COX-2、VEGF在宫颈癌中的表达及意义

蔡胜男，韩 克

(南京大学医学院附属鼓楼医院，江苏 南京，210008)

宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，据世界流行病学调查，全球78%的宫颈癌发生于发展中国家。宫颈癌的发生发展是多基因共同作用的结果，各种致癌因素可通过不同的机制使细胞原癌基因激活、抑癌基因失活而导致细胞癌变。本研究对2010—2013年本院手术切除的125例宫颈癌石蜡包埋标本进行研究，探讨COX-2、VEGF-C蛋白的表达及其与临床病理的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2010—2013年南京市鼓楼医院手术切除的宫颈癌石蜡包埋标本共125例，年龄29～79岁，中位年龄46岁。肿瘤分期：按国际妇产科联合会(FIGO)1994年临床分期标准分为原位癌Ib期80例，Ⅱ期31例，Ⅲ期11例，Ⅳ期3例。病理类型：鳞癌92例，腺癌26例，腺鳞癌7例。病理组织分级：高分化3例，高-中分化15例，中分化61例，中-低分化32例，低分化14例。

1.2 研究方法

125例标本经甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片，行苏木精-伊红(H-E)染色和免疫组化染色。免疫组化标记采用HRP二步法，具体操作按试剂盒说明书进行。COX-2鼠抗人单克隆抗体和兔抗人VEGF单克隆抗体试剂盒均购自北京中杉金桥生物有限公司(试剂盒编号PV-6000，品名：通用型kit，规格6 mL)。

1.3 结果评定标准

COX-2蛋白均定位于宫颈上皮源性细胞胞质，无背景着色情况下以细胞出现黄色颗粒者为阳性，VEGF-C着色也以胞质为主，VEGF阳性染色在细胞膜和细胞质有棕黄色颗粒沉着，在400倍显微镜下观察，每例组织切片在免疫反应最强的区域选择5～10个视野，计数l 000个细胞，统计阳性细胞的百分数，≤5%记为阴性，≥5记为阳性，综合考虑染色强度和阳性细胞数，采用半定量积分法判定免疫组化染色结果：计算阳性细胞百分数并赋予分值，≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；观察着色强度并赋予分值，无色为0分，浅黄色为1分，黄色为2分，棕黄色为3分。两者相乘，0分为(-)，1～4分为(+)，5～8分为(2+)，9～12分为(3+)。同一病例的评分结果取平均值作为该病例的最终评分。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0软件系统进行分析，率比较采用卡方检验，P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

COX-2蛋白均定位于宫颈上皮源性细胞胞质，无背景着色情况下以细胞出现黄色颗粒者为阳性，125例宫颈癌患者中COX-2阳性表达109例(87.2%)，蛋白表达与患者年龄、组织分型、分化程度、脉管转移、临床分期等无显著相关性(P>0.05)，在有淋巴结转移病例中COX-2表达阳性占100%，阴性者占82.35%，二者差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF-C着色以胞质为主，VEGF-C阳性染色在细胞膜和细胞质有棕黄色颗粒沉着，VEGF-C阳性表达率为88%。有淋巴结转移病例中VEGF-C表达阳性占100%，阴性者占82.35%，二者差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌脉管阳性样本中VEGF-C阳性表达率为98.4%，宫颈癌脉管阴性样本中VEGF-C阳性表达率为76.27%，二者差异有统计学意义(P<0.01); VEGF-C蛋白表达与患者年龄、组织分型、分化程度、临床分期无显著相关性(P>0.05)。见表1。

表1 COX-2、VEGF的阳性表达强度与宫颈癌临床和病理因素的关系

3 讨 论

3.1 COX-2基因在宫颈癌中表达的意义

COX-2是一种诱导性即刻反应基因，在绝大多数正常组织中检测不到，只有当细胞接受相应刺激后才开始从头合成，如生长因子、细胞因子、癌基因及致癌物等[1]。但COX-2参与肿瘤发生的机制尚未完全阐明。本研究发现，COX-2与患者年龄、分化程度、脉管转移、临床分期等无关，而与宫颈癌淋巴转移明显相关。淋巴转移是宫颈癌的重要扩散方式，与肿瘤的复发和预后有密切联系，尽管宫颈癌的国际妇产科联盟(FIGO)分期系统不包括淋巴结状态，但是否有淋巴结转移可提供重要的预后信息并影响治疗方案的制定。本次研究中COX-2与淋巴阳性状态的相关性提示COX-2可能是提示宫颈癌淋巴转移潜能的有价值指标，对宫颈癌预后的判断和治疗方案的制定可能是有指导意义的。

3.2 VEGF-C基因在宫颈癌中表达的意义

VEGF-C，又称VEGF相关蛋白(VRP)、淋巴管生成因子，VEGF-C基因位于染色体4q34上[2-3]，分子量为46.9 kD，VEGF-C能自由分泌到细胞外，其分泌形式是以二硫键相连的同源二聚体，大多数分泌型VEGF-C是其多肽前体的蛋白水解产物[4]。VEGF-C能与Flt-4(VEGFR-3R)结合，该受体至成年则仅能在淋巴管内皮细胞中检出[5]。结合后受体酪氨酸激酶被活化，其底物发生酪氨酸磷酸化而发挥效应[4-6]。VEGF-C在细胞中主要定位于细胞质中。多种肿瘤细胞几乎特异性地表达VEGF-C mRNA。本组研究结果显示，VEGF-C蛋白表达与患者年龄、组织分型、分化程度、临床分期无关,而与宫颈癌淋巴转移和脉管转移明显相关。肿瘤的生长和转移主要依赖于肿瘤微脉管体系的形成，肿瘤的微脉管包括微血管和微淋巴管，近年来在肿瘤领域研究的重大进展之一就是确立了肿瘤血管生成在肿瘤发展中的重要地位，以及抗血管生成治疗肿瘤的意义。关于肿瘤的生长、浸润、转移及预后与微血管的关系研究者是意见不一，Folkman等[7]认为肿瘤生长依赖于血管生成；又有学者[8]认为肿瘤微血管的生成与肿瘤的生长、浸润、转移及预后

等均有密切关系。本研究发现宫颈癌脉管转移与VEGF-C阳性表达显著相关，提示VEGF-C有可能作为宫颈癌脉管转移的有指标而指导患者预后。与COX-2相同，VEGF-C的表达与宫颈癌淋巴结转移显著相关，VEGF-C也可能是提示宫颈癌淋巴转移潜能的有价值指标。总之，人类恶性肿瘤的生物学行为是一个多因素、多步骤的复杂过程，除了各种环境的影响，还涉及原癌基因的激活和抑癌基因的失活等一系列改变。对肿瘤基因深入研究，找到特异性靶点对肿瘤进行基因治疗，是当前肿瘤研究的主要课题。宫颈癌中有些免疫酶的表达对于宫颈癌的早期诊断及预后判断具有参考价值，对治疗方案的制定有一定指导意义，但对其意义的研究还需要更大样本的支持。

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