花叶玉簪组织培养技术的研究

邱 靖，万 劲，汤庚国

(三江学院建筑学院，江苏 南京 210012)

花叶玉簪组织培养技术的研究

邱 靖，万 劲，汤庚国

(三江学院建筑学院，江苏 南京 210012)

以花叶玉簪‘France’,‘So Sweet’2个品种嫩芽为外植体进行的组织培养技术研究结果表明，以培养基MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA诱导不定芽萌发较为适宜；在培养基MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA上进行不定芽增殖，诱导效果最好,增殖系数分别达3.5和3.4，且植株生长健壮。最适宜的生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+1 g/L活性炭。

花叶玉簪；组织培养；外植体

花叶玉簪(HostaundulataBailey)为百合科玉簪属多年生草本花卉[1]，性强健，具有较强的耐寒喜荫特性，叶片色泽明亮，黄、白、绿三色相间，叶脉脉络明显，是非常优良的园林绿化品种[2]。通常花叶玉簪以分株繁殖为主，但很难大批量繁殖，且周期较长，因此，利用组织培养快繁手段极有必要。目前国内常有关于玉簪组织培养研究的报道，并筛选出了各种不同的培养基[3-5]。本文在前人研究基础之上，通过浓度梯度更为密集的培养基及其他种类激素(KT、2,4-D)设置，为建立更适合花叶玉簪的快速微繁殖体系和进一步相关的研究提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

取‘France’，‘So Sweet’ 2个花叶玉簪品种春季萌动的嫩芽作为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 试验程序 取外植体 → 1%洗衣粉的洗涤剂浸泡5 min去除表面杂质 → 用流水冲洗45 min → 置于超净工作台，用75%酒精表面消毒30 s → 再用0.1%升汞消毒6～8 min →用无菌水冲洗4～5次 → 剥去外包叶片，将嫩芽接入备用培养基 →置至于光照培养箱，14 d后将无污染外植体接种于诱导萌发培养基上 → 增殖培养 → 生根培养 → 移栽[6]。

1.2.2 芽诱导培养基筛选 采用 MS为基本培养基，将外植体接种于不同激素配比的培养基1～5上(见表1)，共5个处理，每处理20瓶，每瓶3个芽。20 d后统计结果。

1.2.3 增殖培养基筛选 将诱导出的芽转接到增殖培养基6～12上诱导增殖(见表1)，共6个处理，每处理20瓶，每瓶接3个芽。20 d后统计不定芽的增殖数及生长状况。

1.2.4 生根、移栽 取健壮增殖芽接种到生根培养基13～16上(见表1)。20 d后统计生根数等生长情况。筛选最适生根培养基。30 d后炼苗移栽，先在室温条件下锻炼3 d后打开瓶盖，6 d后栽植到经高压灭菌的营养土中，保湿。10 d后观察成活率及生长情况。

表1 培养基配方

培养基除13～16以1/2MS为基本培养基，外加活性炭1 g/L外，其他均以MS为基本培养基，蔗糖30 g/L,琼脂4 g/L,pH5.8。培养温度22～26 ℃,光照12～16 h，光照度1 000～2 000 lx。

2 结果与分析

2.1 不同激素配比对外植体诱导的影响

选取无污染外植体接种到诱导萌发培养基上，约8 d后嫩芽开始萌发，25 d后统计其出芽率(见表2)。由表2可知，不同培养基上芽萌发有一定差别，随着6-BA质量浓度升高，芽分化率变大，当其达到一定质量浓度时分化率又呈下降趋势，这与胡相伟[7]在法兰西玉簪组织培养技术研究中的结果相同。其中，‘France’在3号培养基上芽萌发率最高为86.7%，且生长茁壮。‘So Sweet’在2号培养基上出芽率最高为78.3%,但芽生长势弱于3号培养基，由此可知，3号培养基最适合花叶玉簪不定芽诱导。

表2 不同激素配比对外植体诱导的影响

2.2 不同激素配比对不定芽增殖的影响

30 d后，将新诱导的芽转接入增殖培养基中，7 d左右基部叶鞘有芽产生，14 d后开始展叶，由表3看出2个品种在12号培养基的增殖系数最高分别达3.9，3.7，但植株生长势较弱，11号培养基的增殖系数也较高，其中‘France’不定芽增殖系数达3.5，‘So Sweet’不定芽增殖系数达3.4，且植株均生长茁壮。因此，以11号培养基的增殖效果最好。除6-BA，NAA外，2,4-D、KT也具有刺激植物生长、促进细胞分裂的作用，但目前未见有用在玉簪组织培养中的报道。本实验在10，7号培养基中分别加入2,4-D、 KT，初步研究其对花叶玉簪不定芽增殖的影响。结果表明，加入NAA的11号培养基明显高于加入2,4-D的10号培养基。由此可知，在花叶玉簪的增殖培养中用生长素NAA优于用2,4-D。此外，7号培养基与8号相比多添加1 mg/L KT，但增殖系数并未增加反而降低，因此，KT对不定芽的增殖不但没有加强反而产生抑制作用。综上所述，11号是最适合不定芽增殖的培养基。

2.3 不同激素配比对生根的影响

取生长健壮的增殖芽将叶片中上部剪去接种到生根培养基13～16上，7 d后即开始形成根，20 d形成大量根，30 d后即可移栽至经过高温灭菌的珍珠岩中，成活率达100%。由表4可以看出2个品种最适合生根的培养基为14，其生根率均为100%且生根数量最多，平均每株分别形成6.9和6.5条，且根粗壮、色白，适合移栽。在16号培养基上虽然生根率也相对较高，但部分根生长粗短，不适合移栽。

表3 不同激素配比对不定芽增殖的影响

表4 不同激素配比对生根的影响

2.4 组织培养苗驯化移栽

将无菌苗瓶移至大棚进行驯化炼苗，视温度、光强不同将炼苗时间控制在3～7 d。高温、高光强炼苗时间缩短，低温、低光强则炼苗时间延长。移栽在春季阴天或晴天的上午7∶00～9∶00 以及下午的 3∶00～5∶00进行。移栽前洗净无菌苗上的培养基，将其移栽于80%泥碳土+20%珍珠岩的基质中，移栽后浇透水，覆盖薄膜保温并遮阴80%。7 d后每天通风 7～8 h，并浇水，待新叶长出后去掉薄膜，但仍需遮阴。30 d后成活率95%以上。60 d后叶片明显变宽，幼苗地上及地下部分均生长健壮，移栽效果好。

3 讨论

玉簪花色淡雅，叶色明亮，深受人们喜爱。花叶玉簪独特叶色，近年来成为园林上广泛应用的新宠。本文以春季萌动的嫩芽为外植体，诱导不定芽萌发，建立了花叶玉簪离体快繁体系。研究发现，花叶玉簪嫩芽在培养基MS+ 2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA上最适合不定芽诱导。在MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培养基上能快速增殖形成较健壮的不定芽，郝砚英等[5]报道玉簪最佳的生根培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA+0.2%活性炭。本研究发现1/2 MS+ 0.5 mg/L NAA+1 g/L活性炭的培养基是花叶玉簪最佳的生根培养基，这可能是由于不同基因型间存在差异导致。目前，以花叶玉簪的子房等器官为外植体，试图建立离体再生体系的研究，尚未见报道，后续将进一步进行这方面的研究工作。

[1] 王莲英，秦魁杰，吴迪新.花卉学[M].北京：中国林业出版社，1988：427-28.

[2] 张金政，施爱萍，孙国锋，等.玉簪属植物研究发展[J].园艺学报，2004，31(4)：550-552.

[3] 张仁贵，张思露.花叶玉簪的组培技术的研究[J].安徽农业科学，2014，42(5)：1302-1303.

[4] 庄静冰，方福钟.花叶玉簪的组培快繁技术研究[J].福建热作科技，2013,38(3)：18-21.

[5] 郝砚英，赵哀梅，王 勇，等.花叶玉簪的组织培养与快速繁殖技术研究[J].天津农业科学，2006,12(2)：18-19.

[6] 李 江，马正炳，孙仲序，等.植物组织培养的简化[J].植物生理学通讯, 2003,39(4):356-358.

[7] 胡相伟.法兰西玉簪组培技术[J].甘肃科技，2013,29(4)：146-148.

StudiesonthetissuecultureofHostaundulata

QIU Jing，WAN Jin，TANG Geng-guo

(School of Architecture of Sanjiang University， Nanjing 210012，China )

After approaching on the tissue culture of tender bud explant fromHostaundulata‘France' and So Sweet', we concluded that the optimum medium for adventitious bud induction was regarded as MS+2.0 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA, and the optimum medium for adventitious buds propagation was alleged as MS+3.0 mg/L 6-BA +1 mg/L NAA, with multiplication coefficients of 3.5 and 3.4.And also, the optimum medium for rooting was considered as 1/2MS+0.5 mg/L+1 g/L activated carbon.

Hostaundulata; Tissue culture; Explant

1001-7380(2014)04-0043-03

2014-04-20；

2014-05-20

江苏省农业三新工程项目“花叶玉簪规模化组培快繁技术示范推广”(SXGC[2013]375)

邱 靖(1982-)，女，江苏盱眙人，讲师，硕士，研究方向：园林植物与观赏园艺。

Q939.71+8.23；Q813.7

B

10.3969/j.issn.1001-7380.2014.04.011