PTEN、Survivin蛋白在子宫内膜异位症相关的卵巢癌组织中表达的相关性及临床意义

蒋 苹 许 红 王中弥 于 璐 孙 洁 曹良杰 周亚丽 栗 琼

PTEN、Survivin蛋白在子宫内膜异位症相关的卵巢癌组织中表达的相关性及临床意义

蒋 苹 许 红 王中弥 于 璐 孙 洁 曹良杰 周亚丽 栗 琼

目的 探讨卵巢子宫内膜异位囊肿、子宫内膜异位症相关的卵巢癌(卵巢子宫内膜样癌和卵巢透明细胞癌)中抑癌基因PTEN蛋白和凋亡抑制基因Survivin蛋白表达及意义。方法 利用免疫组织化学二步抗法检测卵巢子宫内膜异位囊肿20例、子宫内膜异位症相关的卵巢癌17例, 正常子宫内膜20例中PTEN蛋白、Survivin蛋白的表达。结果 PTEN蛋白在正常子宫内膜的阳性表达低于子宫内膜异位症相关的卵巢癌、卵巢子宫内膜异位囊肿, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。Survivin蛋白的趋势与PTEN相反, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。PTEN、Survivin蛋白表达与分期、分化程度, 差异无统计学意义(P>0.05)。PTEN、Survivin蛋白表达无明显相关性(r=0.143, P＞0.05)。结论 卵巢子宫内膜异位囊肿发生恶变的过程中可能与PTEN、Survivin蛋白表达异常有关, 可能PTEN蛋白表达异常更有意义。

PTEN; Survivin；子宫内膜异位症; 卵巢肿瘤; 基因表达

子宫内膜异位症(endometriosis, EMs) 最常异位于卵巢,是育龄期妇女的常见良性病, 但具有类似恶性肿瘤的行为,并可发生恶变。卵巢子宫内膜异位症恶变的主要细胞学类型为子宫内膜样癌和透明细胞癌, 称为子宫内膜异位症相关的卵巢癌(endometriosis associated ovarian cancers, EAOCs)。

目前认为细胞的异常凋亡和肿瘤的发生关系密切。第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tension homology deleted on chromosome ten, PTEN)是1997年由Li等［1］研究命名, PTEN基因具有诱导肿瘤细胞凋亡功能。目前研究认为人类多种恶性肿瘤中存在PTEN基因缺失或突变［1,2］。凋亡调节基因被认为是继原癌基因、抑癌基因之后的第三类癌基因。Survivin是1997年由美国的Ambrosini等［3］发现的一种细胞凋亡抑制基因, 是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)基因家族的成员。Survivin具有抑制细胞凋亡和调节细胞增殖的双重作用［4］。Survivin的异常表达及其导致的凋亡抑制对肿瘤的发生、发展、预后及抗肿瘤治疗都有着极其重要的影响。总之, PTEN与Survivin均参与细胞周期调控和细胞凋亡, 两者作用环节一致, 但生物学效应相反。作者采用免疫组化二步抗法检测PTEN与Survivin在卵巢子宫内膜异位囊肿、EAOCs及正常子宫内膜中的表达,探讨之间的关系及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2003~2013年昆明市第一人民医院及昆明市延安医院病理科临床资料完整的存档蜡块。17例卵巢子宫内膜相关恶性肿瘤(11例卵巢子宫内膜样癌, 6例卵巢透明细胞癌), 20例卵巢子宫内膜异位囊肿, 20例正常子宫内膜。卵巢癌Ⅰ~Ⅱ期6例, Ⅲ~Ⅳ期11例, 高、中分化8例、低分化9例, 卵巢癌患者中位年龄53岁, 所有患者术前均未接受放化疗。

1.2 试剂与方法 即用型兔抗人PTEN单克隆抗体、即用型兔抗人Survivin多克隆抗体、二步法抗兔/鼠通用型免疫组化检测试剂盒, 购自基因科技(上海)有限公司。常规制片,采用DAKO Envision二步法并经pH抗兔/鼠9.0之EDTA修复液高压修复。具体染色步骤按试剂盒说明书进行, 用试剂公司提供的阳性切片作为对照, 以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判断 PTEN蛋白抗体阳性均为细胞核内出现棕黄色信号颗粒；Survivin蛋白抗体阳性均为细胞核/浆内出现棕黄色颗粒。

1.4 统计学方法 应用SPSS 16.0统计软件, 计数资料采用χ2检验, 频数<5的用Fisher精确概率法, 等级相关检验采用Spearman相关检验, P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN、Survivin蛋白在不同组织中的表达 PTEN蛋白、Survivin蛋白阳性表达分别定位于细胞核和细胞浆内,见图1、2。

图1 PTEN蛋白在各组织的表达(免疫组织化染色 ×200)

图2 Survivin蛋白在各组织的表达(免疫组织化染色 ×200)

PTEN蛋白在正常子宫内膜、卵巢子宫内膜异位囊肿和EAOCs的阳性表达率呈下降趋势, 而Survivin蛋白的阳性表达率呈上升趋势。见表1。

PTEN蛋白表达中, EAOCs与前两组比较P＜0.05；Survivin蛋白表达中, 与正常子宫内膜组比较P＜0.05, 与卵巢巧克力囊肿组比较P＞0.05。

2.2 子宫内膜异位症相关的卵巢癌中PTEN、Survivin蛋白表达与临床病理参数间的关系 PTEN蛋白阳性表达在Ⅰ-Ⅱ期组织中高于Ⅲ~Ⅳ期, 在高、中分化癌组织中高于低分化组织, 但差异无统计学意义(P＞0.05)；Survivin蛋白与之相反；PTEN、Survivin蛋白与年龄无关。见表2。

表1 PTEN、Survivin蛋白在不同组织中的阳性表达(n, %)

表2 PTEN、Survivin蛋白在EAOCs的表达与临床病理参数的关系［n(%)］

2.3 PTEN、Survivin蛋白在EAOCs中表达的关系 在17例EAOCs中PTEN蛋白阳性表达的4例中, Survivin蛋白表达阳性2例、阴性2例；PTEN蛋白阴性表达的13例中, Survivin蛋白表达阳性12例, 阴性1例；经Spearman相关分析表明, 二者表达无明显相关(r=0.143, P>0.05)。

3 讨论

3.1 PTEN蛋白在EAOCs中的表达及临床意义 自1925年Sampson首次报道Ems恶变以来, Omer等［5］报道的恶变率为0.7%~1.0%。Ems恶变病例中, 以卵巢子宫内膜样癌和透明细胞癌为主。本研究结果PTEN在正常子宫内膜、卵巢子宫内膜异位囊肿、EAOCs中的阳性表达逐渐减低, 各组之间差异有统计学意义, 提示PTEN在卵巢子宫内膜囊肿及卵巢子宫内膜囊肿恶变相关肿瘤中失活, 可能在卵巢子宫内膜囊肿发展中起重要作用, 可能是卵巢子宫内膜囊肿向卵巢子宫内膜囊肿恶变相关肿瘤发生过程中的重要原因, 这与Sato等［6］、李淑娟等［7］的研究一致。本研究提示, PTEN蛋白的表达与组织分化程度、临床分期有关, 组织分化程度越低,分期越晚, PTEN蛋白的表达下降, 尽管差异无统计学意义,但表达率明显下降, 提示PTEN蛋白的表达与组织分化程度、临床分期有关。

3.2 Survivin蛋白在EAOCs中的表达及临床意义 大多数学者认为凋亡抑制蛋白基因Survivin与Caspsse特异性结合主要抑制效应蛋白Caspase-3, Caspase-7的活性, 阻断细胞的凋亡过程［3］。Survivin的过度表达可致细胞的异常增殖。本研究提示Survivin蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿表达高于正常子宫内膜, 和Fujino等［8］研究一致, 差异有统计学意义。提示Survivin可能和逃避凋亡, 并发展为子宫内膜异位症紧密相关。

Yoshida等［9］的研究发现, Survivin表达在Ⅰ期透明细胞癌中表达明显高于Ⅰ期浆液性囊腺癌。故卵巢子宫内膜囊肿恶变可能关系到该基因的改变。本研究提示Survivin蛋白在正常子宫内膜、卵巢子宫内膜异位囊肿和EAOCs的阳性表达率呈上升趋势, 尽管卵巢子宫内膜异位囊肿和卵巢子宫内膜样癌和卵巢透明细胞癌的阳性表达的差异无统计学意义, 但后两者均高于前者, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 提示Survivin与卵巢子宫内膜异位囊肿和EAOCs有关。

3.3 PTEN和Survivin蛋白在EAOCs中的表达及临床意义PTEN和Survivin均参与了细胞周期调控和细胞凋亡, 作用环节一致, 但生物学效应相反。其可能的机制为PI3K/Akt信号转导途径对Survivin基因表达有调控作用, 而PTEN在正常生理情况下抑制了PI3K/Akt通路, 从而抑制Survivin的表达［10］。本研究提示PTEN蛋白在正常子宫内膜、卵巢子宫内膜异位囊肿和EAOCs的阳性表达率呈下降趋势, Survivin蛋白表达呈上升趋势, 但两者无相关性。朱晓会［11］用免疫组化法研究认为PTEN、Survivin的表达异常与上皮性卵巢癌的发生具有密切的关系。而Erkanli等［12］研究Survivin、PTEN和p27在正常子宫内膜、增生子宫内膜和子宫内膜癌的表达, 认为Survivin、PTEN在子宫内膜癌的发生发展中不存在联系。故结合本研究结果, Survivin、PTEN在EAOCs是否存在关联有待于进一步的研究。

综上所述, PTEN、Survivin在卵巢子宫内膜异位囊肿及EAOCs表达均有差异, PTEN表达差异有统计学意义(P<0.05),两者无明显相关性, 说明卵巢子宫内膜异位囊肿向卵巢子宫内膜相关恶性肿瘤发生过程中, PTEN蛋白表达异常可能更有意义。

［1］ Li J, Yen C, Liaw D, et al.PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain , breast, and prostate cancer.Science, 1997, 275(5308):1943-1947.

［2］ Steck PA, Persbous MA, Jasser SA, et al.Identification of a candidate tumor suppressor gene, MMACI, at chromosome 10q23.3 that is mutated in multiple advanced cancer.Nat Genet, 1997, 15(4): 356-362.

［3］ Ambrosini G, Adida C, Altieri DC.A novel ant-apoptosis gene, surviving, expressed in cancer and Iymphoma.Nat Med, 1997, 3(8): 917-921.

［4］ Ambrosini G, Adida C, Sirugo G, et al.Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin gene targeting.J Biol Chem , 1998, 273(18):11177-11182.

［5］ Omer GW, Hu CY, Herting AT.Ovarian carcinoma arising in endometriosis.Am Obstet Gynecol, 1950, 59(4):760-774.

［6］ Sato N, Tsunoda H, Nishida M, et al.ILoss of heterozygosity on 10q23 13 and mutation of the tumor suppressor gene PTEN in benign endometrial cyst of the ovary.Cancer Res, 2000, 60(24):7052-7056.

［7］ 李淑娟, 郭科军, 花向锋, 等.PTEN蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿及卵巢子宫内膜样癌组织中的表达及临床意义.中国实用妇科与产科杂志, 2008, 24(4):285-288.

［8］ Fujino K, Ueda M, Takehara M, et al.Transcriptional expression of survivin and its splice variants in endometriosis.Mol Hum Reprod, 2006, 12(6): 383-388.

［9］ Yoshida H, Ishiko O, Sumi T, et al.Survivin, bcl-2 and matrix metalloproteinase-2 enhance progression of clear cell - and seroustype ovarian carcinomas.Int J of Oncology, 2001, 19(3):537-542.

［10］ Carter BZ, Milella M, Altieri DC et al.Cytckine-regulated expression of survivin in mycloid leukemia.Blood, 2001, 97(9): 2784- 2790.

［11］ 朱晓会.卵巢上皮性肿瘤中PTEN和Survivin的表达的意义.中国实用医药, 2012, 7(1):93-94.

［12］ Erkanli S, Kayaselcuk E, Kuscu E, et al.Exp ression of survivin, PTEN and p27 in normal hyperp lastic, and carcinomatous endometrium.Int J Gynecol Cancer, 2006, 16(3):1412-1418.

Expression of PTEN and Survivin protein in ovarian cancers associated to endometriosis and its clinical significance JIANG Ping, XU Hong, WANG Zhong-mi, et al. Department of Gynecology, Kunming First People's

Hospital, Kunming 650011, China

Objective To investigate the expression of PTEN protein and Survivin protein in endometriosis associated ovarian cancers(EAOCs) and their significance and correlation.Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of PTEN and Survivin in 17 cases of EAOCs, 20 cases of endometrial cyst of the ovary and 20 cases of normal endometrium.Results The positive rates of PTEN immunostaining showed higher expression in normal endometrium than the others.Respectively, there were significant difference between the three groups(P<0.05).The tendency of Survivin expression was opposite to that of PTEN.The positive expression of PTEN and Survivin was not correlated with clinical stage and differentiation degree of cancer cells (P>0.05).The positive expression of PTEN was not correlated with Survivin.Conclusion PTEN and Survivin protein may be associated between endometrial cyst of the ovary and ovarian cancer associatedto endometriosis, and PTEN protein is more significant.

PTEN; Survivin; Endometriosis; Ovarian neoplasms; Gene expression

2014-04-01］

650011 昆明市第一人民医院妇科(蒋苹 许红王中弥 曹良杰 周亚丽 栗琼), 病理科(于璐 孙洁)