维药铁力木的生药学特征及其不同萃取部位抗血小板聚集作用研究

艾力克木·吐尔逊， 热娜·卡斯木， 王金辉， 木太力普·吐逊

(1新疆医科大学药学院, 乌鲁木齐 830011; 2乌鲁木齐市中医医院, 乌鲁木齐 830000)

铁力木是藤黄科铁力木属植物铁力木(mesuaferreaLinn.)的干燥花蕾，分布于中国云南、广西、广东至热带北缘、印度、缅甸、斯里兰卡、印尼、泰国及马来西亚等地，是维吾尔医常用药材，其维吾尔名为那尔米西克，常用于湿寒性或黏液质性疾病，如寒性心虚、抑郁症、神经衰弱及湿性胃虚等[1]。铁力木不仅被维吾尔医药记载，还被国内的傣族医药和国外的巴基斯坦、泰国等国家的传统医药中记载。目前国内外对铁力木的研究不多见，国内主要研究了铁力木种子的化学成分和活性、铁力木树的引种和栽培等方面，国外一些学者从铁力木中分离得到了几种香豆素类化合物[2]。研究表明，铁力木具有较强的抗癌和抗氧化活性[3-5]。但尚未见有关维药铁力木的生药学研究及其抗血小板聚集作用的研究报道，因此本研究维药铁力木生药学特征及其不同萃取部位的抗血小板聚集作用，旨在为其鉴别和应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1仪器薄层色谱自动点样仪(Linomat5瑞士 CAMAG公司)，BC-2300准全自动三分群血液细胞分析仪(深州迈瑞生物医疗电子股份有限公司)，490-4D血小板凝聚仪(CHRONO-LOG，USA)，TDL-5A离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司)，薄层色谱摄像仪(Reprostar3瑞士 CAMAG公司)，OLYMPOSBH-2显微镜及莱卡数码显微镜，SARTORIUS AI104电子天平。

1.2材料药材铁力木由新疆维吾尔自治区维吾尔医院药房提供，经新疆维吾尔自治区维吾尔医院制剂中心质检部鉴定为藤黄科铁力木属植物铁力木(mesuaferreaLinn.)的干燥花蕾(批号：201210418)，薄层用硅胶G板(青岛海洋化工集团公司)，齐墩果酸标准品(中国食品药品检定研究院，批号：110709-201206)，凝血酶(CASRN9002-04-4，USA，批号：T4648)，实验中所用试剂均为分析纯。

1.3实验动物SPF级新西兰种兔，体质量为(1.8±0.5)kg，均为雄性，由新疆医科大学实验动物中心提供[生产许可证：SCXK(新)2011-0004]。

1.4性状鉴别取性状完整的药材并进行观察、照相及描述。

1.5显微鉴别[6]取1 g药材用研钵研成粉末，经80目筛，分别用水合氯醛和蒸馏水处理制成临时装片，于显微镜下观察和视频采集。

1.6理化鉴别取60 g药材粉末分成3份，分别用100 mL 95%乙醇、100 mL石油醚和100 mL蒸馏水回流提取2 h，过滤，浓缩至20 mL，按照文献[7-8 ],系统地配置和使用化学试剂，观察反应结果，初步鉴别铁力木可能含有的化学成分。

1.7薄层鉴别取7 mg齐墩果酸对照品加甲醇定容至10 mL，配成0.7 mg/mL的齐墩果酸对照溶液，取1 g药材加甲醇20 mL回流提取30 min，滤液浓缩至2 mL,此液为供试品溶液。利用高效薄层色谱技术将供试品和对照品各2 μL点在5 cm×10 cm羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G高效薄层板上，展开条件进行筛选，在选择好的展开条件下进行展开，取出晾干，喷完显色剂后在105℃的薄层加热器上加热数分钟，显色后在可见光和紫外灯(365 nm)下观察斑点颜色和位置。

1.8测定抗血小板活性(1)供试品溶液的制备:称取粉粹过的铁力木药材1 kg，加8倍的95%乙醇，在80℃水浴锅回流提取3次，合并提取液浓缩至浸膏完全干燥。总提取物与适量的水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液浓缩至浸膏备用。铁力木正丁醇和水萃取物直接用生理盐水溶解，配成适宜的浓度，石油醚和乙酸乙酯萃取物用乙醇助溶，乙醇浓度低于5%，生理盐水作为空白。(2)测定方法:采用比浊法[9-10]进行抗血小板凝聚作用的测定。每次以1只新西兰种兔作为供血动物，耳缘静脉采血，枸橼酸钠1∶9(V∶V)抗凝，1 000 r/min离心10 min 得到上层液即富血小板血浆(platelet-rich-plasma, PRP)，余下部分以3 000 r/min离心15 min，得到贫血小板血浆(platelet-poor-plasma, PPP)，用PPP 调零和稀释 PRP中的血小板数至200×109/L，PPP调零，以270 μL PRP加30 μL受试样品，37℃条件下预热5 min，加入凝血酶(凝血酶终浓度为10 U/mL)，测定由凝血酶诱导的血小板聚集率。血小板聚集率越高，则说明受试样品抗血小板聚集能力越弱。在490-4D型血小板聚集仪上进行血小板聚集测定，观察5 min视其最大聚集率，计算最大抑制率 (%)=(对照管血小板聚集率-样品管血小板聚集率)/对照管血小板聚集率×100%。

2 结果

2.1药材形状本品略呈研棒状，长1～2 cm，表面光滑，质地硬而脆。花冠圆球形，直径0.3～0.5 cm，褐黄色。花瓣4个，倒卵形，重覆瓦状抱合，花瓣彼此分离，展开时呈“十”字形。花瓣内为雄蕊群，搓碎后可见众多棕褐色细长的花丝，花药以基着式着生在花丝上。气香，味微苦。

2.2粉末结构本药材粉末中花粉粒数量较多，其中有1～3个萌发孔的、无萌发孔的和刺状散孔的花粉粒，三孔花粉粒数量最多,其萌发孔多位于赤道上，除了有些三孔花粉粒形状接近三角形以外其他的均为圆形，花粉粒直径27～38 μm。导管数量也较多，都是螺纹导管，导管螺旋直径为9～15 μm。草酸钙蔟晶较多，分布于药材粉末的每一个部位，草酸钙蔟晶有球形的、多角形星状的和方形的，直径为6～20 μm。腺毛特别少，腺头为单个细胞，腺柄由多个细胞组成。非腺毛有单细胞非腺毛和多细胞非腺毛，其中多数为多细胞非腺毛，有的呈镰刀状，顶端尖锐或稍钝。气孔为平轴式气孔，直径为21～26 μm。薄壁细胞呈类方形或多边形，排列整齐，见图1。

1:花粉粒；2:导管；3:草酸钙蔟晶；4:非腺毛；5:气孔；6:薄壁细胞

2.3理化鉴别结果通过系统定性试验结果得知, 维药铁力木可能含有甾体、油脂类、黄酮、醌类、酚类、强心苷、香豆素、有机酸、糖类及苷类成分，见表1。

表1 铁力木提取物的定性试验结果

2.4薄层鉴别通过一系列比较后选定固定相为高效硅胶G板，展开系统为石油醚-乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸(10∶1∶1∶0.2)，显色剂为10%硫酸,在此条件下供试品和对照品Rf值为0.48，喷完显色剂后在可见光下相同的位置出现了紫色的斑点，将喷完显色剂的板子置紫外灯(365 nm)下观察，同样在相同的位置出现了黄色荧光斑点，见图2。

A:齐墩果酸对照品; B:铁力木供试品

2.5抗血小板聚集实验结果铁力木正丁醇萃取部位由凝血酶诱导的抗血小板聚集作用最强, 10 μg/mL表现出显著的抑制作用(P<0.01)，其抑制能力与同浓度的其他组分比较也较为明显(P<0.05)；水、乙酸乙酯、石油醚萃取部位也具有强的抗血小板聚集作用，其10 μg/mL抑制作用显著(P<0.01)。血小板聚集率与各组分质量浓度之间存在着明显地剂量依赖性，见表2。

表2 铁力木不同萃取部位对血小板聚集的影响

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3 讨论

显微鉴别、理化鉴别包括薄层鉴别为药材真伪鉴别的重要依据，是《中国药典》中药质量评价的基本方法。本研究显微鉴别、理化鉴别实验表明，铁力木(mesuaferreaLinn.)在其粉末结构和薄层色谱方面具有可作为鉴别依据的特征，其主要的粉末显微特征为花粉粒、草酸钙蔟晶及导管，其数量极多，其中花粉粒多为球形三孔花粉粒，其萌发孔多位于赤道上，花粉粒直径为27～38 μm。草酸钙蔟晶有球形的、多角形星状的和方形的，直径为6～20 μm。导管均为螺纹导管，导管螺旋直径为9～15 μm。在其薄层鉴别实验，展开系统为石油醚-乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸(10∶1∶1∶0.2),显色剂为10%硫酸，此条件下齐墩果酸对照品和铁力木供试品在Rf值为0.48处出现了紫色斑点。以上特征可作为药材真伪鉴别的重要参考依据。体外实验表明铁力木正丁醇萃取部位的抑制凝血酶诱导的血小板聚集活性最强。现代研究认为血小板聚集率可影响血粘度，血粘度及血小板聚集率等指标的异常是引发冠心病、血栓等心血管疾病的重要因素之一。因此，本课题将针对铁力木进行更进一步的跟踪分离分析及药理实验研究，为开发抑制血小板聚集及相关疾病的新药提供依据。

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