新疆几种葱属植物质量研究

赵东升， 耿 晶， 张海波， 李新霞， 陈 坚

(1新疆埃乐欣药业有限公司, 乌鲁木齐 830013； 2新疆医科大学药学院， 乌鲁木齐 830011)

葱属(Allium)植物旧属百合科(Liliaceae)，现属于葱科(Alliaceae)[1]，主要以嫩叶、假茎、鳞茎、花为食用部位，其历史悠久、药食两用。具有葱蒜味的多年生草本植物，包括蒜(A.SativumL.)、葱(A.FistulosumL.)和韭(A.TuberosumRottl.exSpreng.)类。

葱属植物含有硫化物[1]、甾体皂苷[2]、氨基酸类[3]、黄酮类化合物[4]和糖类[5]等丰富的生物活性物质，具有抗菌[6]、抗血小板聚集[7]、抗肿瘤[8]、抗氧化[1]、降低胆固醇[9]、排铅[10]等多种作用，其中含硫化合物多存在于该属植物的挥发油中，是其具有特征性气味的主要原因。葱属植物以其资源丰富及显著的食用价值、药用价值、保健作用，已成为目前和未来食品、保健品和药品开发和利用的重点。目前多采用含硫氨基酸-蒜氨酸等氨基酸类成分来对葱属植物进行质量控制[3]，又因同属植物具有很多相同的活性成分，所以本研究采用薄层色谱鉴别常见几种不同葱属植物中氨基酸类成分，同时采用高效液相色谱法测定其中蒜氨酸含量，了解其各自的化学成分特征，以期为更科学地研究和开发葱属植物提供依据。

1 仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪(e2690，美国Waters公司)，紫外检测器(2487，美国Waters公司)，色谱柱(Hypersil BDS C18，4.6 mm×250 mm，5 μm，大连依利特公司)，分析天平(BS110S，德国Sartorius公司)，分析天平(XS205，瑞士Mettler-Teledo公司)，微电脑微波化学反应器(WBFY-205，巩义市予华仪器有限责任公司)。

1.2试药蒜氨酸对照品(批号：AL080430，熔点：162℃，含量：98%，新疆埃乐欣药业)，三氟乙酸(吴江桃源试剂厂，分析纯)。新疆(吉木萨尔)大蒜购自新疆吉木萨尔县当地市场，红皮洋葱、黄皮洋葱、韭菜、韭苔、蒜苔、小葱、山东大蒜和河南大蒜均购自乌鲁木齐当地市场，沙葱、薤白采自乌鲁木齐野外。

2 方法与结果

2.1薄层鉴别本课题组建立的葱属植物大蒜的薄层鉴别方法[3,11]对常见几种葱属植物进行薄层鉴别。

2.1.1 供试品溶液制备 分别精密称取去皮大蒜样品约10 g，去皮洋葱、韭菜、沙葱、小葱、韭菜和薤白约20 g，置于100 mL锥形瓶，加水15 mL，微波(P 50 档，200 W)1.5 min灭酶，转移至匀浆杯，匀浆1 min，浆液转移至锥形瓶，适量水(65 mL)润洗匀浆杯，转入锥形瓶，超声(P 100，200 W)20 min，放冷至室温，转移至100 mL容量瓶，水定容至刻度，10 000 r/min离心15 min，取上清液为供试品溶液。

2.1.2 对照品溶液制备 分别精密称取精氨酸、蒜氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸和S-烯丙基-L-半胱氨酸对照品各适量，加水溶解并定容，制成 1 mg/mL 的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3 不同葱属植物薄层鉴别 照《中国药典》薄层色普法(附录Ⅵ B)试验，分别吸取不同葱属植物样品溶液6 μL和混合对照品溶液8 μL，点于同一薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1 )为展开系统展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5 min至斑点清晰，可见光下检视(图1)，经软件处理后得不同葱属植物可见光薄层色谱图的反色效果图(图2)。不同葱属植物中氨基酸类成分薄层色谱图存在较大差异，特别在蒜氨酸、精氨酸等几个特征性成分位置差异明显。

图1 可见光下不同葱属植物薄层色谱图

图2 不同葱属植物可见光薄层色谱图的反色效果图

2.2含量测定

2.2.1 对照品储备液制备 精密称取98.0%蒜氨酸对照品10.15 mg，水溶解并定容于25 mL容量瓶中，摇匀，即得蒜氨酸对照品储备液。

2.2.2 供试品溶液的制备 分别精密称取去皮大蒜样品约10 g，去皮洋葱、韭菜、沙葱、小葱、韭菜和薤白约20 g，置于100 mL锥形瓶，加水15 mL，微波(P 50 档，200 W)1.5 min灭酶，转移至匀浆杯，匀浆1 min，浆液转移至锥形瓶，适量水(65 mL)润洗匀浆杯，转入锥形瓶，超声(P 100，200 W)20 min，放冷至室温，转移至100 mL容量瓶，水定容至刻度，10 000 r/min离心20 min，取上清液2 mL置于10 mL容量瓶中，水稀释并定容至刻度，即得供试品溶液。

2.2.3 色谱条件 色谱柱：Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：0.04 %三氟乙酸水溶液；流速：0.5 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：UV 214 nm；进样量：10 μL。

2.2.4 方法专属性及系统适用性 在上述色谱条件下进样分析，蒜氨酸对照品溶液、大蒜样品溶液HPLC色谱图(图3、4)，以蒜氨酸峰计算理论塔板数，以蒜氨酸峰与相邻峰计算分离度。结果，以蒜氨酸峰计算理论塔板数为10 023，蒜氨酸峰与相邻峰的分离度为3.46，蒜氨酸峰的拖尾因子为1.01。

图3 蒜氨酸对照品HPLC色谱图

图4 新疆大蒜样品HPLC色谱图

2.2.5 线性与范围 分别移取蒜氨酸对照品贮备液0.50、1.00、3.00、4.00、5.00 mL置10 mL容量瓶中，流动相稀释并定容至刻度，摇匀即得蒜氨酸浓度为19.91、39.83、119.49、159.32、199.15 μg/mL系列标准溶液，微孔滤膜过滤，进样。以蒜氨酸浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线得：A=16 699C-1 911(r=0.999 9)。结果表明蒜氨酸在19.91～199.15 μg/mL浓度范围内，与测定峰面积呈良好的线性关系。

2.2.6 方法学验证

2.2.6.1 精密度试验 分别移取蒜氨酸对照品贮备液0.50、3.00 、5.00 mL置10 mL容量瓶中，流动相稀释并定容至刻度，摇匀，即得高、中、低3个浓度样品。每隔1小时进样1次，共重复5次，日内精密度RSD分别为0.90%、0.31%、0.63%，表明日内精密度良好。每天进样1次，共重复5 d，日间精密度的RSD分别为1.16%、0.30%、0.24%。

2.2.6.2 加样回收率试验 精密移取河南大蒜样品0.50 mL，共9份，置10 mL容量瓶中，加入蒜氨酸对照品贮备液0.50、2.00、4.00 mL，各3份。流动相稀释并定容至刻度，摇匀，配制成高、中、低浓度样品。微孔滤膜过滤，进样，记录色谱图，计算回收率。结果，平均加样回收率为99.23%，RSD为2.01%。

2.2.6.3 重复性试验 取同一批河南大蒜样品，按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别测定其含量。结果，以鲜重计算蒜氨酸含量的RSD为5.9%(n=6)。

2.2.6.4 稳定性试验 取1份河南大蒜供试品溶液，室温放置，分别于0、2、4、8、12 、24 h进行测定。结果，蒜氨酸峰面积的RSD为1.31%(n=6)，表明大蒜供试品溶液在室温下24 h内保持稳定。

2.2.7 样品测定 按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，分别测定其含量。同时参照文献[3,12-13]方法测定不同葱属植物中水分含量，并以干重计算蒜氨酸含量，结果不同葱属植物中的蒜氨酸含量存在较大差异，洋葱、小葱和薤白未检测到蒜氨酸，新疆大蒜中蒜氨酸含量最高(4.74%)，见表1。

蒜氨酸含量的计算公式如下：

蒜氨酸含量

注：“-”表示未检测到。

3 结论

葱属植物是国际上不同地区、不同民族喜欢的药食两用植物，通过调查新疆不同民族人群日常生活中喜欢食用大蒜、洋葱、沙葱、大葱、韭菜等几种不同葱属植物。

参照文献报道的大蒜薄层鉴别方法和大蒜中蒜氨酸的含量测定方法对新疆常见的几种不同葱属植物进行薄层鉴别和含量测定研究。从结果中可以看出不同葱属植物的薄层色谱图存在较大差异，特别是在蒜氨酸斑点位置；不同葱属植物中的蒜氨酸含量也存在较大差异，特别是洋葱、小葱和薤白在高效液相色谱条件下未检测到蒜氨酸。

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