柱花草胶孢炭疽菌致病力鉴定和致病类型分析

2014-08-12 19:11易克贤郑金龙贺春萍习金根高建明张世清陈河龙刘巧莲
热带农业科学 2014年5期
关键词:炭疽病鉴定分析

易克贤 郑金龙 贺春萍 习金根 高建明 张世清 陈河龙 刘巧莲

摘 要 用2套鉴别寄主分别对47份A型菌和57份B型菌的致病力进行鉴定,研究表明,不同的柱花草炭疽病菌株致病力不同。应用最大似然法(EML法)对鉴别寄主的致病力鉴定结果进行聚类分析,A型菌可划分成3大小种类型,且其聚类非常紧凑,表现出一定的寄生专化性;而B型菌可划分成2大小种类型,但其在型内分化较为复杂,说明B型菌将来有可能分化出更多的小种类型。从地区而言,无论A型菌还是B型菌均表现为海南菌株的致病力最强,其中尤以昌江和东方的菌株致病力最强。因而对病原变异和进化动态的监测十分必要。

关键词 柱花草 ;炭疽病 ;致病力 ;鉴定 ;分析

分类号 S435.4

柱花草(Stylosanthes spp.)又名笔花豆,天然分布在中南美洲、热带北美洲、非洲及东南亚[1]。柱花草是热带、亚热带地区的优质牧草,具有很大的发展潜力[2]。作为放牧和刈割兼用型牧草,中国于1961年首次将疏毛柱花草(Stylosanthes gracilis Kunth.)作为幼龄橡胶园等种植园的绿肥覆盖材料成功引入,起初表现良好,后因易感炭疽病而频临毁灭[3-9]。柱花草炭疽病(Stylo anthracnose)是目前严重影响柱花草生产和推广的主要病害,该病可造成牧草叶片变黄、坏死脱落,茎和叶柄枯萎,花序败落不结籽,严重时使幼苗和整个成株死亡,牧草产量和种子产量锐减甚至绝收。中国自推广种植柱花草以来,由于受到柱花草炭疽病的危害,其产量受到严重影响[10]。柱花草炭疽病病原菌存在高度的生物多样性和遗传变异性[11],同一品种的柱花草在不同地点的感染程度有异;而且一个抗病的柱花草品种使用3~5 a后就会变成感病品种,即品种抗病寿命一般只有5 a左右[12]。柱花草炭疽病病原菌的地理分布与柱花草宿主的自然分布相关。据笔者1997年对中国广东、广西、海南3省的14个主要柱花草生产市县进行调查,发现中国柱花草同时存在A、B 2种专化型[2]。由于中国目前推广种植的柱花草主要是圭亚那种,因此危害中国柱花草的主要是B型胶孢炭疽菌,但其小种尚不清楚。因此,本研究对柱花草炭疽菌进行致病力鉴定和致病类型分析,为有效控制该病流行打下基础,也为筛选高抗炭疽病的育种材料和基因资源提供条件。

1 材料与方法

1.1 材料

鉴定的病原菌材料共104份,其中A型菌47份、B型菌57份,A型菌用柱花草品种Seca(40292),36260,Q10042,93116,2323,2534,2539,Fitzroy,Endeavour(为交叉鉴别寄主)作鉴别寄主; B型菌用Endeavour,Schofield,Cook,Graham,Oxley,Fitzroy(为交叉鉴别寄主)作鉴别寄主。

供鉴定的A型菌株:CH306,CH100,CH224,CH247,CH237,CH275,CH243,CH076,CH349,CH311 CH286,CH242,CH269,CH231,CH235,CH292,CH295,CH058 CH293 CH321 CH087,CH378,CH288,CH505,CH345,CH506,CH512,CH377,CH504,CH509,CH508,CH110,CH036,CH343,CH502,CH511,CH501,CH380,CH379,CH513,CH163,CH376,CH089,CH026,CH691,CH693,CH037;

供鉴定的B型菌株:CH055,CH052,CH011,CH025,CH066,CH016,CH115,CH005,CH018,CH004,CH251,CH100,CH002,CH013,CH008,CH003,CH111,CH010,CH020,CH024,CH026,CH238,CH021,CH118,CH014,CH290,CH253,CH362,CH023,CH678,CH690,CH698,CH674,CH683,CH687,CH697,CH684,CH679,CH451,CH696,CH700,CH669,CH691,CH702,CH484,CH672,CH699,CH670,CH542,CH675,CH526,CH694,CH452,CH450,CH671,CH695,CH677。

1.2 方法

试验工作流程:鉴别寄主种子和苗床土壤基质准备→播种→苗期管理→病原菌繁殖→接种→病情严重度评定→数据分析

1.2.1 准备寄主种子和苗床土壤基质

挑选足够的专门繁殖的寄主种子,用细砂布轻轻擦破种皮,以利种子萌发。

将消毒好的砂土均匀装入育苗盘或杯至一半高度,然后再用消毒好的混合土(表土∶砂=2∶1)装满剩余的一半。

1.2.2 播种

2005年3月播种,随机区组设计,重复3次。首先插入标签,然后按标签正确播种,每杯播种2~3粒。

1.2.3 苗期管理

播后初次浇水施用多菌灵或苯来特,以防幼苗枯萎病。每天检查苗床湿度情况并及时浇水,通常每天浇水1次,注意不要过量。每2周用NPK专用肥溶于水中浇1次。当苗长至10 cm时间苗1次,每杯留苗1株。

1.2.4 炭疽菌繁殖

在接种前2周,即播种后的第5周,用PDA培养基扩繁待试的炭疽菌。

1.2.5 接种

播种后第6周开始接种。用毛刷轻轻洗下培养基上的孢子,再用灭菌水配成孢子悬浮液,调节浓度为1.0×106个孢子/mL,立即用小喷雾器喷雾接种。接种后将育苗盘移入水盆中并用有机透明玻璃罩或塑料罩罩住,在饱和湿度下保湿生长48 h后,除去水盆和罩子,再按接种前苗期管理程序操作。

1.2.6 病情严重度评价

接种14 d后,根据 Horsfall-Barrat 的分类标准[13],按0~9级分级法对幼苗发病情况进行评定,计算病情指数。病情指数计算公式:病情指数=100×∑(各级病叶数×各级代表值)/(调查总叶数×最高级代表值)。病情指数分级标准如下:endprint

0级 无可见病斑;

1级 1~3%叶片或茎段有病斑;

2级 4~6%叶片或茎段有病斑;

3级 7~12%叶片或茎段有病斑;

4级 13~25%叶片或茎段有病斑;

5级 26~50%叶片或茎段有病斑;

6级 51~75%叶片或茎段有病斑;

7级 76~87%叶片或茎段有病斑;

8级 88~94%叶片或茎段有病斑;

9级 95~100%叶片或茎段有病斑。

2 结果与分析

不同的柱花草炭疽病菌株致病力不同。应用最大似然法(EML法)对鉴别寄主的致病力鉴定结果进行聚类分析,A型菌在值-900处可划分成3大小种类型,而B型菌在值-600处可划分成2大小种类型(图1、2)。2002年,笔者曾对25个A型菌进行过毒力鉴定,并将有关数据发往澳大利亚热带植物病理学研究中心(CRCTPP)与其他国家的相关鉴定材料进行纵向综合分析,澳大利亚专家认为可能存在5个小种类型[14]。

从A型菌看,A型菌表现为一定的寄生专化性,主要侵染粗糙柱花草、有钩柱花草,特别是A-3类菌株没有发现侵染圭亚那种柱花草,仅侵染粗糙柱花草(表1、5)。从地区而言,海南3类菌株均有,而广东仅有A-2类菌株(表3)。从致病力来看,A-3类所有的菌株致病力都是测试菌株中最强的,且A-3、A-1类菌株均为海南所特有。海南菌株在3省区中致病力最强,尤其以儋州CH0288、CH0292、CH0275、CH0237、CH0247、CH0306、东方CH0087、昌江CH0037菌株致病力最强,广东的CH0505菌株在后期的侵染较强,广西菌株致病力最弱(图1、表7)。值得特别注意的是CH0306,该菌株能侵染较抗病的西布拉柱花草新种质2534,有可能在将来形成强大的威胁。

从B型菌看,2类菌株均在3省区有分布(表2)。B型菌主要侵染圭亚那种柱花草(表4、6)。2类菌株中以B-2类的致病力最强,B-1类较弱,其中供试菌株中致病力最强的前10个菌株CH700、CH698、CH687、CH678、CH100、CH683、CH026、CH362、CH066、CH118全部出现在B-2类中。从地区而言,来自海南的菌株致病力最强,其中尤其以昌江和东方的菌株致力最强(图2,表8)。

3 讨论与结论

了解病原菌群体内致病性的分化或变异情况,对制定防治对策和指导抗病育种具有重要意义。本研究结果表明:不同的柱花草炭疽病菌株致病力不同;从致病力鉴定结果看,A型菌存在3大致病类型,B型菌存在3大致病类型;但从聚类图看,A型菌聚类非常紧凑,而B型菌在型内分化较为复杂,说明A型菌具有一定的寄生专化性,而B型菌将来有可能分化出更多的小种类型。因而对病原变异和进化的动态监测十分必要。

将本研究的病原毒性鉴定结果与分子标记分析结果进行对比分析,可发现绝大多数致病力最强的菌株均来自于海南,有A-3类、B-2类菌株。因此,在海南特别是在昌江、东方、儋州进行柱花草种子生产时,必须引起足够的重视,种子生产应尽可能避开上述地区,同时对出售的种子应进行严格的消毒和检疫。

关于病菌群体毒性与DNA多态性的相互关系研究有许多文献提及。一般认为一些寄生程度较低的植物病原真菌的DNA多态性和毒性多态性大都存在较好的相关性,对于具有高度专性的活体营养菌如锈菌、白粉菌等的研究结果则不尽一致。Chakraborty等认为,柱花草炭疽菌毒性与DNA多态性之间无明显的关系[11]。由此看来,不同真菌种类的毒性与DNA多态性之间存在甚为复杂的关系,因为致病力的强弱除与病原本身遗传有关外,还与寄主、环境有强烈的相互作用,并在一定程度上还受到人为因素的影响,因此弄清各自的特点,对于深入研究病原致病性的遗传和变异至关重要。

参考文献

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