胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液差异蛋白组学研究

胡和平

胰腺癌与慢性胰腺炎的胰液差异蛋白组学研究

胡和平

目的 观察并探讨胰腺癌与慢性胰腺炎患者的胰液差异蛋白组学情况。方法 选取自2012年6月～2013年6月，湖南省郴州市第一人民医院消化内科所收治的人胰液标本共计20例作为研究对象。12例标本为慢性胰腺炎患者，划分为慢性胰腺炎组，8例标本为胰腺癌患者，划分为胰腺癌组。对双向电泳方法下，慢性胰腺炎、胰腺癌患者所对应的可重复蛋白质点数值进行对比，观察银染处理后，表达量较高4个差异蛋白质点的质谱情况。结果 胰腺癌患者可重复性蛋白质为81.00%，慢性胰腺炎患者可重复性蛋白质为82.00%，2组患者对比数据差异无统计学意义；胰腺癌患者丝氨酸蛋白酶2前蛋白原、胰腺相关蛋白反应检出数值明显高于慢性胰腺炎患者；弹性蛋白酶3 B前蛋白原、糜蛋白酶原B前体检出数值明显低于慢性胰腺炎患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胰腺癌、慢性胰腺炎患者胰液蛋白质谱表达存在明显差异，可将其作为临床鉴别诊断胰腺癌、慢性胰腺炎疾病的主要依据。

胰腺癌；慢性胰腺炎；胰液差异蛋白组学

胰腺癌疾病发病初期病情相对比较隐匿，恶性程度高，早期诊断不够精确，从而致使本病患者预后较差，死亡率高[1-3]。为进一步提高临床对胰腺癌、慢性胰腺炎疾病的鉴别诊断质量，本研究选取自2012年6月～2013年6月湖南省郴州市第一人民医院消化内科所收治的12例慢性胰腺炎人胰液标本以及8例胰腺癌人胰液标本作为研究对象，利用蛋白质组学技术进行对比分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2012年6月～2013年6月湖南省郴州市第一人民医院消化内科所收治的人胰液标本共计20例作为研究对象。通过临床指征合并病理学检查的方式诊断：12例标本为慢性胰腺炎患者的分为慢性胰腺炎组，8例标本为胰腺癌患者的分为胰腺癌组。慢性胰腺炎组中，男8例，女4例，年龄41～68周岁，平均年龄为（48.9±2.3）岁，患者病程1～32个月，平均病程为（12.5±1.6）个月；胰腺癌组中，男5例，女3例，患者年龄45～65周岁，平均年龄（47.2±1.9）岁，患者病程1～30个月，平均病程（10.9±0.8）个月。2组患者基本资料对比差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法 20例人胰液标本均通过逆行胰胆管造影术中防止鼻胰管引流方式获取，4.0℃状态下进行离心处理，取上清备用，基于Bradford方法进行蛋白质浓度测定，分装后在-80.0℃状态下进行保存。双向凝胶电泳参考胶制备方法为：取胰腺癌患者适量体积胰液进行混合，控制标准为：胰腺癌胰液中单体胰液所对应蛋白质含量均等。按照同样方法制备慢性胰腺炎患者所对应的双向凝胶电泳参考胶。取混合胰液（控制标准为150.0 ug蛋白质）加入4×混合胰液体积的三氯乙酸/丙酮，充分振荡后放置12.0 h，并在4.0℃状态下进行离心，剔除上清。沉淀物使用冷丙酮单独离心，真空干燥10.0 min，加入1.0 mmol/L浓度苯甲基磺酰氟，静置备用。上样液中对胶条进行水化反应，持续时间为14.0 h，在17.0℃状态下进行等电聚焦处理。观察溴酚蓝指示剂达到底部边缘后停止电泳反应，银染下给予扫描（扫描期间分辨率控制标准为300.0 dpi），进行图像分析。后取部分表达量较高差异蛋白质点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析，观察分析结果。

1.3 观察指标 对双向电泳方法下，慢性胰腺炎、胰腺癌患者所对应的可重复蛋白质点数值进行对比，观察银染处理后，表达量较高4个差异蛋白质点的质谱情况。

1.4 统计学方法 本文数据使用SPSS 17.0软件进行分析与计算，正态计量资料以“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料以百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 双向电泳分析结果对比 本组20例人胰液标本均通过逆行胰胆管造影术中防止鼻胰管引流方式获取，胰流量取值在38.0～200.0 mL，蛋白质浓度取值在0.9～4.5 g/L。基于PD Quest图像分析软件，单块胶条所对应蛋白质点在272～285个。胰腺癌患者可重复性蛋白质为81.00%，慢性胰腺炎患者可重复性蛋白质为82.00%，2组患者对比数据差异无统计学意义（见表1）。

表1 2组患者等量混合胰液自身比较可重复性蛋白质点数据对比

2.2 胰液蛋白质差异表达 银染反应下，共检出表达量较高4个差异蛋白质点。胰腺癌患者丝氨酸蛋白酶2前蛋白原、胰腺相关蛋白反应检出数值明显高于慢性胰腺炎患者；弹性蛋白酶3 B前蛋白原、糜蛋白酶原B前体检出数值明显低于慢性胰腺炎患者，差异有统计学意义（P＜0.05，见表2）。

表2 胰液蛋白质差异表达数据对比

3 讨论

有关研究证实，慢性胰腺炎可作为胰腺癌疾病的危险因素之一[4-5]。特别是对于病程在10年以上的慢性胰腺炎疾病患者而言，多将其作为诱发胰腺癌的高风险因素。本病患者胰液内肿瘤特异性蛋白质含量丰富[6]，可能由出现癌变的上皮细胞分泌至胰液当中。通过对双电泳以及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析的方式，能够对胰腺癌患者以及慢性胰腺炎患者在胰液中的差异表达蛋白质进行有效的鉴定。本研究中胰腺癌患者丝氨酸蛋白酶2前蛋白原、胰腺相关蛋白反应检出数值明显高于慢性胰腺炎患者；弹性蛋白酶3 B前蛋白原、糜蛋白酶原B前体检出数值明显低于慢性胰腺炎患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。

同时，有关研究证实，对于胰腺癌患者而言，PRSS 2基因在癌变细胞中的表达异常增高，主要是受K-ras癌变基因激活后的下游目标机制影响所致，其在肿瘤的侵润转移方面中作用表现突出，为此使得该蛋白质表达在胰腺癌患者胰液标本中增高显著（多可达到200%以上）[7-8]。

综上所述，胰腺癌、慢性胰腺炎患者胰液蛋白质谱表达存在明显差异，可将其作为临床鉴别诊断胰腺癌、慢性胰腺炎疾病的主要依据。

[1] 朱峰，许国铭，李兆申，等.人胰液蛋白质组的双向电泳方法初步研究[J].中华肝胆外科杂志，2009，15(3):170-172.

[2] 朱峰，李兆申，高军，等.人胰腺癌胰液蛋白质谱差异表达初步分析[J].中华消化杂志，2008，28(3):145-147.

[3] 高飞，张伟化，刘枫，等.胰液中人Hedgehog相互作用蛋白基因CpG岛甲基化状态及意义[J].中华胰腺病杂志，2009，9(3):190-192.

[4] 高海晋，许翠萍，杨荣，等.恶性肿瘤患者血清骨形态发生蛋白2、4、5、6的水平变化与临床意义[J].当代医学，2012，18(24):1-3.

[5] 卢德权.尿胰蛋白酶原-2和C-反应蛋白在急性胰腺炎诊断中的意义[J].当代医学，2010，16(7):45.

[6] 尹金柱，于丰彦.急性胰腺炎病程中TLR 4/NF-κB炎症反应动态作用研究[J].中国当代医药，2012，19(36):7-9.

[7] 李帅军,王旺河.外引流胆汁和胰液回输对胰十二指肠切除术后患者的影响[J].中国医师杂志,2012,14(9):1246-1248.

[8] 王锋,王兴鹏.胰腺癌的蛋白质组学研究进展[J].胃肠病学和肝病学杂志,2011,20(4):388-392.

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.33.029

湖南 423000 湖南省郴州市第一人民医院肝胆外科（胡和平）