梧州地区鸭脚木蜂蜜花粉形态特征研究

梁斯雅++吴平++彭莎++黎琦

摘 要：目的：研究鸭脚木蜂蜜花粉形态特征，并为鸭脚木蜂蜜的真假鉴别建立方法。方法：通过采摘鸭脚木成熟花粉、成熟的鸭脚木蜂蜜，采用显微镜和扫描电镜对花粉形态进行观察；结果：从鸭脚木原蜜中提取花粉粒与花药中的花粉特征图比，其特征基本一致、重复性高，即鸭脚木花粉极面观为近圆形，赤道面观为椭圆形，三沟萌发孔，表面有颗粒状纹饰。结论：本研究为采用花粉检验法判定梧州地区鸭脚木蜂蜜的种类、判断真伪和纯度提供了依据。

关键词：鸭脚木；花粉粒；形态；扫描电镜；显微检验

中图分类号： S896.4 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170832014

前言

鸭脚木蜂蜜（Schefflera octophylla （Lour.） honey），属于岭南地区特有的蜂蜜品种。梧州是广西出口蜂蜜的主要口岸，对蜂蜜实施检验始于1970年，其品种原蜜分类为春蜜、冬蜜，主要产地是梧州、苍梧、桂平[1]。梧州行政区域范围内广泛分布有鸭脚木（Schefflera octophylla Harms），而且形成规模，保证了鸭脚木花蜜在梧州地区的产量与品质。由于梧州鸭脚木为野生植物，花期为每年11月—次年1月，其中最冷月（1月）平均11.9℃温度，而梧州本地的中蜂适宜于山区、半山区生态环境饲养，在气温9℃时仍能安全采集，另外由于中蜂长期在本地进化，对本地各类蜜源植物具有独特的辨别能力，所以鸭脚木花蜜特别适合本地中蜂采花酿造[2]。因为该花蜜在其它季节不能酿造，所酿造的蜂蜜多年来民间称为“梧州冬蜜”。酿蜜季节独特，是梧州冬季独有的蜜种。

1 鸭脚木蜂蜜的发展与研究进展

目前，我国虽然发布有GB/T 23194-2008《蜂蜜中植物花粉的测定方法》、GH/T 18796-2012《蜂蜜》、GB/T 30359-2013《蜂花粉》等标准，但是其中并没有关于鸭脚木花粉细胞形态、鸭脚木蜂蜜中花粉的形态特征及其检测方法的介绍 [4-6]。因此，有必要对鸭脚木花粉形态及其检测方法进行探索和研究。

2 鸭脚木花粉细胞形态的显微镜和扫描电镜观测

2.1 显微镜观察的材料与方法

2.1.1 实验材料

2014年、2015年，分别于梧州地区鸭脚木花集中成熟地区，在12月份盛花期采集成熟花药作为观察的材料。

2.1.2 实验方法

按GB/T 30359-2013标准中单一品种蜂花粉定性鉴别方法进行。花粉从刺破的成熟花药中释放得到。

2.1.3 计算方法

将采集的花粉分成3份，每份随机取10粒花粉进行大小的测量和统计，取其平均值和变异系数表示变化幅度。

2.1.4 观察与分析

梧州地区采集的在显微镜下观察到的花粉形态无明显区别（如图1所示），鸭脚木花粉为白色，花粉细胞呈近似球形，赤道面观为椭圆形，平均直径为 19.43um，变异系数为3.02%，极面观为近圆形，平均直径为21.40um，变异系数为3.17%，表面有颗粒狀。

2.2 扫描电镜下观察的材料与方法

2.2.1 材料与方法

实验材料与4.1.1相同，将样品先用镊子将花药取出后，放入到PE小管中，干燥48h后，收集管内自然散出的花粉作为扫描电镜观察的材料，为了保证其纹饰的真实性，表面未经任何试剂处理。将待观察的样品用导电胶布固定在载物台上，使用TM3000台式扫描电子显微镜进行真空图像扫描，调节5kv，15kv不同的高压状态来观察样品，主要在×500、×2000、×10000倍数的视野下拍摄其花粉的形态、赤道面观、极道面观以及外壁纹饰等形态，并测量其极轴长（P），赤道轴长（E），计算花粉粒大小，以极轴长乘以赤道轴长（P×E）表示，计算极轴长和赤道轴长的比值（P/E），表示其形状。P/E在0.4～0.8为扁圆形，P/E在1.0～2.0为椭圆形，P/E在0.8～1.0为长椭圆形[7]。观察花粉的赤道面观，极面观形状，萌发器官和外壁纹饰特点， 用专业术语来描述。

2.2.2 观察与分析

研究中鸭脚木花粉形态上表现了遗传的稳定性，见图2（a），主要表现为：

极轴长（P）平均长度为21.489um，赤道轴长（E）平均长度为18.851um，如图2（a）中所示。由此可计算P/E平均比值为1.14，所以，根据上文所述，鸭脚木花粉应为椭圆形。

据研究表明花粉形态的演化主要反映在萌发器官和孢粉壁2个方面，而被子植物花粉萌发孔可大致分为2个基本的类型，具有单槽衍生和三沟衍生型[8]（王开发和王宪曾，1983）。结合图2（b）的观测结果，鸭脚木花粉的类型应为三沟衍生型。

从图2（b）中观察可知，鸭脚木花粉的三孔萌发沟并延伸达两级，从图2（c）中可观察到表面为颗粒状纹饰，较为明显，且颗粒大小不一。

3 鸭脚木蜂蜜中花粉的形态特征观察

3.1 实验材料与方法

3.1.1 实验材料准备

采集三个鸭脚木花集中成熟地区的蜂蜜，分成三个实验样品，根据GB/T 23194-2008《蜂蜜中植物花粉的测定方法》中的测定步骤进行花粉粒提取。

3.1.2 方法

将3个样品搅拌均匀→置于不超过60℃的水浴中温热→样品融化后搅匀冷却至室温→取蜜样25g→加入约40℃的50mL蒸馏水→溶解和稀释→倒入离心管中→离心10min后弃去4/5上清液→加入5mL乙酸浸泡2h→弃去上清液→加入乙酸酐和硫酸混合液（9：1）→放入80～90℃水浴加热7min→离心10min，弃去上清液→再离心水洗3次→留下5mL的样液进行制片→吸取1滴放在载玻片→盖上盖玻片→用滤纸吸干多余液体→放在蔡司显微镜下从低倍镜到高倍镜下观察→用共聚焦显微系统进行拍摄其形态。endprint

3.1.3 鸭脚木蜂蜜的花粉形态鉴定

对所采集的3个集中地区蜜样分别编号为1～3，对其形态进行镜检和显微镜摄像。结果显示（見图3），这3个地区所采集的蜂蜜中的花粉形态单一，镜检下3个样品都只发现形态一致的同一种花粉形态，极面观为近圆形，表面有明显的颗粒纹饰。

4 结论与分析

本文以梧州地区的鸭脚木花粉作为研究对象，对3个花期集中地区的花粉形态以及蜂蜜中的花粉形态进行提取和鉴别，发现了鸭脚木花粉的形态特征，电子显微镜下花粉的纹饰和轮廓，主要讨论有以下几点。

3个蜂蜜样品中提取出的花粉图谱与文中2.1.4自然采集，刺破花药中获取的花粉图谱，在400倍数的显微镜下观察，其形态、轮廓、包括表面有明显颗粒纹饰等特征一致，并且3个样品都具有重复性高的特点。依据其图谱中形态特征，这些样品提取出来的花粉图谱与鸭脚木花粉是同一种花粉的形态，即为梧州地区鸭脚木花粉形态特征图谱。

3个蜂蜜样品中提取出的花粉图谱具有重复性高的特点，从图谱中鉴别可得知，3个样品的形态、大小、轮廓、表面纹饰一致，且在显微镜观察下未能提取和发现其他蜂蜜的蜂花粉。这与在梧州地区，被子植物门，双子叶植物纲，五加科的鸭脚木是梧州地区（指岭南一带）冬季的主要蜜源之一[9]。同时，在文献中亦记载了鸭脚木是梧州地区冬季原蜜的主要品种[1]。所以，3个蜂蜜样品纯度高、重复性好主要与采集在花蜜集中成熟区，冬季花种单一等原因密不可分，样品的结果具有代表性好，重复性高的特点，保证了试验结果的准确性。也为将来制定鸭脚木花粉检测方法提供参考依据。

花粉检验法可以作为生产实践中鉴定真伪蜜的科学有效方法[10]。天然蜂蜜的花粉粒浓度的确定，还需要做更多的实验来确定。文中从鸭脚木蜂蜜中提取的花粉粒在图谱中含量较少，与试样消化适宜时间，消化液使用的剂量相关，还需做进一步的实验数据确定最适宜的消化条件，得到更好的天然蜂蜜中花粉粒浓度的确定。

本研究为采用花粉检验法判定梧州地区鸭脚木蜂蜜的种类、判断真伪和纯度提供了实验依据，对辨别鸭脚木蜜源的真伪，增加经济效益，产品质量提升具有很大的意义。

参考文献

[1]广西壮族自治区地方志编纂委员会编.广西通志·出入境检验检疫志（1917-2003）[M].南宁：广西人民出版社，2007年版：29.

[2]梧州市长洲区地方志编纂委员会编.梧州市郊区志[M].南宁：广西人民出版社，2008年版：190.

[3]赵文明，颜志立.单一花种蜂蜜的特点与讨论[J].蜜蜂杂志，2014（10）：13-14.

[4]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.中国国家标准化管理委员会.GB/T 23194-2008 蜂蜜中植物花粉的测定方法[S].北京：中国标准出版社，2008：1-9.

[5]中华全国供销合作总社.GH/T 18796-2012 蜂蜜[S].北京：中国标准出版社，2012：1-7.

[6]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.中国国家标准化管理委员会.GB/T 30359-2013蜂花粉[S].北京：中国标准出版社，2013：1-24.

[7]刘鹏，马利超，王宇，等.16种野豌豆属植物花粉形态的扫描电镜观察[J].草业学报，2015，24（1）：107-109.

[8]王宪曾， 王开发. 应用孢粉学[M]. 陕西科学技术出版社， 1990.

[9]张德辉.鸭脚木的花粉是什么颜色[J].中国蜂业，2016（1）：42.

[10]史琦云，贠建民.蜂蜜品质的花粉检验法研究.中国养蜂[J]，2005（2）：9-10.

作者简介：梁斯雅（1985-），广西梧州人，主要从事进出口食品检验与食品安全监督管理工作，研究方向为食品安全管理。endprint