外周血调节性T细胞表达水平与卵巢上皮癌预后的相关性

赵春梅

(河北省保定市第二中心医院, 河北 保定, 072750)

卵巢上皮癌(EOC)是最常见的妇科恶性肿瘤之一[1]，其常规治疗手段包括原位切除及术后放化疗。尽管许多患者在常规治疗后，其腹水症状可得到缓解，但大多数患者会出现复发情况，因而目前EOC逐渐成为致死率最高的妇科肿瘤之一。许多研究[2]证实，调节性T细胞(Tregs)能够下调非特异性免疫水平，促进肿瘤发展，对于患者的治疗和康复有不良影响。有研究[3]认为FoxP3+ Tregs对于EOC的预后有影响，但大多相关研究是通过病理切片或实验进行研究，缺乏临床研究，目前只明确在部分EOC病理过程中可能发生卵巢Tregs原位积累[4]，但有关外周血Tregs与EOC的关系则并未明晰。本研究选取2010年1月—2013年6月本院收治的卵巢癌患者50例，对比治疗前后外周血Tregs水平，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年1月—2013年6月本院收治的卵巢癌患者50例，平均年龄(55.7+7.33)岁，均经影像学检查及病理活检确诊为EOC，癌症分期根据国际抗癌联盟(UICC)2002年修订的TNM分期标准，其中Ⅰ、Ⅱ期患者24例为Z组，Ⅲ、Ⅳ期患者26例W组。所有患者术前均无免疫抑制剂使用、围术期输血史、自身免疫性疾病、6个月内未接受抗肿瘤化疗及免疫调节治疗。所有患者均知情且同意接受术后外周血Tregs检测。

1.2 治疗方法

所有患者均因故不能接受手术治疗，并接受联合化疗：阿霉素40～50 mg/kg与环磷酰胺500 mg/kg, 静注后间隔4周为一个疗程。血液样本采集患者治疗前及治疗6个疗程后清晨空腹外周静脉血，样本含量均为5 mL, 经抗凝处理后即行检验。人调节性T细胞检测试剂盒(Human Regulatory T cell Staining Kit)购自美国ebioscience公司，检测用流式细胞仪购自美国贝克曼库尔特公司，型号为MoFlo XDP。对所得血液样本按照生产商提供的步骤进行预处理后使用流式细胞仪进行检测，具体步骤如下：取抗凝混匀的全血100 μL加入流式上样管，分别加入抗cD4-FITC 10 μL和抗CD25-PE 10 μL，室温下孵育30 min, 后裂解红细胞。向上样管内加入破膜/固定剂1 mL, 4 ℃避光孵育40 min。洗涤细胞后加入鼠血清4 ℃避光15 min, 加入抗Foxp3-PE～Cy5及IgG2a-PE-Cy5同型对照, 4 ℃避光孵育30 min, 洗涤后多聚甲醛重悬细胞，通过流式细胞术检测并分析。记录外周血Tregs占CD4+T细胞的比例。治疗后随访6个月，记录患者复发情况并进行比较。

1.3 统计学分析

数据以均数+标准差表示，用SPSS 19.0软件包进行统计学分析。组间均数的比较采用独立样本t检验及χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

联合化疗6个疗程后，临床控制率100%。测得Z组患者治疗前外周血Tregs表达频数平均数为(17.32±7.68)%, 明显低于W组的治疗前频数平均数(25.67±11.05)%(P<0.05), 治疗后Z组依然明显低于W组(P<0.05), 且2组治疗前后外周血Tregs表达频数平均数均呈现治疗后较治疗前明显降低的趋势(P<0.05)。治疗后半年内Z组复发7例，W组复发17例，Z组复发率明显低于W组(χ2=6.56,P<0.05)。见表1。

表1 2组患者外周血Tregs表达频数比较

3 讨 论

EOC是世界范围内女性致死率第五位的恶性肿瘤，其早期症状不明显及高复发率是导致这一结果的主要原因[1]。一般认为EOC的发生来源于外部致癌物质以及体内激素调节机制紊乱。然而随着对EOC认识的深入，人们逐渐意识到肿瘤微环境对于EOC各期的发生和发展有重要影响，其中免疫系统对于EOC的影响尤为突出[5]。无论是原发还是复发EOC，均可发现免疫促进体系与免疫抑制体系间的微妙平衡对肿瘤生长起重要作用[6]。生理情况下卵巢、子宫及附件组织间隙内存在着数量可观的CD8+T细胞、NK细胞、NKT细胞，这些细胞构成的非特异性免疫微环境被认为是影响肿瘤发生发展的重要环节，且有迹象表明其受到外周血Tregs的调控[7-9]。Tregs是一类表达IL-2受体α链的活化T细胞的集合，这类细胞在自体免疫抑制和外周耐受中起主要作用，由于CD4+/CD25+调节性T细胞是这类细胞中发挥重要作用者和主要研究对象，因而作为一般研究对象即将其定义为Tregs[10]。由于其对于T细胞的发育和功能具有关键作用，而非特异性免疫在肿瘤免疫抑制的建立与维持过程中具有重要作用，因而Tregs与肿瘤的关系也成了当前的研究热点。Tregs介导的免疫抑制是肿瘤细胞逃避免疫监视的主要机制和针对肿瘤免疫治疗失败的主要原因[11-13]。Tregs在EOC中的作用较健康人的功能有所不同，有报道[14]称正常情况下Tregs在无血清培养基中无法抑制CD4+、CD25+T细胞，而EOC患者Tregs则可以抑制，因而在EOC中Tregs的免疫抑制性可能得到了增强。另有研究[15]表明Tregs能够抑制T细胞应对Tregs抑制的敏感性及应激能力。越来越多的研究[16-17]表明, Tregs能够影响侵及器官内包括非特异性免疫和特异性免疫在内的整个肿瘤微环境，使得器官内免疫耐受增强，使得体内肿瘤相关免疫功能受到抑制，这一变化可能为EOC的发生创造有利条件。因而，外周血Tregs的表达水平可能直接反映EOC的病理进程，其可作为评估EOC病情及预后的重要标志物。本研究通过临床研究部分证实了上述假设，通过比较治疗前后外周血Tregs表达水平发现，病情处于较为初期的Ⅰ、Ⅱ期患者，其外周血Tregs表达水平明显低于中末期的Ⅲ、Ⅳ期患者，这说明外周血Tregs表达水平在一定程度上随EOC病情发展升高，证实了之前报道所称EOC发生发展与Tregs的密切关系，也进一步理清了其相关关系。通过治疗, 2组患者病情均得到临床控制，但其外周血Tregs表达水平依然存在与治疗前相似的关系，这说明外周血Tregs表达水平可以反映更深层次的病理情况，即便均得到临床控制，但Z组患者外周血Tregs表达水平低于W组患者，说明其病情仍有差异。这一差异在随访过程中复发情况得到了部分反映，治疗结束后6个月内，Z组患者复发率明显低于W组患者，这说明外周血Tregs表达水平与EOC复发具有密切相关性。有报道[18-20]称在子宫内膜癌、卵巢癌、直结肠癌等病例中也观察到相似情况，但目前对于这一相关性的具体机制尚不明晰。

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