婴幼儿毛细支气管炎病毒病原学研究

李雪萍

(河北省保定市第二中心医院, 河北 保定, 072750)

毛细支气管炎属于婴幼儿时期发病率较高的呼吸系统感染性疾病之一。本病好发于2岁以内的小儿，特别是半岁以内的婴儿[1]。主要临床表现为喘咳、气急、气促、呼吸困难等症状。如果疾病持续发展，容易导致呼吸衰竭。严重者危及患儿的生命。研究[2]显示医院中本病患儿的死亡率约1%。有部分患儿疾病演变为高危哮喘儿。因此，需要及早诊断毛细支气管炎，防治病症的进一步恶化。大多学者[3]认为，毛细支气管炎是呼吸系统病毒感染导致的。当然也与遗传、环境和营养等有一定关系。病因学研究[4]显示，常见的呼吸道病毒有呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(RHV)、副流感病毒(PIV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、流感病毒(IVA、B)、腺病毒(ADV)等。本研究拟通过对毛细支气管炎患儿进行呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)、流感病毒(IVA、B)、腺病毒(ADV) 7项呼吸道病毒DNA/RNA检测，深入分析毛细支气管炎疾病发生与病毒感染之间的关系。本研究结合患儿的家族史、检查指标以及病情等多方面考量和分析，为婴幼儿喘息提供早期的预测依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究纳入2011年10月—2014年2月在本院就诊的毛细支气管炎患儿160例。所有患儿均符合第七版《实用儿科学》的诊断标准[1]。其中年龄在3～6个月的有62例。半岁到1岁的患儿有66例。1～2岁的患儿有32例。

1.2 基线资料

全面收集患儿的各项临床资料和数据。主要有年龄、性别、症状和体征等。采集患儿的生命体征：体温、心率、血压。观察患儿的症状及体征，包括咳嗽、喘息、有无发绀、肺部口罗音。实验室检查项目主要有外周循环血液的白细胞、嗜酸性粒细胞等，以及C反应蛋白，肝功能，心肌酶等。

1.3 采集标本

所有患儿在收治入院的第1天或第2天就采集标本。方法是采用无菌吸痰管吸取患儿的鼻咽分泌物。然后放置在2 mL生理盐水中。接着送到专门的实验室进行检测。检测方法是采用实时荧光定量PCR测量上述7大类病毒。

1.4 实验仪器和步骤

本研究采用核糖核酸(RNA)抽提试剂盒。一般采用磁珠柱提取法。PCR-荧光探针采用呼吸道病毒核酸检测试剂盒。实时荧光定量PCR仪(MJ-OPTICON)。取0.2 μL PCR管，每份加入19 IFVA核酸突光PCR检测混合液、1 y 1 RT-PCR酶、然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品511 1分别加入PCR管中，盖好管盖混匀进行PCR扩增反应。

1.5 结果判断

基线调整取6～15个循环的焚光信号，阈值设定原则以阈值线刚好超过DEPC-HaO检测突光曲线的最高点。Ct值为UNDET或40, 样本低于检测线，报告为阴性; Ct值<38,报告为阳性; Ct值38～40, 复检一次，如仍为38～40, 则报告为阴性。

1.6 统计学处理

本研究采用SPSS 13.0统计软件分析数据。连续变量采用t检验，分类变量采用卡方检验。检验水准精确到a=0.05,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 160例患儿鼻咽分泌物病毒检出情况

本次研究纳入160例患儿。共有92例至少检查出有一种病毒感染。总的检出率达到57.50%。各类型病毒的具体分布情况，RSV检出例数最多，有66例，达到71.73%。其次为IVA、PIVⅢ，各为7例，占到7.61%。见表1。

表1 各类病毒所占比例分布

2.2 各年龄段检出情况比较

本次研究发现，在年龄段为3～6月组患儿, RSV检出40例，ADV检出1例, IVA检出4例，IVB检出3例，PIVⅠ检出1例，PIVⅡ检出2例, PIVⅢ检出4例，总阳性率达到88.70%。在年龄段为6月～1岁组患儿，RSV检出18例，ADV检出1例, IVA检出3例，IVB检出1例，PIVⅠ检出1例，PIVⅡ检出0例，PIVⅢ检出2例，总阳性率达到39.39%。在年龄段为1～2岁组患儿，RSV检出8例，ADV检出1例, IVA检出0例, IVB检出0例, PIVⅠ检出1例, PIVⅡ检出0例, PIVⅢ检出1例，总阳性率达到34.37%。不同年龄段的各种病毒阳性检出情况比较具有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表2 各年龄段各种病毒阳性检出情况比较[n(%)]

2.3 混合感染病毒情况

本研究患儿病毒混合感染共11例，分别为RSV合并IVA感染5例、RSV合并PIVⅢ感染3例、RSV合并IVB感染1例，RSV+PIVⅠ感染1例，RSV合并ADV感染1例。

2.4 各病毒的临床症状与体征分布

在检出的病毒中，感染RSV患儿症状比例最高的是喘鸣音，其次为口周发绀、肺纹理粗乱，肺部实变很少。ADV患儿表现比例最高的是发热、呼吸困难、口周发绀、喘鸣音等，其次为湿口罗音、斑、片影、实变。IVA患儿表现比例最高的是喘鸣音，其次为发热，没有肺部实变例数。IVB患儿表现比例最高的是喘鸣音，其次为发热，没有肺部实变例数。PIVⅠ患儿表现比例最高的是口周发绀、喘鸣音，其次为肺纹理粗乱，没有发热、呼吸困难的例数。PIVⅡ比例最高的是口周发绀、喘鸣音，其次为肺纹理粗乱，没有发热、呼吸困难的例数。PIVⅢ患儿表现比例最高的是喘鸣音，其次为呼吸苦难、发热，没有肺部实变例数。混合感染患儿表现比例最高的是喘鸣音，其次为肺纹理粗乱、发热。见表3。

表3 各病毒主要临床表现、体征及辅检的阳性率比较 %

2.5 RSV与ADV感染临床比较

单纯RSV感染55例患儿，53例都没有高热表现，发热时间为2～4 d。呼吸衰竭有10例，心力衰竭有1例，肝损害有19例，多表现为肺纹理增粗，整个病程5～11 d。而3例ADV感染患儿均有高热表现，发热时间为7～16 d。呼吸衰竭有2例，心力衰竭有1例，肝损害有3例，多表现为气肿 或实变，整个病程12～26 d。

2.6 RSV感染患儿详细分析

66例RSV感染患儿，单纯感染55例，合并感染11例。其中在疾病早期或恢复期的嗜酸性粒细胞都升高患儿有12例，而且有7例患儿的总IgE升高2倍及以上。这些患儿都有家族过敏史，临床表现较为严重，出现呼吸困难10例。呼吸衰竭的5例。胸片见局限性肺气肿或/和肺不张，间质炎症改变，疗程长，住院平均日13 d, 随访后期易反复喘息发作。而在疾病早期嗜酸性粒细胞不高，恢复期升高患儿有3例。他们总IgE均升高2倍或以上，均有家族过敏史，临床表现重，呼吸困难甚至呼吸衰竭，胸片表现局限性肺气肿或/和斑片状致密影，疗程亦较长，住院平均日13～15 d, 随访后期半数以上有易反复喘息发作。另外一组嗜酸性粒细胞处于低水平的40例患儿，总IgE及家族过敏史均无统计学意义，临床表现呼吸困难20例，仅3例发生呼吸衰竭。11例混合感染患儿，9例恢复期嗜酸性粒细胞均升高，总IgE均升高，均有家族过敏史，其中5例表现呼吸困难，3例出现呼吸衰竭，此5例出院后3月内均有反复喘息史。胸片均见实变样改变。各类病毒感染的症状比较显示，不同病毒的感染症状有区别。RSV患儿主要表现为喘鸣音，口周发绀、肺纹理粗乱等。ADV患儿主要表现为发热、呼吸困难、口周发绀、喘鸣音等。IVA、IVB患儿主要表现为喘鸣音，发热，没有肺部实变。PIVⅠ、PIVⅡ主要表现为口周发绀、喘鸣音，肺纹理粗乱，没有发热、呼吸困难。PIVⅢ主要表现为喘鸣音，呼吸困难、发热，没有肺部实变。混合感染患儿主要表现为喘鸣音，肺纹理粗乱、发热。

3 讨 论

纵观当前的临床研究，大多学者[5-6]认为婴幼儿的毛细支气管炎主体上是由于呼吸道合胞病毒(RSV)感染导致的，当然也有其他病毒的感染。比如也有腺病毒(ADV)、流感病毒A、B型(IVA、B)、副流感病毒Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型(PIV Ⅰ、PIVIK PIVⅢ)等。研究收治的160例患儿，共有92例至少检查出有一种病毒感染。总的检出率达到57.50%。各类型病毒的具体分布情况，RSV检出例数最多，有66例，达到71.73%。其次为IVA、PIVⅢ，各为7例，占到7.61%。在年龄段为3～6周组患儿，总阳性率达到88.70%。在年龄段为6周～1岁组患儿，总阳性率达到39.39%。在年龄段为1～2岁组患儿，总阳性率达到34.37%。不同年龄段的各种病毒阳性检出情况比较具有统计学意义(P<0.01)。而且在中3～6月组阳性率显著高于6月～1岁组与1～2岁组(P均<0.05)。可见，随着年龄的增加，病毒感染的阳性检出率不断降低。92例阳性病例中，RSV检出66例(占71.73%), 这说明RSV是毛细支气管炎的主体病原体。而且不同年龄段的患儿感染RSV也显著高于其它病毒种类。这个结果与以往的研究报告类似[7-8]。另外，RSV阳性率以3～6月组患儿最高，其次为6月～1岁组患儿，最低是1～2岁组患儿。三组患儿RSV检测阳性率存在显著差异(P=0.000), 各组相互间比较均存在显著差异(P<0.01或<0.05)。其他病毒感染阳性率比较没有差异。这些说明婴幼儿患有毛细支气管炎发生年龄为2岁以内，峰值为3～6个月。详细分析RSV感染毛细支气管炎患儿，发现嗜酸性粒细胞增多的患儿容易出现哮喘。这提示RSV感染出现婴幼儿的反复喘息发生可能和自身的敏感体质有一定联系。因此，临床治疗中针对过敏体质的患儿要提前预防哮喘的发生。有研究[9]显示近年来，变应性炎症在婴幼儿毛细支气管炎的发病中扮演一定的作用。实验研究[10]揭示患儿的气道分泌物和外周血中可以检测出许多与哮喘病人独有的一些炎性介质。这些炎性物质能促进气管平滑肌收缩，腺体分泌，很有可能是促发哮喘的原因。

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