高效液相色谱法测定蒙药色布茹-7中甘草苷的含量

菅艳艳杨永利

高效液相色谱法测定蒙药色布茹-7中甘草苷的含量

菅艳艳1杨永利2

目的 采用高效液相色谱法测定色布茹-7中甘草苷的含量。方法 甘草苷含量分析采用高效液相色谱法。色谱条件：乙腈-0.5%冰醋酸（18:82）为流动相；检测波长为276 nm，流速1.0 ml/min。结果 样品中甘草苷达到基线分离；结果甘草苷在0.09856～0.98560 µg范围内呈良好的线性关系（r=1.0000），平均加样回收率为98.5%（RSD＝3.1%）。结论 所建立的含量测定方法简便、准确、具有实用性。

高效液相色谱法；色布茹-7；甘草苷

色布茹-7为包头市蒙中医院的一个蒙医验方，用于治疗肾寒引起的遗精。该处方由甘草、枫香脂、荜茇、栀子等七味中药组成，至今尚无含量测定标准。甘草为处方中的主药，本实验建立了高效液相色谱法（HPLC）测定色布茹-7中的甘草苷，方法简便易行，为色布茹-7有效成分的控制提供了实验依据，也使该产品质量的可控性得到进一步提升。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，紫外检测器，昆山市超声仪器有限公司KQ-500DE超声清洗器，METTLER TOLEDO AL204-IC型电子天平，UV-2450紫外-可见分光光度仪。

1.2 样品 色布茹-7（内蒙古包头市蒙中医院提供，批号：090712、090811、090905）。

1.3 标准品 甘草苷（批号：111610-200604）购自中国药品生物制品检定所。

1.4 试剂 乙腈（色谱纯）、水为超纯水、其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 APPOLO C18柱（250.0 mm×4.6 mm，5 µm），phenomenex C18预柱；流动相：乙腈-0.5%冰醋酸（18:82），流速1.0 ml/min，检测波长276.0 nm；柱温：室温；进样量20 µl。此色谱条件下对照品和样品的各峰分离度均大于1.5，且峰形良好，阴性对照样品不干扰测定，理论板数较高，甘草苷的理论板数均大于3 000[1]。

2.2 标准品溶液的制备 精密称取于五氧化二磷减压干燥器中，干燥12 h以上的甘草苷标准品适量，加入甲醇制成每1毫升含甘草苷20 µg的溶液，即得。

2.3 样品溶液的制备 取重量差异项下的本品，研细，精密称取0.45 g，置具塞锥形瓶中，精密加入0.30%氨水50 ml，称定重量，超声处理（功率300 W，频率25 kHz）40 min，取出，放冷，再称定重量，采用0.3%氨水补足减失的重量，滤过，取续滤液，经0.45 µm的微孔滤膜过滤，即得供试品溶液[2]。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 分别精密吸取2.2项下制得的甘草苷标准品溶液适量，按上述色谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，以对标准品质量浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程[3]。回归方程为：Y=1666004.666X+1282.039，r=1.0000，见表1。

表1 甘草苷标准品的标准曲线

2.4.2 稳定性试验 取同一份样品溶液（批号：090905），分别在0、6、12、24 h进行测定。数据表明甘草苷在24 h内稳定，见表2。

表2 放置不同时间测定样品中甘草苷的峰面积积分值

2.4.3 重复性试验 取同一批号色布茹-7样品6份（批号：090905），按2.3项下的方法制备供试品溶液，进样分析。结果表明，本方法重复性良好，见表3。

2.4.4 准确度试验 取供试品（批号：090905，含量2.03 mg/g）9份，各约0.225 g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，再分别在其中3个具塞锥形瓶中各精密加入浓度为4.928 µg/ml、8.436 µg/ml、14.05 µg/ml的甘草苷对照品，0.3%氨水溶液各50 ml（分别相当于供试品含有量的50%、100%和150%）分别称定重量，超声处理40 min，取出，再称重，用0.3%氨水补足减失的重量，摇匀，滤过，测定每份含量，计算回收率，见表4。

2.5 样品测定 取色布茹-7样品3批，照2.3项下的方法处理并测定，见表5。

表3 甘草苷含量重现性试验结果

表4 加样回收试验结果

表5 色布茹-7样品测定结果

3 讨论

本实验考察了218.0 nm、276.0 nm和312.5 nm三个检测波长，参照中国药典2005年版甘草含量测定项下甘草苷的测定方法，故选择276.0 nm作为检测波长[4]。色布茹-7作为蒙古族的验方，尚无质量控制标准，本实验建立甘草苷的含量测定方法，可以有效对其进行质量控制。

[1] 孔文,赵燕红.HPLC法测定蒙药加味乌兰牧仁汤中桅子苷的含量[J].北方药学,2011,8(1):7-8.

[2] 菅艳艳,杨永利.RP-HPLC法测定蒙药沙日崩-8汤中甘草酸的含量[J].中国民族医药杂志,2012,18(5):57-59.

[3] 郭守芹,郑健.HPLC法测定轻身明目颗粒中绿原酸的含量[J].中国药事,2012,26(2):175-177.

[4] 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].北京:化学工业出版社,2005:59-60.

R927.2

A

1673-5846(2014)07-0017-02

1包头市食品药品检验检测中心，内蒙古包头 014060

2内蒙古包头市妇幼保健所，内蒙古包头 014030