RP-HPLC法测定不同树龄紫油厚朴中和厚朴酚及厚朴酚的含量

李红英，杨永康，殷红清，秦大吉，万海英，帅超群

(1.湖北省农业科技创新中心鄂西综合试验站，湖北 恩施 445000;2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

RP-HPLC法测定不同树龄紫油厚朴中和厚朴酚及厚朴酚的含量

李红英1,2，杨永康1,2，殷红清1，秦大吉1，万海英1，帅超群2

(1.湖北省农业科技创新中心鄂西综合试验站，湖北 恩施 445000;2.恩施清江生物工程有限公司，湖北 恩施 445000)

建立了RP-HPLC法测定紫油厚朴药材中和厚朴酚及厚朴酚的含量.采用依利特 ODS2 C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，以甲醇∶水=75∶25(V/V)为流动相，检测波长294 nm，流速1.0 mL/min，柱温25℃.结果得到厚朴酚的平均回收率为98.10%，RSD为0.42%，和厚朴酚的平均回收率为99.86%，RSD为0.86%.该方法重复性好、精密度高、线性关系良好，快速、准确；为紫油厚朴药材品质评价、品种选育及含量控制提供了科学依据.

厚朴；HPLC；厚朴酚；和厚朴酚

中药材厚朴是木兰科木兰属乔木厚朴(MagnoliaofficinalisRehd. et Wils.)或凹叶厚朴(MagnoliaofficinalisRehd. et Wils. var.bilobaRehd. et Wils.)的干燥干皮、根皮及枝皮,性温味苦辛，具有食积气滞、腹胀便秘、湿阻中焦、脘痞吐泻、痰壅气逆、胸满喘咳等作用[1].厚朴中的主要有效成分是厚朴酚与和厚朴酚[2-4]，具有抗菌抗炎、抗氧化、抗癫痫、抗心率失常和抗血小板的作用，和厚朴酚还具有抗肿瘤作用[5].因此，紫油厚朴作为一种珍贵的传统中药材，是处在平均海拔1 200 m的恩施地区特色作物之一[6-8]，对其主要成分的含量控制及品质评价具有举足轻重的作用.同时,可为紫油厚朴的品种选育提供科学的依据.

1 材料

1.1 仪器

美国戴安Ultimate 3000高效液相色谱仪(Ultimate 3000泵，Ultimate 3000紫外检测器，四元低压混合系统，Ultimate 3000自动进样器，ChromeLeon工作站，Ultimate 3000色谱柱恒温箱)，KQ-250D型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，赛多利斯BT125D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司).

1.2 试剂

厚朴酚、和厚朴酚对照品(中国药品生物制品检定所)，分析甲醇、色谱甲醇，双重蒸馏水.

1.3 样品来源

紫油厚朴(MagnoliaeOfficinalis)干皮样品，来源于湖北省恩施市新塘乡湖北省农业科学院中药材研究所植物园，于2013年7月树皮采剥期剥皮，晒干即可.

图1 和厚朴酚、厚朴酚对照品

图2 厚朴样品

表1 添加回收率实验

2 方法与结果

2.1 色谱条件

HPLC以甲醇∶水=75∶25(V/V)为流动相；色谱柱为依利特 ODS2 C18(4.6*200 mm,5 μm);检测波长为294 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为25℃.

2.2 对照品溶液的制备

取和厚朴酚、厚朴酚对照品适量，用甲醇分别配置成含和厚朴酚、厚朴酚200 μg/mL、150 μg/mL的对照品溶液.和厚朴酚与厚朴酚对照品色谱图如图1所示.

2.3 供试品的制备

精确称取紫油厚朴药材粉末(粉碎过4号筛)0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密称量，分别精密加入甲醇20 mL,超声波提取30 min，过滤，定容于25 mL容量瓶中，摇匀，作为供试品.部分试验厚朴样品色谱图如图2所示.

2.4 线性关系的考察

取对照品溶液,按照2.1的色谱条件, 分别进样2.0、5.0、10.0、20.0、40. 0 μL，以峰面积(A)对浓度(C)回归分析，得和厚朴酚、厚朴酚标准曲线回归方程分别为：A1=3.16x-0.23,相关系数r=0.999 99；A2=3.45x+0.21,相关系数r=0.999 99.结果表明,和厚朴酚、厚朴酚在此条件下呈良好的线性关系.

2.5 精密度试验

按照2.1的色谱条件连续进同一供试品溶液5次，测和厚朴酚、厚朴酚峰面积的RSD分别为0.94%、1.61%.

2.6 稳定性试验

取同一供试品溶液，按每2 h测定一次，供试品中和厚朴酚、厚朴酚峰面积的RSD为0.74%、0.97%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定.

2.7 重复性试验

取厚朴药材5份，按照2.3的方法平行制备5份供试品.依该法测定，计算和厚朴酚、厚朴酚保留时间和峰面积的RSD分别为1.20%，1.97%和1.08%0.73%，表明该方法的重复性较好.

2.8 添加回收率试验

取已知含量的厚朴样品约0.2 g，精密称取3份，分别加入等量的对照品，按照2.3的方法进行处理，计算回收率，结果见表1.

2.9 紫油厚朴样品的测定结果

按2.8方法操作制得的样品溶液, 进样20 μL,在294 nm处检测.结果不同树龄厚朴中和厚朴酚、厚朴酚的含量如下表2.

表2 恩施双河不同树龄紫油厚朴中和厚朴酚、厚朴酚的含量Tab.2 Enshi different old river, purple magnolia bark oil and honokiol, honokiol content

3 讨论

通过对恩施双河同一地区不同树龄的紫油厚朴总酚含量测定结果看，5年生厚朴中总酚含量最低为2.918%，40年生总酚最高为13.195%.随着树龄的增长厚朴总酚含量也不断增高，紫油厚朴中和厚朴酚的含量明显高于厚朴酚，而且相关研究也表明该地区也明显高于其他地区的厚朴总酚的含量，说明恩施地区适合种植紫油厚朴.为紫油厚朴GDP种植提供可靠的依据.另外，随着树龄的增长，厚朴总酚是否也一直跟随着增加，厚朴药材最佳树龄是多大，是下一步实验亟待解决的问题.

[1]刘可云，董志，朱毅，厚朴酚与和厚朴酚的药理学研究现状[J].中药学，2006，28(5)：716-718.

[2]崔建芳.厚朴中厚朴酚与和厚朴酚的分析[J].药物分析杂志，1989(8)：274.

[3]黄坤水.闽产凹叶厚朴抑菌活性及资源利用研究[D].福州：福建农林大学，2006.

[4]李棣华.厚朴正交提取工艺的初步研究[J].天津中医药，2005(2)：68.

[5]郭文浩，曾霞.和厚朴酚在抗肿瘤研究中的进展[J].华西医学，2006,21(1)：179.

[6]杨红兵,石磊,李明明,等.湖北恩施产厚朴叶中厚朴酚与和厚朴酚定量分析[J].湖北中医药大学学报,2012(1):43-44.

[7]杨竹雅. 厚朴叶药用价值研究[D].成都：成都中医药大学,2012.

[8]庄国庆,刘青,耿天龙，等.不同海拔高度厚朴的产量及厚朴酚与和厚朴酚含量分析[J].农业与技术,2012(8)：2-15.

责任编辑：高山

TheRP-HPLCMethodforDeterminationofDifferentOldPurpleOilHonokiolandMagnololinMagnoliaBark

LI Hongying1,2,YANG Yongkang1,2,YIN Hongqing1,QIN Daji1,WAN Haiying1，SHUAI Chaoqun2

(1.West Comprehensive Experiment Station of Hubei Provincial Agriculture S&T Innovation Center，Enshi 445000,China;2.Enshi Qingjiang Bio-engineering Co.,Ltd.,Enshi 445000,China)

The HPLC is used to determine the content of purpleMagnoliaofficinalismedicinal herbs and Magnolol and honokiol,content. ODS2C18 (200 mm x 4.6 mm,5 μm)chromatographic column is a dopted,and methanol∶water=75∶25(V/V)is taken as mobile phase.Detection wavelength of 294 nm,velocity:1.0 ml/min,column temperature 25℃.The results of Magnolol, the average recovery was 98.10%,RSD=0.42%.Honokiol the average recovery was 99.86%,RSD=0.86%.The method has good repeatability, high precision,good linearity,rapidity and high accuracy.and provides a scientific basis for Magnolia officinalis medicinal materials quality evaluation,variety breeding and content control.

Magnoliaofficinalis;HPLC;magnolol;honokiol

2014-04-08.

湖北省科技支撑计划项目(2013BE0048).

李红英(1982- )，女，农艺师，主要从事药物分析、提取、检测等研究.

O611.5

A

1008-8423(2014)02-0188-02