mL 、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0 mL， 用纯水定容至100 mL ，配制成10.0 mg/L、20.0 mg/L、40.0 mg/L、60.0 mg/L、80.0 mg/L、100.0 mg/L混合标准液。

1.3.2 样品前处理

固体样品均质后备用；含乙醇、二氧化碳、二硫化碳的液体样品，取50 mL于烧杯中，60℃水浴至近干，再次定容至50mL，混匀，备用。

1.3.3 样品处理

称取2.5g经前处理后的样品，加入10 mL 0.02mol/L氢氧化钠溶液，超声波振荡10min，分多次，每次加入1.0 mL 10%乙酸铅，1.0 mL 10%硫酸钠，直至蛋白质及脂肪沉淀后，用0.02mol/L氢氧化钠溶液定容至刻度，静置，取上清液过0.22μm水相滤膜,收集滤液备用。

1.3.4 色谱条件 色谱柱: SinoCHrom ODS-BP柱(4.6×200mm), 流动相A为甲醇, B为乙酸铵溶液( 0.02mol/L)，流速1.0ml/min，进样量20μL，检测波长230nm，梯度洗脱，梯度洗脱设置见表1。

表1 梯度洗脱程序

1.4 定性、定量：根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

2.结果

2.1 样品的预处理

许多食品含蛋白质、淀粉、脂肪类的大分子物质，直接进样会堵塞色谱柱，且干扰峰很多，用滤头过滤也很困难。此前，也有很多文献报道过用HPLC法测量食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠等的前处理方法[3～ 8]，本文参考文献中的处理方法，又对其进行了改进，提出了用60℃水浴除去易挥发干扰物质，用10%乙酸铅， 10%硫酸钠沉淀大分子物质，再用0.02mol/L氢氧化钠溶液定容以保证样品的PH值恒定。该处理方法操作简单，试剂用量少，减少了待测物在提取过程中的损失。

2.2 流动相的选择

流动相选用了经济、低毒的甲醇-乙酸铵体系。经实验证明，如果仅测量安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸四种物质，使用5%甲醇+95%0.02mol/L乙酸铵的流动相比例等度洗脱，在23min内四种组分全部出峰，但是脱氢乙酸在45min内仍不出峰。因此需要使用梯度洗脱，再20min后增加甲醇的比例，使脱氢乙酸在30min内出峰。图1为5种组分使用梯度洗脱程序的谱图。

图1

3.结论

应用高效液相色谱法，采用甲醇-0.02mol/L乙酸铵梯度洗脱，可以同时测量食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸。经过改进样品前处理方法，使操作更简单，干扰更小，结果精密度良好，准确度可靠，适用于不同类型食品的测定。

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O657.7+2

B

1009-6019(2014)12-0018-02