HPLC法测定调血养发洗剂中欧前胡素的含量

★ 张岳 李养学 程青云 孙冬梅

(1.广东省食品药品职业技术学校 广东 广州 510663；2.广东省中医药工程技术研究院 广东 广州 510095)

调血养发洗剂源于广东省第二中医院的临床经验方，由白芷、黄柏、干姜、侧柏叶等中药制备而成，具有清热解毒、燥湿止痒、益发生发的功效。临床主治脂溢性脱发，对头皮发痒，头屑多等有显著疗效。为了有效控制本产品的质量，保证用药的安全和疗效，本文采用HPLC法对君药白芷中欧前胡素进行了含量测定，为补充和完善该制剂的质量标准及开发成临床新药奠定了良好的技术基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters e2695-2498高效液相色谱仪(美国Waters公司)、Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平(瑞士)、MilliPore Advantage A10超纯水机(美国)、HWS-26电热恒温水浴锅(上海)、DHG-9203A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏设备有限公司)、KQ52300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 试药 欧前胡素对照品(110826-201013，含量以99.6%计算)、购于中国药品生物制品检定院；调血养发洗剂(批号：20120401、20120402、20120403)由广东省第二中医院制剂室提供；乙腈、甲醇为色谱纯试剂(一级)；水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水(48∶52)[1]；检测波长为254nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃。在上述色谱条件下，欧前胡素与其他成分能较好分离，阴性对照溶液在欧前胡素对照品相同保留时间位置上未见色谱峰，说明阴性对照无干扰，见图1～3。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取欧前胡素对照品12.30mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10mL，置于100mL量瓶中，加甲醇至刻度，即制得每1mL含欧前胡素24.5016μg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品约4mL，精密称定，置蒸发皿中，加硅藻土适量吸附，蒸干，转移至50mL量瓶中，加甲醇45mL，超声处理(功率300W，频率50kHz)1小时，取出，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

图1 欧前胡素对照品HPLC图谱

图2 供试品HPLC图谱

图3 阴性对照HPLC图谱

2.4 阴性对照溶液的制备 取按调血养发洗剂制备工艺制备的缺白芷的阴性样品4mL，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制成白芷阴性对照溶液。

2.5 线性范围的考察 精密量取“2.2”项下配制好的对照品溶液1,2,3,4,5mL，分别置5mL量瓶中，加入甲醇并稀释至刻度，得欧前胡素的浓度分别为4.90032，9.80064，14.70096，19.60128，24.50160μg的对照品溶液。精密吸取上述溶液各10μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定，测定峰面积。以峰面积(Y)对欧前胡素含量(X)进行回归，得标准曲线，Y=4239.8X-9114.5(r=0.9999)。欧前胡素在49.0032～245.0160 ng范围内呈现良好的线性关系。

2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液(10μg/mL)10μL连续重复进样6次，测得峰面积积分值RSD<2%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品(批号：20130401)溶液，分别于0，2，4，8，12 h进样10μL，测得样品中欧前胡素峰面积值的RSD<2%(n=5)，表明供试品溶液12小时内稳定性良好。

2.8 重现性试验 取同一批样品(批号：20130401)按“2.3”项下方法制备供试品溶液6份，按拟定的含量测定方法，分别精密吸取10μL进样，测得峰面积积分值并计算含量，得欧前胡素含量RSD<2%(n=6)，表明本方法重现性较好。

2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品溶液(批号20130401)9份，每份精密量取2mL，分别精密加入“2.2”项下的欧前胡素对照品1，1.3，1.5mL(80%，100%，120%)三种不同浓度的母液，按“2.3”项下方法处理，并按“2.1”项下色谱条件测定，计算平均回收率为99.30%，RSD为1.42%(n=9)，表明本含量测定方法准确度高，方法可靠，结果见表1。

表1 欧前胡素加样回收率测定结果(n=9)

2.10 样品测定 取不同批次样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行含量测定，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=2，mg·mL-1)

3 讨论

白芷为本制剂的君药，欧前胡素为白芷的主要有效成分，故选择欧前胡素作为控制本品质量的指标成分。含白芷的中药复方制剂中欧前胡素的含量测定方法，文献报道有薄层色谱法和高效液相色谱法等[2,3]。试验中曾参照《中国药典》2010年版一部白芷的含量测定方法，结果欧前胡素色谱峰分离度较差，有包峰出现，尝试改变流动相的比例，但出峰太慢，分析时间较长，且分离度改善不大。通过查阅文献，改变流动相，实现了欧前胡素色谱峰与其它成分色谱峰的良好分离，且保留时间适中，出峰时间较早，峰形对称。另外，试验中对不同色谱柱，流速以及柱温等因素进行了考察，最终确定以本文所述方法测定调血养发洗剂中欧前胡素的含量。方法学考察结果表明，该方法简便、灵敏度高、重现性好、结果准确，可用于本品的质量控制，为今后开发成临床新药奠定了良好的技术基础。

[1]郑立红,李卫敏,陈志峰.不同产地白芷中欧前胡素的含量测定[J].世界中医药,2012,7(1):79-80.

[2]李海燕,岑志芳,林玉明.中药新药复方天麻头风胶囊中白芷的含量测定研究[J].时珍国医国药,2006,17(6):965-966.

[3]姜雪,王萍,王洋,等.兴安白芷种子欧前胡素含量的HPLC分析及不同产地的含量测定[J].林产化学与工业,2008,28(3):101-103.