蒜头果油中神经酸的含量测定

罗爱勤+王小妹+刘春芳+葛发欢

[摘要] 目的 建立蒜头果油中神经酸含量测定的方法。 方法 采用气相色谱法，毛细管柱为ZB-Wax（30.00 m×0.25 mm×0.50 μm），神经酸为对照品，程序升温，采用FID检测器。 结果 神经酸在0.3045～6.0900 mg/ml范围内呈良好线性关系，平均回收率为101.5%，RSD为2.12%。 结论 本法简便、快速、准确、重复性好，可用于测定蒜果油中神经酸的含量。

[关键词] 气相色谱法；蒜头果油；神经酸；含量测定

[中图分类号] R285[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721（2014）05（b）-0014-03

Content determination of nervonic acid from Malania oleifera oil

LUO Ai-qin1，2 WANG Xiao-mei2 LIU Chun-fang2 GE Fa-huan2

1.School of Chinese Materia Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine,Guangzhou 510006,China;2.Guangzhou Hanfang Pharmaceutical Co.Ltd./National Engineer Research Center for the Modernization of Extraction and Separation of TCM,Guangzhou 510240,China

[Abstract] Objective To establish a method for the content determination of nervonic acid from Malania oleifera oil. Methods Nervonic acid was determined by gas chromatography with aera-external standard method.A capillary column ZB-Wax(30.00 m×0.25 mm×0.50 μm)was used with nervonic acid as external standard,temperature programming and FID detector were used. Results Nervonic acid presented a good linear correlation within range from 0.3045 to 6.0900 mg/ml.The average recovery of nervonic acid was 101.5%,RSD was 2.12%. Conclusion This method is simple,reliable,has good repeatability and can be used for quality control of Malania oleifera oil.

[Key words] Gas chromatography;Malania oleifera oil;Nervonic acid;Content determination

蒜头果为铁青树科蒜头果属植物的果实，别名山桐果、马兰后、麦后等，主产于广西西部至云南东南部一带，产量丰富[1-2]。神经酸及其酯类化合物是蒜头果油的主要成分。神经酸的化学名顺-15-二十四碳烯酸，是一种长链的单不饱和脂肪酸，具有恢复神经末梢活性、促进神经细胞生长和发育功能的作用，是大脑发育维持的必需营养物[3-7]。目前，有关神经酸测定的文献[8-12]只介绍了气相色谱法，以神经酸甲酯或乙酯为对照品，将样品进行甲酯化或乙酯化后，测定酯化物的含量，并将酯化物的量表述为神经酸含量的方法。所表述的神经酸含量是一个相对值，并非神经酸的绝对含量。当神经酸酯化不完全时，仅有一部分神经酸成为酯化物能被测出来，而没有酯化的神经酸并不能被测到，因而结果会偏低。本研究开发了一种能直接测定蒜头果油中神经酸含量的方法，首次测定蒜头果油中神经酸的绝对含量，为蒜头果油的开发利用提供质量控制方法。

1 仪器与试剂

1.1 实验仪器

气相色谱仪（7890A，美国Agilent），毛细管柱（ZB-Wax，广州菲罗门科学仪器有限公司），BS210S型电子天平（德国赛多利斯），分析天平（XA205，梅特勒-托利多仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

神经酸对照品（99%，批号：SLBC5921V，Sigma中国），蒜头果油（广州白云山汉方现代药业有限公司），所有试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

2.1.1 色谱条件[13-16]色谱柱：ZB-Wax毛细管柱（30.00 m×0.25 m×0.50 μm），FID温度300℃，进样口温度290℃。升温程序：色谱柱初始温度为170℃，保持2 min，以每分钟升高3℃的速率升温至240℃，保持30 min，分流比150∶1，进样量1 μl。

2.1.2 系统适应性试验分别精密吸取神经酸对照品溶液和供试品溶液各1 μl注入气相色谱仪，测定，色谱图见图1。神经酸的保留时间约为31 min，与其他组分离良好。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取神经酸对照品适量，加三氯甲烷制成每毫升含神经酸6.0900 mg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取蒜头果油1 g，精密称定，置25 ml容量瓶中，加三氯甲烷溶解，并定溶至刻度，摇匀，加0.3 g无水硫酸钠干燥除去水分，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察精密吸取含量为6.0900 mg/ml神经酸对照品溶液适量，加三氯甲烷稀释成浓度为0.3045、0.6090、1.2180、2.4360、4.8720、6.0900 mg/ml的溶液，分别精密吸取1 μl进样。回归方程：A=939.27C+113.22（r=0.9992），结果表明神经酸在0.3045～6.0900 mg/ml范围，与峰面积积分值呈良好线性关系（表1、图2）。

表1 神经酸标准曲线的绘制

图2 神经酸标准曲线图

2.4.2 精密度试验取浓度为1.827 mg/ml的神经酸对照品溶液，进样6次，1 μl/次，记录峰面积分别为：1763.32837、1714.16760、1724.13647、1713.75305、1720.95215、1720.95215、1693.76733，平均峰面积值为1721.68416，RSD=1.33%，表明本测定法精密度良好。

2.4.3 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0、4、6、8、12、16 h进样1 μl测定，记录峰面积分别为：2299.20874、2335.68848、2394.12793、2387.74487、2315.20898、2299.20874，平均峰面积值为2329.90714，RSD=2.39%（n=6），表明供试品溶液中神经酸在16 h内稳定性良好。

2.4.4 重复性试验取同批供试品6份，精密称定，按4项下方法制备，进样1 μl测定，测得神经酸含量5.13%，RSD=2.67%（n=6），表明本法具有良好的重复性（表2）。

表2 重复性试验结果

2.4.5 准确度试验采用加样回收法，取已知神经酸含量为5.13%的蒜头果油，精密称取6份，每份0.5 g，分别置于6个25 ml容量瓶中，精密加入含神经酸对照品25.40 mg/ml的对照品溶液1 ml，按4项方法制备，进样1 μl测定，结果见表3。

2.5 样品测定

取10批蒜头果油，按4项下方法制备，分别精密吸取1 μl注入气相色谱仪，测定样品中神经酸的含量，结果见表4。

表4 蒜头果油中神经酸的含量

3 讨论

在开展本研究前，笔者曾将蒜头果油甲酯化，以神经酸甲酯为对照品，测定神经酸甲酯的含量，但发现蒜头果油中仍有一部分神经酸未被甲酯化。甲酯化反应过程复杂，影响甲酯化反应的因素很多，包括反应温度和时间、催化剂、样品的浓度和水分等。甲酯化反应通常只应用于脂肪酸的组成分析（定性分析），用于定量分析难以准确控制。

本实验以神经酸为对照品、气相色谱外标法测定蒜头果油中神经酸的含量，方法稳定性好、重复性好，精密度、回收率都较满意，能有效控制蒜头果油的质量。

样品中若既有游离神经酸，又有结合型神经酸，仍然可以用本研究方法测定神经酸含量。处理样品时，首先将样品进行皂化，即把结合型神经酸与氢氧化钠或氢氧化钾的醇溶液进行反应，形成钠盐或钾盐，再用盐酸或硫酸酸化，使析出游离神经酸，然后按供试品溶液制备方法操作即可。皂化是否完全，可以通过检验析出的游离酸酸值来判断，当酸值不再增高，说明游离酸析出不再增加，皂化已经完全。

[参考文献]

[1]刘钊权.蒜头果的生长和利用[J].西南林学院学报，1981， 1（1）：61-68.

[2]黄开响，赖家业，石海明，等.我国特有单种属植物蒜头果的保护与利用研究状况[J].广西农业生物科学，2008， 27（6）：76-80.

[3]侯镜德，陈至善.神经酸与脑健康[M].北京：中国科学技术出版社，2006.

[4]刘琳，杨东福，严胜骄，等.神经酸研究进展[J].云南化工，2008，35（4）：39-43.

[5]王熙才，左曙光，邱宗海，等.艾舍尔软胶囊增强小鼠免疫力的实验研究[J].昆明医学院学报，2008，（6）：71-75.

[6]王建民，黄伟素，冯凤琴，等.神经酸在婴幼儿母乳化配方奶粉中的应用[J].中国乳品工业，2003，31（2）：27-29.

[7]王性炎，樊金栓，王姝清，等.中国含神经酸植物开发利用研究[J].中国油脂，2006，31（3）：69-71.

[8]郝旭亚，李伟光，刘雄民，等.气相色谱外标法测定神经酸[J].应用化工，2011，40（3）：545-549.

[9]郝旭亚.蒜头果油中神经酸的分离提纯研究[D].南宁：广西大学，2011.

[10]周永红，李伟光，易封萍，等.气相色谱-质谱法测定蒜头果油中的脂肪酸[J].色谱，2001，19（2）：147-148.

[11]熊德元，刘雄民，李伟光，等.结晶法分离蒜头果油中神经酸溶剂的选择研究[J].广西大学学报，2004，29（3）：85-88.

[12]周永红，刘雄民，王立升.不同产地蒜头果中脂肪酸的GC-MS分析[J].广西大学学报，2002，27（4）：298-300.

[13]李春，黄警.寒痹软膏中樟脑、冰片和薄荷脑含量的测定[J].海峡药学，2013，25（11）：90-95.

[14]王仲，张长弓，付琴琴，等.气相色谱法测定搏心通原料药中亚油酸含量[J].医药导报，2009，28（7）：918-920.

[15]周静，刘垣升.气相色谱法测定女贞子中弃墩果酸和熊果酸的含量[J].中国新药与临床杂志，2003，22（10）：596-598.

[16]张琪，张继龙，王会刚，等.气相色谱外标法测定生物柴油中的酯类组分[J].现代化工，2013，33（8）：134-138.

（收稿日期：2014-03-31本文编辑：李亚聪）

[作者简介] 罗爱勤（1980-），女，制药高级工程师，执业药师，主要从事中药新药和保健食品研发工作

2.4.4 重复性试验取同批供试品6份，精密称定，按4项下方法制备，进样1 μl测定，测得神经酸含量5.13%，RSD=2.67%（n=6），表明本法具有良好的重复性（表2）。

表2 重复性试验结果

2.4.5 准确度试验采用加样回收法，取已知神经酸含量为5.13%的蒜头果油，精密称取6份，每份0.5 g，分别置于6个25 ml容量瓶中，精密加入含神经酸对照品25.40 mg/ml的对照品溶液1 ml，按4项方法制备，进样1 μl测定，结果见表3。

2.5 样品测定

取10批蒜头果油，按4项下方法制备，分别精密吸取1 μl注入气相色谱仪，测定样品中神经酸的含量，结果见表4。

表4 蒜头果油中神经酸的含量

3 讨论

在开展本研究前，笔者曾将蒜头果油甲酯化，以神经酸甲酯为对照品，测定神经酸甲酯的含量，但发现蒜头果油中仍有一部分神经酸未被甲酯化。甲酯化反应过程复杂，影响甲酯化反应的因素很多，包括反应温度和时间、催化剂、样品的浓度和水分等。甲酯化反应通常只应用于脂肪酸的组成分析（定性分析），用于定量分析难以准确控制。

本实验以神经酸为对照品、气相色谱外标法测定蒜头果油中神经酸的含量，方法稳定性好、重复性好，精密度、回收率都较满意，能有效控制蒜头果油的质量。

样品中若既有游离神经酸，又有结合型神经酸，仍然可以用本研究方法测定神经酸含量。处理样品时，首先将样品进行皂化，即把结合型神经酸与氢氧化钠或氢氧化钾的醇溶液进行反应，形成钠盐或钾盐，再用盐酸或硫酸酸化，使析出游离神经酸，然后按供试品溶液制备方法操作即可。皂化是否完全，可以通过检验析出的游离酸酸值来判断，当酸值不再增高，说明游离酸析出不再增加，皂化已经完全。

[参考文献]

[1]刘钊权.蒜头果的生长和利用[J].西南林学院学报，1981， 1（1）：61-68.

[2]黄开响，赖家业，石海明，等.我国特有单种属植物蒜头果的保护与利用研究状况[J].广西农业生物科学，2008， 27（6）：76-80.

[3]侯镜德，陈至善.神经酸与脑健康[M].北京：中国科学技术出版社，2006.

[4]刘琳，杨东福，严胜骄，等.神经酸研究进展[J].云南化工，2008，35（4）：39-43.

[5]王熙才，左曙光，邱宗海，等.艾舍尔软胶囊增强小鼠免疫力的实验研究[J].昆明医学院学报，2008，（6）：71-75.

[6]王建民，黄伟素，冯凤琴，等.神经酸在婴幼儿母乳化配方奶粉中的应用[J].中国乳品工业，2003，31（2）：27-29.

[7]王性炎，樊金栓，王姝清，等.中国含神经酸植物开发利用研究[J].中国油脂，2006，31（3）：69-71.

[8]郝旭亚，李伟光，刘雄民，等.气相色谱外标法测定神经酸[J].应用化工，2011，40（3）：545-549.

[9]郝旭亚.蒜头果油中神经酸的分离提纯研究[D].南宁：广西大学，2011.

[10]周永红，李伟光，易封萍，等.气相色谱-质谱法测定蒜头果油中的脂肪酸[J].色谱，2001，19（2）：147-148.

[11]熊德元，刘雄民，李伟光，等.结晶法分离蒜头果油中神经酸溶剂的选择研究[J].广西大学学报，2004，29（3）：85-88.

[12]周永红，刘雄民，王立升.不同产地蒜头果中脂肪酸的GC-MS分析[J].广西大学学报，2002，27（4）：298-300.

[13]李春，黄警.寒痹软膏中樟脑、冰片和薄荷脑含量的测定[J].海峡药学，2013，25（11）：90-95.

[14]王仲，张长弓，付琴琴，等.气相色谱法测定搏心通原料药中亚油酸含量[J].医药导报，2009，28（7）：918-920.

[15]周静，刘垣升.气相色谱法测定女贞子中弃墩果酸和熊果酸的含量[J].中国新药与临床杂志，2003，22（10）：596-598.

[16]张琪，张继龙，王会刚，等.气相色谱外标法测定生物柴油中的酯类组分[J].现代化工，2013，33（8）：134-138.

（收稿日期：2014-03-31本文编辑：李亚聪）

[作者简介] 罗爱勤（1980-），女，制药高级工程师，执业药师，主要从事中药新药和保健食品研发工作

2.4.4 重复性试验取同批供试品6份，精密称定，按4项下方法制备，进样1 μl测定，测得神经酸含量5.13%，RSD=2.67%（n=6），表明本法具有良好的重复性（表2）。

表2 重复性试验结果

2.4.5 准确度试验采用加样回收法，取已知神经酸含量为5.13%的蒜头果油，精密称取6份，每份0.5 g，分别置于6个25 ml容量瓶中，精密加入含神经酸对照品25.40 mg/ml的对照品溶液1 ml，按4项方法制备，进样1 μl测定，结果见表3。

2.5 样品测定

取10批蒜头果油，按4项下方法制备，分别精密吸取1 μl注入气相色谱仪，测定样品中神经酸的含量，结果见表4。

表4 蒜头果油中神经酸的含量

3 讨论

在开展本研究前，笔者曾将蒜头果油甲酯化，以神经酸甲酯为对照品，测定神经酸甲酯的含量，但发现蒜头果油中仍有一部分神经酸未被甲酯化。甲酯化反应过程复杂，影响甲酯化反应的因素很多，包括反应温度和时间、催化剂、样品的浓度和水分等。甲酯化反应通常只应用于脂肪酸的组成分析（定性分析），用于定量分析难以准确控制。

本实验以神经酸为对照品、气相色谱外标法测定蒜头果油中神经酸的含量，方法稳定性好、重复性好，精密度、回收率都较满意，能有效控制蒜头果油的质量。

样品中若既有游离神经酸，又有结合型神经酸，仍然可以用本研究方法测定神经酸含量。处理样品时，首先将样品进行皂化，即把结合型神经酸与氢氧化钠或氢氧化钾的醇溶液进行反应，形成钠盐或钾盐，再用盐酸或硫酸酸化，使析出游离神经酸，然后按供试品溶液制备方法操作即可。皂化是否完全，可以通过检验析出的游离酸酸值来判断，当酸值不再增高，说明游离酸析出不再增加，皂化已经完全。

[参考文献]

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[4]刘琳，杨东福，严胜骄，等.神经酸研究进展[J].云南化工，2008，35（4）：39-43.

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[6]王建民，黄伟素，冯凤琴，等.神经酸在婴幼儿母乳化配方奶粉中的应用[J].中国乳品工业，2003，31（2）：27-29.

[7]王性炎，樊金栓，王姝清，等.中国含神经酸植物开发利用研究[J].中国油脂，2006，31（3）：69-71.

[8]郝旭亚，李伟光，刘雄民，等.气相色谱外标法测定神经酸[J].应用化工，2011，40（3）：545-549.

[9]郝旭亚.蒜头果油中神经酸的分离提纯研究[D].南宁：广西大学，2011.

[10]周永红，李伟光，易封萍，等.气相色谱-质谱法测定蒜头果油中的脂肪酸[J].色谱，2001，19（2）：147-148.

[11]熊德元，刘雄民，李伟光，等.结晶法分离蒜头果油中神经酸溶剂的选择研究[J].广西大学学报，2004，29（3）：85-88.

[12]周永红，刘雄民，王立升.不同产地蒜头果中脂肪酸的GC-MS分析[J].广西大学学报，2002，27（4）：298-300.

[13]李春，黄警.寒痹软膏中樟脑、冰片和薄荷脑含量的测定[J].海峡药学，2013，25（11）：90-95.

[14]王仲，张长弓，付琴琴，等.气相色谱法测定搏心通原料药中亚油酸含量[J].医药导报，2009，28（7）：918-920.

[15]周静，刘垣升.气相色谱法测定女贞子中弃墩果酸和熊果酸的含量[J].中国新药与临床杂志，2003，22（10）：596-598.

[16]张琪，张继龙，王会刚，等.气相色谱外标法测定生物柴油中的酯类组分[J].现代化工，2013，33（8）：134-138.

（收稿日期：2014-03-31本文编辑：李亚聪）

[作者简介] 罗爱勤（1980-），女，制药高级工程师，执业药师，主要从事中药新药和保健食品研发工作