手足口病患儿T淋巴细胞亚群和相关细胞因子水平变化的临床意义分析

唐汉庆，卢 兰，黄月艳，李清锋，李晓华

(1. 广西壮族自治区右江民族医学院，广西 百色，533000;2. 广东省惠州市第四人民医院，广东 惠州，516055)

手足口病(HFMD)是儿科常见传染病，主要由肠道病毒引起，具有传播快、传染性强的特点，部分患儿可发展为重型或危重型，其发病机制尚未完全阐明，一般认为T细胞的激活及其释放的细胞因子引起的细胞免疫和介导的炎性反应或体液免疫有密切的联系[1-2]。T 淋巴细胞对炎性反应起着重要的调控作用[3-4]，本研究通过检测HFMD患儿外周血T 淋巴细胞亚群和相关细胞因子水平变化，探讨其对临床的指导意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年4月—2014年5月在本院收治的HFMD患儿56例作为病例组，其中男34例，女22例；普通病例48例，重症病例8例；年龄8个月～6岁，平均(1.85±0.36)年。另外选取同期经过健康体检中心体检的健康幼儿48例作为对照组，其中男28例，女20例，年龄6个月～7岁，平均(2.08±0.66)年。2组在年龄、性别方面无显著差异(P>0.05)。

1.2 入选及排除标准

依据卫生部颁发的《医疗机构手足口病诊疗技术指南》(2008年版)[5]诊断标准，病例分型标准如下：普通病例：以发热、手、足、口、臀部出现斑丘疹、疱疹为主要表现；重症病例: ① 重型：出现神经系统受累表现：包括精神差、嗜睡、易惊、谵妄；头痛、呕吐；肢体抖动、肌阵挛、眼球震颤、共济失调、眼球运动障碍；无力或急性迟缓性麻痹；惊厥。体征可见脑膜刺激征，腱反射减弱或消失; ② 危重型：出现下列情况之一者：频繁抽搐、昏迷、脑疝；呼吸困难、紫疳、血性泡沫痰、肺部罗音等；休克等循环功能不全表现。排除其他肠道病毒性疾病或近1个月有呼吸道等感染病史。本研究和所有患儿家属均签署知情同意书。

1.3 指标检测

1.3.1 T淋巴细胞亚群检测:病例组入院后第1天清晨空腹抽取静脉血2 mL，置于EDTA抗凝管。管中依次加入3种抗体各10 μL，室温避光孵育25 min，每管加入200 μL溶血素，轻轻吹打，在室温下避光静置 15 min，裂解红细胞；观察溶液澄清透明后，加入预冷PBS液1 mL，室温下分离血清(3 000 r/min分离10 min)，去上清，加入1 mL PBS 液摇匀，滴加1%多聚甲醛液100 μL固定，用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群。CD4+Ftc、CD8+pe 、CD3+Percp 三色抗体(BD公司，USA); 流式细胞仪(Coulter Epics Eliteesp型，美国Beckman-Coulter公司)。

1.3.2 细胞因子IL-17、IL-22、IL-23 和TNF-α检测:无菌非抗凝管采集新鲜外周血2 mL，室温静置0.5 h后3 000 r/min离心10 min吸取血清，每管50 μL分装于EP管中，置-80 ℃冰箱保存待检。ELISA法检测IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平，IL-17、IL-22、IL-23和TNF-试剂盒(北京生物科技有限公司)，严格按照试剂盒操作说明进行。

2 结 果

2.1 T淋巴细胞亚群检测结果

与对照组比较，病例组T淋巴细胞总数显著降低(P<0.01)，CD4+百分比显著降低(P<0.01)，CD8+百分比显著降低(P<0.01)，CD4+/CD8+比值下降(P<0.05)。见表1。

表1 T淋巴细胞亚群检测结果比较 %

2.2 细胞因子IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α检测结果

与对照组比较，病例组IL-17、IL-22、IL-23 和水平TNF-α水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。见表2。

表2 IL-17、IL-22、IL-23 和TNF-α检测结果比较

3 讨 论

HFMD是儿科常见的肠道传染性疾病，主要致病原是肠道病毒 71 型[6]、柯萨奇病毒A组，好发于3岁以下儿童，临床以手、足、口、臀部出现斑丘疹、疱疹为主要体征，重症病例累及神经系统，需要及时处理。HFMD的发病机制与机体的细胞免疫、炎症反应和体液免疫有紧密的联系。

研究[7-8]已经表明T淋巴细胞在免疫过程中扮演重要的角色，对免疫过程起着重要的调控作用。T淋巴细胞根据表型的不同分为CD4+细胞和CD8+细胞亚群，正常情况下，这两个亚群在数量和功能上保持稳定、相互协调，维持机体正常的免疫应答[9]。其中，CD4+细胞为免疫辅助性细胞，作用是促进体液免疫和细胞免疫；而CD8+为细胞毒性细胞或抑制性细胞，抑制免疫反应，CD4+细胞和CD8+细胞两者协调，调节机体的免疫反应，CD4+细胞数量、CD8+细胞数量以及CD4+/CD8+比值维持稳定或处于平衡状态是机体免疫功能得以发挥的重要前提条件，因此，检测T淋巴细胞亚群对免疫性疾病的发生发展和预后有重要的临床意义[10]。本研究中，和对照组相比，病例组T淋巴细胞总数、CD4+细胞数量、CD8+细胞数量以及CD4+/CD8+比值均下降，提示HFMD患儿患病后出现免疫功能紊乱，抗病毒感染能力严重不足，免疫清除致病原的能力减弱。因此，在使用抗病毒药物如干扰素等的同时，还要关注如何使用有益于调节机体免疫功能的方法或药物。中西医结合综合治疗有可能缩短治疗周期并预防出现危重症[11]。例如，部分“扶正固本”中药具有免疫功能双向调节作用，可以考虑使用。

HFMD患儿感染病毒后，机体发生免疫应答，伴有炎症反应，使与之相关的细胞因子水平发生变化，从有关细胞因子的变化可以推测炎症对组织的损害和病变的严重程度。研究表明IL-17与受体结合后诱导成纤维细胞、上皮及内皮细胞分泌IL-22、IL-23等细胞因子，引起局部炎症和皮肤斑丘疹损害[12-13]，其中IL-23通过TNF-α和IL-22能诱导表皮增生、炎性渗出等维持皮肤斑丘疹或疱疹形态[14]，TNF-α还可以直接启动炎性反应过程[15]，IL-17、 IL-22、IL-23和TNF-α等细胞因子相互作用，是HFMD炎症反应的病理环节。在本研究中，和对照组相比，病例组IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平均升高，表明HFMD患儿存在炎症反应，针对HFMD的治疗需要考虑抗感染治疗，因此，完善的HFMD治疗方案既包括抗病毒治疗也要考虑相关细胞因子正常水平的恢复问题，综合考虑后制定全面的治疗方案。

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