HPV16-E6蛋白在梅州地区客家人食管鳞癌组织及非癌组织中的表达

周臻涛 王悦冬

HPV16-E6蛋白在梅州地区客家人食管鳞癌组织及非癌组织中的表达

周臻涛 王悦冬

目的 通过分析HPV16-E6蛋白在食管正常组织、不典型性增生组织和癌组织中的表达，探讨HPV16-E6蛋白在梅州地区客家人食管鳞癌组发生、发展中的生物学意义。方法 应用免疫组织化学方法检测对68例食管正常黏膜组织、20例上皮不典型增生组织及68例癌组织中HPV16-E6蛋白的表达情况进行研究。结果 HPV16-E6蛋白阳性率在正常食管黏膜组织中为14.7%，在上皮不典型性增生组织中为45.0%，在癌组织中为70.6%，各组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV16-E6蛋白与梅州地区客家人食管鳞癌的发生、发展关系密切。

食管肿瘤；人乳头状瘤病毒；E6蛋白；免疫组化

人乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一种属于乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒，能引起人体皮肤、黏膜的鳞状上皮增殖。目前已分离出的HPV有130多种，根据其是否致癌分为高危型和低危型，其中HPV16属于高危型，研究表明其与食管鳞癌的发生关系密切[1]。梅州地区为客家人聚集区，该地区食管癌高发。本研究应用免疫组化的方法检测梅州地区客家人正常食管组织、不典型性增生食管组织及食管癌组织内HPV16-E6蛋白表达，以探讨HPV16-E6蛋白在该地区食管鳞癌发生、发展中的生物学意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集梅州市人民医院2008年1月～2011年6月间行根治性切除，且临床病理资料完整的食管鳞病例标本及相应的距肿瘤5 cm以上经病理证实为正常食管黏膜组织68例。所有患者术前均未行放疗、化疗，其中男性50例，女性18例；年龄40～62岁，中位年龄50岁；另外选取同期经胃镜活检病理证实为食管鳞状上皮不典型性增生标本20例，其中男性15例，女性5 例；年龄30～65岁，中位年龄40岁。上述所有患者均为长期(≥20年)居住在梅州地区的客家人。HPV16-E6单抗为美国Santa Cruz公司产品，购自北京中山生物公司，即用型免疫组化chemMate TM EnVision二抗试剂盒购自DaKo公司。

1.2 方法 免疫组织化学检查采用EnVision两步法，实验步骤按试剂盒说明书进行，最后DAB显色。以试剂公司提供的阳性对照片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断 HPV16-E6蛋白主要位于细胞核内，呈棕黄色或棕褐色反应，伴少许胞浆着色。在普通光学显微镜下阅片，在高倍镜下(400×)随机观察5～10个视野，观察细胞核的染色深浅和计算胞核阳性的细胞所占的百分比。染色结果判定标准参照Fromowitz等[2]阳性细胞半定量分级法，在高倍镜下对细胞染色作如下评分：根据阳性细胞占整个肿瘤细胞的百分数打分：<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。根据阳性细胞染色深浅打分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；两项结果相加<2分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性(++)，6～7分为强阳性(+++)，其中(-)视为低表达阴性，(+、++、+++)视为阳性。以上结果均由2位有经验的病理科医师采用双盲法观察并确定。

1.4 统计学方法 统计分析采用SPSS13.0统计学软件进行χ2检验,以P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV16 E6在各组织中的表达 HPV16-E6蛋白着色部位主要在细胞核， 呈棕黄色或棕褐色反应，伴少许胞浆着色。在正常食管黏膜组织、上皮不典型增生组织和癌组织中HPV16-E6蛋白表达阳性率分别为14.7%、45.0%、70.6%。正常黏膜组与上皮不典型增生组及正常黏膜组与鳞癌组比较HPV16-E6蛋白表达阳性率差异均有统计学意义(均P<0.05)；上皮不典型增生组与鳞癌组比较HPV16-E6蛋白表达阳性率差异均有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 3种组织中HPV16-E6蛋白的表达情况[n(%)]

3 讨论

食管癌是常见的消化道肿瘤，全世界每年约有30万人死于食管癌,我国是世界上食管癌高发地区之一，其中尤以我国北部(太行山区)发病率最高，梅州地区亦为食管癌高发区。食管癌的发生、发展是多因素协同、多阶段综合作用的结果，其病理学形态常经过鳞状上皮的单纯增生、不典型增生、原位癌、早期浸润癌至浸润癌阶段[3]。

HPV能引起人体皮肤、黏膜的鳞状上皮增殖，目前已分离出的HPV有130多种，根据其是否致癌分为高危型和低危型，其中HPV16属于高危型，研究表明HPV16与多种肿瘤的发生、发展密切相关[4,5]。在HPV16双股DNA的8个读码框架结构中，E6基因为转化有关的早期基因，在DNA复制前早期编码E6蛋白，是一种病毒癌蛋白，可以刺激易感细胞增生，并在肿瘤形成的早期阶段起重要作用。欧洲学者研究表明高危型HPV感染与食管癌的发生发展密切相关，40%～60%的食管鳞癌标本HPV监测为阳性[6]。国内学者王悦冬[7]采用PCR/导流杂交法检测56例新鲜客家人食管癌组织、癌旁组织及正常食管黏膜组织HPV的表达，结果提示梅州地区客家人食管癌组织中存在HPV感染。本研究应用免疫组化的方法检测梅州地区客家人正常食管组织、不典型性增生食管组织及食管癌组织内HPV16-E6蛋白表达，结果显示在正常食管黏膜组织、上皮不典型增生组织和癌组织中HPV16-E6蛋白表达阳性率分别14.7%、45.0%、70.6%，各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。从研究结果可也看出，随着食管病变的进展，HPV16- E6蛋白表达的阳性率也随着升高，这提示HVP16-E6蛋白在梅州地区客家人食管鳞癌的发生、发展密切相关，但其具体作用机制尚有待进一步研究。

[1] 刘节,苏勤,张伟.人乳头瘤病毒HPV-E6及p53蛋白与食管鳞癌关系.世界华人消化杂志,2000,8(5):494-496.

[2] Fromowitz F B, Viola M V, Chao S, et al. Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol,1987, 18(12):1268- 1275.

[3] 许春雷,千新来,周小山,等.HPV16型-E6、E7 在食管鳞癌组织与非癌组织中的表达.癌症,2004,23(2):165-168.

[4] 任占平,石喆,杜鹃,等.乳腺癌组织中HPV16 18E6 及p53 MCM7 蛋白的表达及意义.中国肿瘤临床,2008,35(6):327-330.

[5] McDougall J K. Immortalization and transformation of human cells by human papillomavirus//Human Pathogenic Papillomaviruses. Springer Berlin Heidelberg, 1994: 101-119.

[6] 陆哲明.HPV与食管癌关系研究概况.国外医学：肿瘤分册,2000,27(4):241-245.

[7] 王悦冬,张开鄂,周臻涛,等.梅州市客家人食管与人乳头状瘤病毒感染的关系.肿瘤基础与临床,2010,23(5):377-378.

Expression of HPV16-E6 in squamous cell carcinoma tissues of esophageal cancer and non-cancer tissues

ZHOUZhen-tao，WANGYue-dong.

DepartmentofOncology，MeizhouPeople’sHospital,Meizhou514031，China

Objective To explore the biological significance of HPV16-E6 in the esophageal squamous cell carcinogenesis of Meizhou Hakka People through determining the expression of HPV16-E6 protein in normal tissues, dysplasia tissues and carcinoma tissues of esophagus. Methods Immunohistochemistry technique was used to detect the expression of the HPV16-E6 protein in 68 cases of normal tissues, 20 cases of dysplasia tissues and 68 cases of carcinoma tissues of esophagus. Results The positive rates of HPV16-E6 protein in the tissues of normal mucosa,dysplasia and carcinoma of esophagus patients were 14.7%, 45.0% and 70.6% respectively. There was significantly difference among the three groups respectively(P<0.05). Conclusion HPV16-E6 protein are highly associated with esophageal squamous cell carcinogenesis of Meizhou Hakka People.

Esophageal neoplasm；Human Papillomavirus(HPV)；E6 protein；Immunohistochemistry

514031梅州市人民医院肿瘤外一科