甘肃地区164例宫颈癌人乳头瘤病毒基因分型检测的研究

冯淑娴,王 勇

(1.兰州军区兰州总医院473临床部 妇产科,甘肃 兰州,730070; 2.甘肃中医学院,甘肃 兰州,730000)

子宫颈癌是女性生殖道发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，中国每年新发病例在13万以上，每年有2～3万妇女死于宫颈癌。近年来发病率明显上升，呈年轻化趋势，且发病率很不平衡，其中西北部甘肃地区发病率居全国高发地区之一[1]。基础研究和流行病学调查已经明确人乳头瘤病毒(HPV)是宫颈癌发生的主要因素，且为始动因素[2],HPV已知100多种亚型，其亚型因区域和种族的不同而存在差异。本实验对甘肃省164例宫颈癌和100例其他生殖道疾病患者样本HPV感染情况进行分析，以了解甘肃地区妇女生殖道HPV感染和分布情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年4月—2013年4月兰州军区兰州总院妇产科不同生殖道疾病患者的标本，每1份标本为刷取宫颈口棉拭子，均来源于甘肃地区，无放化疗病史。第1组包含164份来自诊断宫颈癌的样本，平均(48.2±11.5)岁。第2组包含100份患有其他生殖道疾病的样本(包括子宫肌瘤，宫颈糜烂，卵巢肿瘤，阴道炎，尖锐湿疣，支原体衣原体感染)，平均年(38.9±9.9)岁。所有标本采集和诊治过程均经患者同意。

1.2 主要试剂

HPV DNA 抽提试剂盒购自QI AGEN公司。HPV-21分型检测采用香港凯普公司的HPV基因微阵列分型检测试剂盒和HybriMax医用核酸分子快速杂交仪。

1.3 HPV分型检测

采用HybriMax技术对21种HPV亚型进行检测。21种HPV分为高危型和低危型两类,高危型(HR-HPV)15种，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66和68，低危型(low-risk types,LR-HPV)6种HPV6、11、41、42、44同CP8304，结果判读，按芯片上HPV亚型分布的相应着色位点判断。有两型或两型以上属多重感染。

2 结 果

164个宫颈癌患者样本中140个HPV DNA呈阳性，占85.4%,多数(112/140)是由单基因型感染引起，特别是HPV-16单基因感染占90例(80.4%),其余22例单基因感染者中HPV-52,-58,-18,-59各4例(3.6%,each),HPV-31,-33各2例(1.8%,each)和HPV-6 2例(1.8%)。140例中剩余28例(20%)DNA检测是2种或2种以上基因型阳性,28例中20例是2种基因型感染，这20例患者中，10例是由HPV-16和1种低危型HPV感染(8例与HPV-11有关，2例与HPV-42有关),4例是HPV-16和-66,2例是HPV-16和-33,2例是HPV-53和-66,另2例是HPV-16和-CP8304。28例中6例是由3种基因型多型感染,2例是HPV-16,-52和-66感染，2例是HPV-45,-52和-6感染，另2例是HPV-16,-18和-58感染。剩余2例多重感染的病例是由4种基因型感染，它们是HPV-52,-53,-33和-CP8304。总体来说，在第1组中14种HPV基因型被检出，包括10种高危型(HPV-16,-18,-31,-33,-45,-52,-53,-58,-59和-66)和4种低危型(HPV-6,-11,-42和-CP8304)，基因型的阳性比率HPV-16(68.3%、112/164),HPV-52 (6.1%、10/164),HPV-58,-18，-33(3.7%,each、6/164),HPV-59(2.4%、4/164),HPV-31,-45(1.2%,each、2/164),HPV-6(1.2%、2/164),HPV-11(4.9%、8/164),HPV-42(1.2%、2/164)和HPV-CP8304(2.4%、4/164)型。见表1。

100例其他生殖系统疾病患者中,28例HPV DNA呈阳性，占28%。28例中22例(78.6%)HPV DNA阳性病例是由单基因型感染，包括6例HPV-16阳性,6例HPV-11阳性,4例HPV-52阳性,2例HPV-18阳性,2例HPV-68阳性和2例HPV-39阳性。其余病例(21.4%)是由HPV多基因型感染，包括2例HPV-16和-11阳性,2例HPV-16，-52和-58阳性，2例HPV-16,-31,-59和-68阳性。总体，在这些患者中有9种HPV基因型被检测到，包括8种高危型(HPV-16,-52,-68,-18,-31,-59,-39和-58)和1种低危型(HPV-11)。基因型的阳性比率HPV-16(12%、12/100),HPV-11(8%、8/100),HPV-52 (6%、6/100),HPV-68(4%、4/100),HPV-18,-31,-59,-39和HPV-58(2%,each、2/100)。见表1。

表1 HPV DNA检测结果

3 讨 论

近年来，女性生殖道的HPV感染由于与宫颈癌的密切关系而越来越受到人们的重视，HPV是一种双链球形DNA病毒，具有组织特异性，只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞。迄今已确定基因组全序列的HPV基因型有85种，约40种与人类生殖道感染有关，而且不同HPV亚型的感染其致病性和后果也有差异[3],高危型如HPV-16、-18和-58,90%与高度宫颈上皮内瘤样变、不典型增生和癌变有关；低危型如HPV-6、-11等，引起生殖道尖锐湿疣和低度宫颈上皮内病变。许多国家学者研究HPV分型分布。尽管之前关于HPV DNA在宫颈癌的阳性率报道不完全一致，大多数报道[4-5]阳性率范围在83%～96%之间，本组研究的164例宫颈癌标本中，发现HPV DNA阳性率85.4%,在此范围间。报告的差异性主要是由于不同地区HPV患病率不同和检测方法的区别。在宫颈癌患者中HPV-16、-18作为常规分型检测，导致高达70%的检出率[6]。其他HPV的分型不同地区报道不同。因而，不同地区和人群HPV亚型感染的分布资料，是生殖道疾病防治策略的基础。

HPV感染非常普遍，这种感染通常是“一过性”的,90%可以自行清除(4～6个月)，其中低危型HPV(平均时间8.2月)，高危型HPV(平均时间13.5月),10%高危型HPV持续性感染，只有持续感染才会造成宫颈癌，一般历时7～10年[7]。目前,HPV感染的诊断基于病毒DNA的检测。在本组研究中，尽管8种HPV高危型在2组中都检测到，宫颈癌患者中高危型的阳性率比其他生殖道疾病(阳性率28%)明显增加,2组中HPV感染率有显著性差异(P<0.005)。宫颈癌组检测到常见的7种基因型是HPV-16(80.0%),HPV-52(7.1%),HPV-66和HPV-11(5.7% each),和HPV-58,HPV-18和HPV-33(4.3% each)。与亚洲HPV亚型前5型16、18、45、58、52基本一致，由于地区特性,HPV-45阳性比例仅1.2%。在所有基因型中HPV-16是检测到的最常见基因型，因为宫颈癌HPV DNA阳性中80%是HPV-16单独感染或与其他基因型联合感染。HPV-52相对也常见。在甘肃地区HPV-58和-18是不常见亚型，两型阳性率均为4.3%,这与之前的报道存在差异[8],有2种可能原因，一种是在中国不同地区HPV基因型分布不同，比如说，HPV-58在南方检出比北方高，而本组样本取自西北方甘肃；另外一种原因考虑是HPV DNA检测方法不同，结果不同。本组采用HybriMax技术，此技术检测HPV分型准确性高，对发现HPV有较好的敏感性和特异性，是临床HPV感染分型检测的有效方法[9]。

本研究中，多重感染率明显低于单一感染率。第1组多重感染28例(17.1%),主要是二重感染(71.4%),以HPV-16亚型为主，常见的有: 16+11,16+42,16+66,16+33,53+66,其中发现HPV-66在多重感染中检出率较高，低危型HPV-11总是伴随HPV-16。三重及以上感染中HPV-52常见,52+45+6，52+16+66，52+53+33+CP8304。第2组多型感染6例(6.0%)，2组比较差异有统计学意义(P<0.01)。这与报道[10]一致。多种HPV复合感染可以是同时感染不同的HPV类型，也有可能是多次感染导致，由于HPV感染后大部分被机体清除，因此本组研究可能低估了多种HPV复合感染率，尚需大样本实验进一步验证。

尽管这项研究建立在小样本上，但对HPV感染分布和诊断分析是有利的。基因检测早于细胞形态改变，HPV DNA感染的检测已成为筛查和预防宫颈癌的关键问题之一[11]，分型检测对临床宫颈细胞学异常的评估和管理，病程的进展，人群流行病学调查和病毒疫苗的研制都有重要意义。该项研究数据显示HPV-16和-52基因型是甘肃地区最常见HPV基因型,为制作针对性的疫苗提供数据依据，建议在甘肃地区研发HPV

疫苗应包括这2型，有效预防和控制HPV在甘肃地区的感染。

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