HPLC 法测定协日嘎四味汤散中姜黄素的含量

丁 红 赵俊苹

(1.呼市药品不良反应和药物滥用监测中心，内蒙古 呼和浩特 010020；2.呼市食品药品检验所，内蒙古 呼和浩特 010020)

协日嘎四味汤散收载于《卫生部药品标准》蒙药分册，是由姜黄、黄柏、栀子、蒺藜4 味药组成的散剂，姜黄在处方中所占比例较大，为主药，查找有关文献［1］，参照《中国药典》2010 年版一部［2］“姜黄”项下的含量测定方法，以姜黄素作为指标成分，进行含量测定方法研究，进行了HPLC 含量测定方法研究。经方法学考察及阴性对照试验，表明此法专属性较强，得到了比较满意的分析结果。

1 仪器与试药

1.1 仪器: 岛津LC-20A，SPD-M20A 型检测器，LCsolution 色谱工作站。

1.2 试剂与试药及样品: 姜黄素对照品(批号11637 -201205)中国药品生物制品检定所;协日嘎四味汤散由内蒙古蒙医医院提供。乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件: 色谱柱: 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用AlltimaTMC18 柱(4.6 ×250mm)及资生堂MGⅡC18 柱(4.6 ×250mm);流动相: 乙腈-4%冰乙酸溶液(48∶ 52);流速: 1.0mL/min;检测波长: 430nm;理论板数按姜黄素峰计不得低于5000。

2.2 供试品溶液的制备: 取本品约0.7g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，精密量取上清液1mL，置20mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 对照品溶液的制备: 精密称取姜黄素对照品适量，加甲醇制成每1mL 含10μg 的溶液，即得。

2.4 阴性对照试验: 取按处方量并以相同工艺制备的阴性对照(缺姜黄)0.7g，按含量测定项下的方法操作，进样量10L。测得结果为: 阴性对照色谱图中在与姜黄素对照品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现。表明其它成分对姜黄素的测定无干扰，见图1、2、4。

2.5 线性关系考察: 精密称取姜黄素对照品2.5012mg，置25mL 量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取1mL，置10mL 量瓶中，摇匀，即得。(姜黄素为0.0100048mg/mL)分别取1、2、5、10、15、20μL 进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果姜黄素在10.0048μg ～200.096μg 范围内呈良好的线性关系。回归方程为y=8900x-1744 r2 =1

2.6 稳定性试验: 取同一份供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h 进样测定，结果表明姜黄素在24h 内的面积积分值基本稳定不变。RSD 为0.18(%)。

2.7 重复性试验: 取同一批号(批号: 20131105 -1)供试品6 份，各取约0.7g，分别按含量测定项下方法操作，测定每份含量，结果平均含量为5. 1420mg/g，RSD 为0.82%。

2.8 加样回收试验: 取供试品(批号20131105 -1，含量5.1420mg/g)6 份，各约0.35g，精密称定，置6 个具塞锥形瓶中，分别依次精密加入姜黄素对照品溶液(姜黄素0.9012mg/mL)2.0mL，再分别精密加甲醇使成20mL，摇匀，按供试品溶液制备项下方法操作，测定每份含量，计算回收率，结果见表1。

表1 姜黄素加样回收试验结果

2.9 样品含量测定: 取本品按［含量测定］项下的方法处理并测定，4 批样品的测定结果见表2。

表2 样品含量测定

3 讨 论

3.1 检测波长的选择: 采用UV-2450 紫外可见分光光度计检测器，在190 ～700nm 波长范围扫描。结果姜黄素在430nm 处有最大吸收。结合《中国药典》2010 年版一部“姜黄”药材项下含量测定方法，选择430nm 作为检测波长。

3.2 研究表明，采用此方法操作简便，重现性好，可作为该品种的质量控制内在指标。

［1］常新全，丁丽霞. 中药活形成分分析手册［M］. 上册.学苑出版社，2002：895.

［2］国家药典委员会.中国药典［S］. 一部.2010.