美他多辛栓剂的制备及含量测定

金伟华，于波涛，陈 华，张 明，蒲志强，廖文益

(1.成都军区总医院药剂科，成都610083；2.成都医学院药学系，成都610083)

美他多辛(吡多醇L-2-吡咯烷酮-5-羧酸盐)是一种保肝药,可促进乙醇代谢,对急、慢性酒精中毒有较好疗效。美他多辛以维生素B6和焦谷氨酸为原料合成制得,为离子对化合物[1]。据文献和相关资料报道，美他多辛的制剂有片剂、口服液、胶囊和注射剂，但是对美他多辛栓剂的研究还很少。本研究将美他多辛制成栓剂，并建立了HPLC法进行含量测定，可同时检测到美他多辛的两个离子组分峰。

1 仪器和试药

1.1 仪器 1200型HPLC仪(美国安捷伦公司)；AL204型电子天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]；HH-S24S数显恒温水浴锅(上海君竺仪器制造有限公司)。

1.2 试药 美他多辛对照品(含量>99.5%，批号040527,浙江省食品药品检验所)；美他多辛原料药(含量99.5%,批号YN20121121TQW，宜昌永诺药业有限公司)；羟值分别为6.9(批号100701)和48.3(批号101102)的36型混合脂肪酸甘油酯(成都泸天化科森责任有限公司)；甘油(含C3H8O3不少于95.0%，批号20811201，厦门星鲨制药有限公司)；乙腈为色谱纯，水为三重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 置换价的测定

2.1.1 纯基质栓的制备 处方：羟值为6.8和48.3的36型混合脂肪酸甘油酯分别为933.33和466.67 g，共制成纯基质栓1000粒。按照处方量称取两种不同羟值的混合脂肪酸甘油酯，加入蒸发皿中，混匀，70 ℃水浴加热，待2/3基质熔化时停止加热，搅拌使全熔，待基质呈黏稠状态时，灌入涂好甘油的栓模内，冷却成形，脱模即得纯基质栓。

2.1.2 含药栓的制备 处方：羟值为6.8和48.3的36型混合脂肪酸甘油酯分别为819.10和409.55 g；美他多辛原料药271.35 g，共制成含药栓1000粒。按处方称取两种混合脂肪酸甘油酯置蒸发皿中，混匀，70 ℃水浴加热，待基质开始熔化时，加入美他多辛原料药，边加边搅拌，使药物均匀分散在熔化的基质中，趁热灌入涂好甘油的栓模内，冷却成形，脱模即得。

2.1.3 置换价的计算 选取纯基质栓6粒，求出平均栓重为1.383 1 g，记为G；选取含药栓6粒，求出平均栓重为1.461 8 g，记为M，含药量W=M×18.09%(18.09%为每1 g含药栓中的含药量)，为0.264 4 g；将数据代入公式，置换价(f)=W/[G-(M-W)][2]，即可求出置换价为1.424。

2.2 美他多辛栓剂的制备

2.2.1 基质用量的计算 根据美他多辛片剂及胶囊剂规格，将每粒栓剂中美他多辛剂量拟定为0.5 g，用测定的置换价可以计算出美他多辛栓剂所需基质的重量(X)。X=(G-W/f)×n(W为栓剂中美他多辛的剂量，n为拟制备栓剂的枚数)。

2.2.2 制备 按2.1.2项下方法制得6个批次的美他多辛栓剂(批号20130301、20130302、20130303、20130306、20130307、20130308)，为米黄色圆锥形固体。

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件 Gemini 5U-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：35 ℃；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)；流速：1 ml/min；检测波长：205 nm；进样量：20 μl。

2.3.2 溶液的制备 (1)美他多辛对照品储备液 精密称取美他多辛对照品0.010 1 g于100 ml容量瓶中，加0.1%磷酸溶液定容，得浓度为101 μg/ml的美他多辛对照品储备液。(2)美他多辛对照品溶液 精密量取美他多辛对照品储备液5、10、15、20 ml，分别置25 ml容量瓶中，用0.1%磷酸溶液定容至刻度，作为对照品溶液，其浓度分别为20.2、40.4、60.6、80.8 μg/ml。(3)供试品溶液 取同一批次栓剂3粒，称重，计算出平均栓重；将栓剂剪碎，混匀，按照平均栓重精密称取，放入烧杯中，在70 ℃水浴上加热使之完全熔化，将融化液移入100 ml容量瓶中，用适量0.1%磷酸溶液反复荡洗烧杯3次并定容至刻度，过滤，精密量取滤液1 ml于100 ml容量瓶中，再用0.1%磷酸溶液定容至刻度，作为供试品溶液。(4)空白溶液 按(3)项下方法称取剪碎的空白栓剂，同法操作得空白溶液。

2.3.3 系统适用性实验 取上述对照品溶液、供试品溶液和空白溶液各20 μl，按2.3.1项下色谱条件注入HPLC仪，记录色谱图，见图1。从图1可见，基质和溶剂对检测无干扰，待测峰分离度良好，理论塔板数按美他多辛峰1计算均不<5000，分离度>1.5。

图1 美他多辛的HPLC谱图

2.3.4 线性关系考察 取2.3.2项下4个不同浓度(20.2、40.4、60.6、80.8 μg/ml)美他多辛对照品溶液和对照品储备液(101 μg/ml)，按2.3.1项下色谱条件进样，记录色谱图，以对照品浓度(c)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归，得回归方程按峰1计算为A=56.83c+47.88(r=0.999 9)。结果表明，美他多辛在20.2～101 μg/ml浓度范围内呈良好线性关系。

2.3.5 精密度实验 取浓度为60.6 μg/ml的对照品溶液，按2.3.1项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，按峰1计算RSD为0.147%(n=6)。

2.3.6 重复性实验 分别称取同一批号(批号 20130301)样品6份，按2.3.2项(3)下方法制备成供试品溶液，按2.3.1项下色谱条件进样测定，进样量20 μl。结果供试品含量按峰1计算RSD为0.362%(n=6)。

2.3.7 稳定性实验 取美他多辛栓剂(批号 20130301)1份，按2.3.2项下方法制备成供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、24 h进样测定，进样量20 μl。结果供试品含量按峰1计算RSD为0.977%(n=6)。

2.3.8 回收率实验 取美他多辛栓剂(批号 20130301)3份,按2.3.2项下方法制成供试品溶液(已知含量按峰1计算为51.896 8 μg/ml),精密加入美他多辛对照品适量，制备成低、中、高3种浓度(40.4、60.6、80.8 μg/ml)的供试品溶液，按2.3.1项下色谱条件进样分析，按峰1计算含量及回收率，结果3种浓度溶液中美他多辛的加样回收率分别为(99.97±0.032)%、(99.91±0.076)%和(99.86±0.046)%(n=3)。

2.3.9 样品测定 取3个批次(批号20130301、20130302、20130303)的美他多辛栓剂，按2.3.2项下方法制备成供试品溶液，进样分析，按美他多辛峰1计算含量。结果3个批次栓剂中美他多辛的标示量分别为(99.98±0.015)%、(99.96±0.031)%和(99.58±0.60)%(n=3)。

3 讨 论

3.1 基质选择 美他多辛作为一种保肝药，制备成栓剂，可以减少肝脏的首关效应。36型混合脂肪酸甘油酯分低羟值和高羟值两种，低羟值混合脂肪酸甘油酯含游离羟基少，化学性质稳定，后硬化效应较小，单独使用比较适合含活性物较少的栓剂；而高羟值混合脂肪酸甘油酯单独使用比较适合含活性物较多的栓剂，但后硬化效应较大。因此，本研究采用1/3高羟值脂肪酸甘油酯与2/3低羟值脂肪酸甘油酯混合作为基质制备栓剂。

3.2 栓剂制备 将高、低羟值的混合脂肪酸甘油酯于70 ℃水浴加热，开始熔化后再加入美他多辛原料药，边加边搅拌，使药物均匀分散在基质中，可以避免栓剂出现表面不光滑、凹陷等现象。

3.3 溶剂的选择 美他多辛极易溶于水，因此采用流动相(0.1%磷酸溶液)作为样品溶剂，可以减少溶剂对主药吸收峰的干扰。制备供试品溶液时，混合脂肪酸甘油酯不溶于水，将供试品加入0.1%磷酸溶液中，水浴加热，油水分离，美他多辛迅速溶解，再趁热过滤，即可得到供试品溶液。

3.4 流动相的确定 有文献报道[1]以乙腈-0.2%磷酸(1∶99)为流动相，用HPLC法测定美他多辛及其相关物质。考虑到流动相pH对色谱柱的影响，本研究以乙腈-0.1%磷酸溶液(1∶99)为流动相。

3.5 数据处理 在前言中已经提到美他多辛以维生素B6和焦谷氨酸为原料合成制得,为离子对化合物。本研究采用RP-HPLC法,选择合适的流动相配比及检测波长,可同时检测到美他多辛的两个离子组分峰(按出峰时间先后依次称为峰1和峰2)。实验结果表明,采用峰1或峰2面积,均可计算美他多辛的含量，但若分别用2个峰面积计算含量,则显得很繁琐。由于峰2灵敏度较峰1低(测得的峰面积较小)[1],因此本研究采用峰1计算美他多辛的含量。

【参考文献】

[1] 程秀民,张建礼,肖盛涛，等. 美他多辛及有关物质的反相高效液相色谱法测定[J].中国新药杂志,2002,11(10):780-782.

Cheng XiuMin,Zhang JianLi,Xiao ShengTao,etal.Determination of metadoxine and its related substances by RP-HPLC[J].Chin J New Drugs,2002,11(10):780-782.In Chinese with English abstract.

[2] 崔福德.药剂学[M].7版.北京：人民卫生出版社，2011:302-303.

Cui FuDe.Pharmaceutics[M].7th ed.Beijing:People’s Health Press,2011:302-303.In Chinese.