抵挡汤对糖尿病模型大鼠下肢血管病变影响研究

高悉航，牟淑敏

（1.山东中医药大学第一临床学院2011级硕士研究生，山东 济南 250014；2.山东省中医院内分泌科，山东 济南 250011）

糖尿病下肢血管病变（vascular disease of lower extremities，VDLE）是2型糖尿病（T2DM）常见并发症之一，常可造成肢端坏疽［1］，有研究表明，ICAM-1及VCAM-1等粘附分子的过度表达与动脉粥样硬化的发生发展与有关［2］。我们以辛伐他汀及罗格列酮作为阳性对照药物，观察抵挡汤对DM大鼠一般状况、血糖变化、下肢动脉VCAM-1、ICAM-1表达的影响，探讨防治T2DM血管病变的作用机制。

1 药物与试剂

链脲佐菌素（STZ）为美国Sigma公司生产，细胞间粘附分子1（ICAM-1）（BA2189）购自武汉博士德公司，血管细胞间粘附分子1（VCAM-1）（SC-8304）购自Santa Cruz公司，马来酸罗格列酮（文迪雅）为葛兰素史克公司生产，辛伐他汀为杭州默沙东制药有限公司生产。抵挡汤（桃仁10g，水蛭10g，虻虫10g，大黄6g）药物购于山东中医药大学第一附属医院，按传统工艺制备水煎剂，减压浓缩至浓度为1g/mL，4℃保存备用。

2 动物及分组

健康Wistar大鼠100只，雄性，1月龄，质量（100.36±2.28）g，由山东中医药大学实验动物中心提供（动物合格证号为SCXK鲁2005015）。随机抽取20只作为正常对照组，其余80只作为糖尿病造模组，给予高脂饲料。实验12周后，糖尿病组大鼠尾静脉注射小剂量链脲佐菌素（STZ）30mg/kg造模，72h后尾静脉采血测血糖高于16.7mmol/L确定造模成功。除去造模未成功2只后随机分为抵挡汤组19只、辛伐他汀组20只、罗格列酮组19只和模型对照组20只。

3 实验方法

药物干预方法：抵挡汤组按照大鼠等效剂量予抵挡汤生药2.30g/（kg·d）灌胃,辛伐他汀组和罗格列酮组分别按1.80mg/（kg·d）和0.36mg/（kg·d）给药。动物自由饮水，继续原方法喂养至24周实验结束取血取材。

标本获取：实验于24周时结束，各组大鼠股动脉放血，分离血清，-20℃保存备用，用于生化指标测定。颈椎脱臼处死大鼠并解剖，取放血对侧股动脉，以4%多聚甲醛溶液固定，用于HE染色和免疫组化检测。

观察指标：石蜡切片与免疫组化测定：将留取的股动脉以4%多聚甲醛固定，洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、片厚5 um，SP法免疫组化染色，用计算机-图像分析仪将免疫组化载玻片图像通过图像采集系统以40×物镜输入，采用Image-Pro Plus5.0对图象中的阳性反应部位进行IOD分析。

统计学处理：实验数据采用SPSSl6.0统计软件包分析，数据用样本均数±标准差（）表示，采用方差分析和Dunnet’s T3检验。P<0.05为差异具有统计学意义。

4 实验结果

各组血糖比较见表1。

表1 各组大鼠血糖比较 （mmol/L ，）

表1 各组大鼠血糖比较 （mmol/L ，）

注：与正常对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.05。

组别 例数 血糖（mmol/l）第13周 第16周 第24周正常对照组 20 5.3±1.2 6.0±1.3 5.9±1.1模型对照组 20 27.9±3.6* 28.3±4.4* 27.7±3.1*抵挡汤组 19 27.3±6.6 25.4±8.3 26.1±8.3辛伐他汀组 20 28.0±2.7 27.3±6.6 26.1±7.3罗格列酮组 19 28.0±3.5* 15.0±3.6*△ 11.0±3.6*△

各组大鼠股动脉免疫组化ICAM-1和VCAM-1检测结果见表2。

表2 各组大鼠股动脉VCAM-1、ICAM-1免疫组化IOD值比较（）

表2 各组大鼠股动脉VCAM-1、ICAM-1免疫组化IOD值比较（）

注：与正常对照组比较，*P<0.01；与模型对照组比较，△P<0.05。

组别 例数 VCAM-1 ICAM-1正常对照组 20 73.0±5.2 105.5±11.6模型对照组 20 743.0±53.1* 935.3±58.2*抵挡汤组 19 647.0±47.8*△ 846.8±57.4*△辛伐他汀组 20 650.7±40.9*△ 798.5±48.3*△罗格列酮组 19 637.0±55.6*△ 759.2±51.5*△

5 讨 论

VDLD病变特点主要是动脉粥样硬化和中膜钙化［3］。随着分子免疫学的研究进展，越来越多的证据显示动脉粥样硬化过程是一个慢性炎症过程。有研究表明，高血糖可使NF-κB活化促进许多炎症基因（如粘附分子）的表达增加［4］。细胞粘附分子（cell adhesion molecule，CAM）是一类调节细胞与细胞、细胞与细胞外基质（extracellular matrix，ECM）间相互结合、起粘附作用的细胞表面跨膜糖蛋白。其中血管细胞粘附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）和细胞间粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）是研究最多的与动脉粥样硬化相关的粘附分子。

糖尿病血管病变临床常见，其病理基础是糖尿病的糖脂代谢异常导致的动脉粥样硬化、中小动脉硬化狭窄、缺血缺氧所致的微循环灌注障碍。本病属中医“脉痹”、“无脉证”等范畴。病机为瘀血阻络。治疗当以活血通络法为主。抵挡汤出自东汉张仲景《伤寒杂病论》，由大黄、桃仁、虻虫、水蛭组成，具有活血通络、逐瘀攻下功效。实验发现，糖尿病大鼠下肢动脉高度表达ICAM-1及VCAM-1，而抵挡汤可以明显抑制血管ICAM-1及VCAM-1的表达，通过抑制血管ICAM- 1及VCAM-1的表达，发挥防治糖尿病性动脉硬化的作用。

［1］Deshpande AD，Harris-Hayes M，Schootman M.Epidemiology of diabetes and diabetes-related complications［J］.Phys Ther，2008，88（11）：1254-1264.

［2］Hwang SJ，Ballantyne CM，Sharrett AR，et al.Circulating adhesion molecules VCAM-1，ICAM-1 and E-selectin in carotid atherosclerosis and incident coronary heart disease：The Atherosclerosis Risk In Communities （AR1C） study ［J］.Circulation，1997，96（12）：4219-4225.

［3］汤绍芳，卫红艳，张鹏.IL-6启动子基因多态性与2型糖尿病下肢血管病变的关系［J］.中国全科医学，2010，5（13）：1531-1534.

［4］Fang L，Wei H Mark KH，et al.Marker of low-grade inflammation and soluble cell adhension molecules in Chinese patients with coronary artery disease ［J］.Cardiol，2004，20（14）：1433-1438.